本发明专利技术提出一种提高阿维拉霉素发酵产量的方法，其菌种为绿色产绿链霉菌StreptomycesviridochromogenesTü-57或StreptomycesviridochromogenesNRRL2860。其使用的发酵培养基成分为g/L：葡萄糖20，玉米淀粉40，豆油5，NaCl1，CaCO35，NaNO35，CaCl210，MgSO40.04，CuSO40.03，(NH4)2SO42，加自来水至1L，消后pH控制在7.0~7.2，灭菌温度115~121℃，灭菌时间30min；在发酵培养基中添加质量浓度为0.05~2%的氨基酸或富含氨基酸的有机氮源；发酵工艺采用摇瓶发酵工艺，500mL摇瓶装液量50mL，摇床转速180~240r/min，接种量为5~15%，培养温度为28~30℃。本发明专利技术从氮调控的角度，筛选得到与阿维拉霉素合成有关的氨基酸以及富含氨基酸的有机氮源，在初始培养基中添加一定浓度的氨基酸或有机氮源，可以大幅度提高阿维拉霉素的发酵水平。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种利用不同营养因子添加到阿维拉霉素发酵培养基并提高其产量的方法。阿维拉霉素属于正糖霉素族的寡糖类抗生素，由绿色产绿链霉菌(Mi^ptomyces viridochromogenes)发酵产生的二氯异扁枝衣酸酯，是一种新型兽用消化促进剂和代谢调节剂。阿维拉霉素最先由美国礼来公司研制开发，在欧盟、日本、巴西、泰国等世界主要养殖业国家，均被广泛应用于畜禽饲料中，效果显著，是欧盟国家允许使用的兽用抗生素之一。尽管阿维拉霉素产品已在我国已上市，但由于阿维拉霉素生物合成与代谢调控的复杂， 在高单位的阿维拉霉素菌种选育及工艺研究上没有取得实质性突破，目前仍处于开发阶段。阿维拉霉素是以糖为骨架的低聚糖抗生素，其结构由末端的双氯晚霉素酸分子 (残基A)连接一个七糖链组成，分子结构如下。阿维拉霉素有多个活性组分，其中以阿维拉霉素A为主要组分。在阿维拉霉素生物合成中，其合成单元主要来源与糖代谢、磷酸戊糖等途径的单糖衍生物，但对于氨基酸、 以及富含不同氨基酸的有机氮源对阿维拉霉素生产菌的生长及产物合成的影响，还缺乏深入研究。氨基酸不仅能作为外源游离氨基酸被微生物直接吸收，以满足蛋白质等物质的生物合成，同时氨基酸还可以影响微生物初级代谢和次级代谢的代谢流分布情况。本实验对不同氨基酸、以及富含氨基酸的有机氮源进行筛选，获得一批明显促进阿维拉霉素合成的营养因子，可用于添加到发酵培养基中提高阿维拉霉素发酵产量。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的不足，提出一种应用不同氨基酸或富含不同氨基酸的有机氮源添加在发酵培养基中提高阿维拉霉素发酵产量的方法。用于实现本专利技术目的的具体技术解决方案如下本专利技术使用的菌种为绿色产色链霉菌(^&印如耶⑶^ viridochromogenes Tii-57或 Streptomyces viridochromogenes NRRL2860)。本专利技术使用的发酵培养基成分为(g/L):葡萄糖20，玉米淀粉40，豆油5，NaCl
技术介绍
LCaCO3 5, NaNO3 5，CaCl2 10，MgSO4 0. 04，CuSO4 0. 03, (NH4)2SO4 2，加自来水至 1L，消后 pH 控制在7.(Γ7.2，灭菌温度115 121°C，灭菌时间30 min。在发酵初始培养基中添加质量浓度为0. 051%的氨基酸或富含氨基酸的有机氮源。发酵工艺采用摇瓶发酵工艺，500mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速180140 r/min，接种量为5 15%，培养温度为^ 30°C。其中氨基酸选自脯氨酸、苯丙氨酸、谷氨酰胺的一种或多种组合，富含氨基酸的有机氮源为鱼粉、大豆蛋白胨、黄豆粉、麦芽浸粉的一种或多种组合。发酵培养6-10天后，取发酵液5ml，加丙酮5_20ml超声10_30min (19KHz, 200W, 5min)，离心，0. 44μ m滤膜过滤，用C18柱，以乙腈0.洲磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值为3) =51 49为流动相，波长为214nm检测阿维拉霉素产物A组分的产量。本专利技术所具有的优点本专利技术结合阿维拉霉素生物合成代谢调控的特点，从氮调控的角度，筛选得到与阿维拉霉素合成有关的氨基酸以及富含氨基酸的有机氮源，在初始培养基中添加一定浓度的氨基酸或有机氮源，可以大幅度提高阿维拉霉素的发酵水平。本专利技术具有目的明确、发酵成本低等优点，可以应用于阿维拉霉素的发酵生产，以及用于大规模工业化生产。具体实施例方式实施例1 发酵培养基成分为葡萄糖20g，玉米淀粉40g，豆油5g ,NaCl lg, CaCO3 5g，NaNO3 5g，CaCl2 10g，MgSO4 0. 04g，CuSO4 0. 03g, (NH4)2SO4 2g，加自来水至 1L，消后 pH 控制在7. 0 7· 2，灭菌温度115 121 °C，灭菌时间30 min。在发酵培养基中添加质量浓度为0. 1%的脯氨酸。