本发明专利技术属于药物代谢物的化学合成技术领域，具体涉及一种阿维拉霉素体内代谢物３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸的化学合成方法。本发明专利技术的特征是，从现有“效美素”预混剂中通过反向工程得到阿维拉霉素粗品，对其纯化，通过一步反应制得３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸的粗品，对该粗品进行重结晶纯化，制得其纯品，仪器分析该合成的产品纯度达９９．５％以上。本发明专利技术的合成方法路线短，收率高，条件易控，原料价廉易得，所得产物纯度高。合成的产品不仅为阿维拉霉素的代谢研究和残留检测提供了化学对照品，也为同类化合物的合成提供了相应的工艺参考。
【技术实现步骤摘要】
,5-二氯-4-羟基-2-甲氧基-6-甲基-苯甲酸的化学合成方法
本专利技术属于药物代谢物的化学合成
，具体涉及一种阿维拉霉素体内代谢 物3，5- 二氯-4-羟基-2-甲氧基-6-甲基-苯甲酸的化学合成方法。
技术介绍
3，5-二氯-4-羟基-2-甲氧基-6-甲基-苯甲酸(DIA)为阿维拉霉素在动物体内 的代谢物，食品添加剂联合专家委员会(JECFA)和欧洲药物评审组织(EMEA)都规定了 DIA 为阿维拉霉素的残留标示物，并且规定了 DIA作为阿维拉霉素在动物体内的检测目标和其 在组织中的最大残留限量。目前无法从市场上购得阿维拉霉素原料药，只能够获得阿维拉 霉素的饲料预混剂效美素。目前国内外尚未有公司出售DIA，因此制备DIA对于阿维拉霉素 的代谢、药理毒理和残留研究具有重要意义。关于DIA的合成方法已有如下相关文献报道=Dornhagen和Scharf采用五步法 合成DIA，选用2，4_ 二羟基-6-甲基-苯甲酸甲酯为原料，经过4位羟基成醚保护，3、5位 加氯，2位羟基反应生成甲氧基，1位酯键水解生成羧酸，4位醚在金属钯催化下与氢气还 原生成DIA。反应步骤多，合成过程繁琐，消耗的试剂多；原料2，4_ 二羟基-6-甲基-苯 甲酸甲酯价格昂贵，不易获得；反应过程中副反应较多，尤其在3、5位加氯步骤中，存在只 反应一个氯的副反应，反应的总收率低；每步反应的后处理复杂，一般需要柱层析纯 化 (Dornhagen J, Scharf H D.Synthesis of dichloroisoeverninic acid. Tetrahedron 1985,41(1) 173-175)。Dornhagen和Scharf通过改进了的五步法合成DIA，也选用2，4_ 二羟基_6_甲 基_苯甲酸甲酯为原料，4位羟基酯化，3、5位加氯，2位羟基反应生成甲氧基，4位酯键水解 生成羟基，1位酯键水解生成羧基得到DIA。此反应路线长，反应过程复杂，消耗的有机试剂 多；原料2，4- 二羟基-6-甲基-苯甲酸甲酯价格昂贵，不易获得，合成目标产物的成本高； 反应过程中副反应较多，4位羟基酯化的同时2位羟基也发生酯 化反应，反应的总收 率低；此路线用到吡啶和四氯化碳等毒性较大的试剂；每步反应的后处理复杂，一般需要 柱层析纯化(Dornhagen J，Scharf H D. Improved synthesis of dichloroisoeverninic acid.Zeitschrift fuerNaturforschung，Teil B :Anorganische Chemie，Organische Chemie 1985，40B(11) :1541_1549)。Herzog等釆用0. lmol/L的NaOH溶液水解扁枝衣菌素得到DIA，但是扁枝衣菌 素已经退出市场，无法购得(Herzog H L，Meseck E，DeLorenzo S，Murawski A，Charney W, Rosselet J P.Chemistry of antibioticsfrom Micromonospora. III. Isolation and characterization of everninomicin D and everninomicin B. AppliedMicrobiology, 1965，13 (4) :515-520)o Galmarin等釆用0. lmol/L的NaOH溶液水解居拉霉素得到DIA，但 是居拉霉素也退出市场，无法购得(Galmarini 0 L，Deulofeu V. Curamycin. I. Isolation and character!zationof hydrolysis products. Tetrahedron，1961，150以上文献所述的方法存在的主要问题有1)反应的路线长，合成的过程繁琐，消耗的试剂多，且用到一些毒性较大的试剂如四氯化碳，吡啶等；2)反应过程中副反应较多，获得目标产物的收率较低；3)原料和一些试 剂价格昂贵不易获得，合成目标产物的成本教高；4)每步反应的后处理复杂，一般需要柱 层析纯化；5)扁枝衣菌素和居拉霉素已经退出市场，无法获得。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有五步反应路线长，反应过程繁琐，且扁枝衣菌素和居拉 霉素无法购得的缺陷；提供从效美素中提取阿维拉霉素，然后水解阿维拉霉素得到DIA的 简化路线；此路线方便易行，原料和试 剂价廉易得，低毒或无毒，目标产物收率较高且 纯化方法简单，所得DIA纯度高的合成方法。本专利技术的目的是分别通过如下措施达到1)将效美素的质量与二氯甲烷或乙酸乙酯或丙酮的体积以Ig 5mL Ig 15mL 的比例(优选地，效美素的质量与乙酸乙酯的体积比为Ig SmL Ig 12mL)，加入到锥 形瓶中，在10°C 50°C的条件下(优选地，在15°C 35°C条件下)浸泡5 10小时，每隔 一小时，摇晃一次。抽滤，滤液减压蒸馏得固体，然后将固体放入30°C 50°C的真空干燥箱 中干燥，即为阿维拉霉素提取的粗品。2)将干燥好的阿维拉霉素粗品先用溶剂为丙酮和水的混合溶液重结晶1 3次， 丙酮与水的体积比为1 1 5 1(优选地，体积比为3 1)；再用溶剂为乙醇和水的混 合溶液重结晶1 3次，乙醇与水的体积比为3 1 9 1(优选地，乙醇与水的体积比 为9 1)。将重结晶后的白色固体放入30°C 50°C的真空干燥箱中干燥，即得阿维拉霉素 纯品。3)在反应器中，依次加入阿维拉霉素纯品和氢氧化钠溶液，其中阿维拉霉素纯品 的质量与氢氧化钠溶液的体积比为Ig 30mL Ig SOmL (优选地，阿维拉霉素纯品的质 量与氢氧化钠溶液的体积比为Ig 50mL Ig 60mL)，所选用的氢氧化钠溶液的浓度为 0. lmol/L 4mol/L(优选地，氢氧化钠的浓度为0. 5mol/L 2mol/L)。在10°C 30°C下避 光反应，反应时间为8 24h (优选地，反应时间为10 16h)。反应完全后用等摩尔浓度的 盐酸调反应液的pH值至2 3，乙酸乙酯适量萃取三次，合并乙酸乙酯水适量反洗一次，力口 入适量的无水硫酸镁干燥5小时，抽滤，滤液减压蒸干，即得白色固体，将固体放入30°C 50°C的真空干燥箱中干燥，即得DIA粗品。4)将DIA粗品先用N，N_2_甲基甲酰胺和乙腈混合溶液重结晶1 3次，所选用 的N，N-2-甲基甲酰胺与乙腈的体积比为1 5 1 9(优选地，体积比为1 9)；再用 甲醇和水的混合溶液重结晶1 3次，所选用的甲醇与水的体积比为1 1 9 1(优选 地，甲醇与水的体积比为3 1)。将重结晶后所得白色针晶状固体放入30°C 50°C的真空 干燥箱中干燥，即得3，5- 二氯-4-羟基-2-甲氧基-6-甲基_苯甲酸化学对照品。本专利技术与现有技术相比，具有如下特点1)本专利技术是从阿维拉霉素的预混剂商品(混合物)“效美素”中提取阿维拉霉素 粗品，然后纯化后经 一步反应，获得DIA，方法简单，操作简便；2)原料易得，效美素在 市场上容易购得，且价格低廉，用到的其他的试剂价廉且低毒或无毒，获得目标本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸的化学合成方法，其特征在于包括如下步骤： １）将效美素的质量与二氯甲烷或乙酸乙酯或丙酮的体积以１ｇ∶５ｍＬ～１５ｍＬ的比例，加入到锥形瓶中，在１０～５０℃的条件下浸泡５～１０小时，每隔一小时，摇晃一次；抽滤，滤液减压蒸馏得固体，将所得固体放入３０～５０℃的真空干燥箱中干燥，得到阿维拉霉素粗品； ２）将干燥好的阿维拉霉素粗品先用溶剂丙酮和水的混合溶液重结晶１～３次，所述的丙酮与水的体积比为１∶１～５∶１；再用溶剂为乙醇和水的混合溶液重结晶１～３次，所述的乙醇与水的体积比为３∶１～９∶１；将重结晶后的白色固体放入３０～５０℃的真空干燥箱中干燥，得到阿维拉霉素纯品； ３）在反应器中，依次加入阿维拉霉素纯品和氢氧化钠溶液，所述的阿维拉霉素纯品的质量与氢氧化钠溶液的体积比为１ｇ∶３０ｍＬ～８０ｍＬ，所述的氢氧化钠溶液的浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ～４ｍｏｌ／Ｌ；在１０～３０℃下避光反应，反应时间为８～２４ｈ；反应完全后用等摩尔浓度的盐酸调反应液的ｐＨ值至２～３，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥乙酸乙酯５小时，抽滤，滤液减压蒸干，即得白色固体，将所得白色固体放入３０～５０℃的真空干燥箱中干燥，得到３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸粗品； ４）将３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸粗品先用Ｎ，Ｎ－２－甲基甲酰胺和乙腈的混合溶液重结晶１～３次，所述的Ｎ，Ｎ－２－甲基甲酰胺与乙腈的体积比为１∶５～１∶９；再用甲醇和水的混合溶液重结晶１～３次，所述的甲醇与水的体积比为１∶１～９∶１；将重结晶后的产品放入３０～５０℃的真空干燥箱中干燥，得到３，５－二氯－４－羟基－２－甲氧基－６－甲基－苯甲酸化学对照品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁宗辉，李荣强，陶燕飞，潘源虎，黄玲利，王玉莲，王绪，陈冬梅，刘振利，翟长友，富泽林，张西亚，卢洪涛，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]
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