发酵工艺采用摇瓶发酵工艺， 500mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min，以“&卬如历凡然viridochromogenes NRRL 2860培养种子液，接种量为10%，培养温度为30°C。发酵培养8天后，取发酵液5ml，加丙酮IOml超声15 min (19KHz, 200W, 5min), 离心，0. 44 4!11滤膜过滤，用(18柱，以乙腈0.洲磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值为3) =51 49为流动相，波长为214nm检测阿维拉霉素产物A组分的产量达到0. 97g/l，阿维拉霉素A组分发酵产量比对照组提高了 4. 79%。实施例2 发酵培养基成分为葡萄糖20g，玉米淀粉40g，豆油5 g,NaCl lg, CaCO3 5g，NaNO3 5g，CaCl2 10g，MgSO4 0. 04g，CuSO4 0. 03g, (NH4)2SO4 2g，加自来水至 1L，消后 pH 控制在7. 0 7· 2，灭菌温度115 121 °C，灭菌时间30 min。灭菌时间30 min，在发酵初始培养基中添加质量浓度为0.1%的苯丙氨酸。发酵工艺采用摇瓶发酵工艺，500mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min，以 viridochromogenes NRRI^860培养种子液，接种量为10%，培养温度为30°C。发酵培养9天后，取发酵液5ml，加丙酮20ml超声30 min (19KHz, 200W, 5min), 离心，0. 44 4!11滤膜过滤，用(18柱，以乙腈0.洲磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值为3) =51 49为流动相，波长为214nm检测阿维拉霉素产物A组分的产量达到1. 03 g/Ι，阿维拉霉素A组分发酵产量比对照组提高了 10. 95%。实施例3 发酵培养基成分为葡萄糖20g，玉米淀粉40g，豆油5g ,NaCl lg, CaCO3 5g，NaNO3 5g，CaCl2 10g，MgSO4 0. 04g，CuSO4 0. 03g, (NH4)2SO4 2g，加自来水至 1L，消后 pH 控制在7. 0 7· 2，灭菌温度115 121 °C，灭菌时间30 min。在发酵初始培养基中添加质量浓度为0. 1%的谷氨酰胺。发酵工艺采用摇瓶发酵工艺，500mL摇瓶装液量 50 mL,摇床转速 220 r/min,以viridochromogenes NRRL2860培养种子液，接种量为10%，培养温度为30°C。发酵培养8天后，取发酵液5ml，加丙酮15 ml超声20 min (19KHz, 200W, 5min)，离心，0. 44 μ m滤膜过滤，用C18柱，以乙腈0. 2%磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值为3)=51 :49为流动相，波长为214nm检测阿维拉霉素产物A组分的产量达到0.95 g/Ι，阿维拉霉素A组分发酵产量比对照组提高了 2.58 %。实施例4:发酵培养基成分为葡萄糖20g，玉米淀粉40g，豆油5g ,NaCl lg, CaCO3 5g，NaNO3 5g，CaCl2 10g，MgSO4 0. 04g，CuSO4 0. 03g, (NH4)2SO4 2g，加自来水至 1L，消后 pH 控制在7. 0 7· 2，灭菌温度115本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种提高阿维拉霉素发酵产量的方法，其特征在于：所述方法使用的菌种为绿色产绿链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ Ｔü－５７或Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ ＮＲＲＬ２８６０；所述方法使用的发酵培养基成分为ｇ／Ｌ：葡萄糖 ２０，玉米淀粉 ４０，豆油５ ，ＮａＣｌ １，ＣａＣＯ３ ５，ＮａＮＯ３ ５，ＣａＣｌ２ １０，ＭｇＳＯ４ ０．０４，ＣｕＳＯ４ ０．０３，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ２，加自来水至１Ｌ，消后ｐＨ控制在７．０～７．２， 灭菌温度１１５～１２１℃，灭菌时间３０ ｍｉｎ；在所述发酵培养基中添加质量浓度为０．０５～２％的氨基酸或富含氨基酸的有机氮源；发酵工艺采用摇瓶发酵工艺，５００ｍＬ摇瓶装液量５０ ｍＬ， 摇床转速１８０～２４０ ｒ／ｍｉｎ，接种量为５～１５％，培养温度为２８～３０℃。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邹祥，刘芳，李晓荣，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：85
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