【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及破坏巴斯德毕赤酵母的蛋白甘露糖基转移酶(PMT)基因，从而减少由毕赤酵母生产的胰岛素前体分子的O-糖基化水平。本专利技术提供了甲醇营养型酵母的基因工程敲除菌株，包括毕赤酵母尤其是巴斯德毕赤酵母，能够生产糖基化减少的异源性蛋白质。本专利技术考虑了用于转化甲醇营养型酵母的载体，这些载体包括PMTl、PMT2、PMT4、PMT5、 和PMT6基因的编码序列。
技术介绍
已经在多种微生物表达系统中生产了胰岛素、胰岛素类似物和/或衍生物的重组形式。目前生物体，例如大肠杆菌，酿酒酵母，已经用于商业化生产重组人胰岛素及其衍生物。由于这些系统的某些缺点，例如低表达水平，在下游纯化中的困难等，甲醇营养型酵母巴斯德毕赤酵母已经有利地用作蛋白质表达系统。该表达系统提供了若干优点例如高表达，处理简单，生产成本低，高密度培养(US6800606)。因为酵母表达系统易于生长，快速并且可按比例放大，它们是广泛使用的；然而， 一些酵母表达系统产生了不一致的结果，并且有时难以实现高产率。显示较大前途的一种酵母表达系统是甲醇营养型酵母，巴斯德毕赤酵母。与其他真核生物表达系统相比较，因...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.02.10 IN 332/CHE/20101.一种减少由甲醇营养型酵母生产的蛋白质的糖基化的方法，所述方法通过失活选自包括PMT1、PMT2、PMT4、PMT5和PMT6基因的组中的至少一个或多个基因能够实现，所述PMT1、PMT2、PMT4、PMT5和PMT6基因分别具有与SEQ ID No. 1、2、3、4和5表示的核苷酸序列至少80%同源性的核苷酸序列，所述序列编码蛋白甘露糖基转移酶或其功能性部分。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述甲醇营养型酵母属于毕赤酵母。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述甲醇营养型酵母是巴斯德毕赤酵母。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质是通过式I表示的 X-B-Y-A 其中， X是包括至少一个氨基酸的前导肽序列， B是胰岛素分子B链的氨基酸序列、它的衍生物或类似物， Y是包括至少一个氨基酸的连接肽， A是胰岛素分子A链的氨基酸序列，它的衍生物或类似物， 并且所述A和B链可以通过氨基酸取代、缺失和/或添加来修饰。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖基化的方式是O-糖基化。6.根据权利要求1所述的方法，其中糖基化减少至少10%至约99%。7.根据权利要求6所述的方法，其中糖基化减少25%。8.根据权利要求6所述的方法，其中糖基化减少65%。9.一种包含蛋白甘露糖基转移酶基因或其功能性部分的载体，所述蛋白甘露糖基转移酶基因或其功能性部分选自包括PMT1、PMT2、PMT4、PMT5和PMT6基因的组，所述PMT1、PMT2、PMT4、PMT5和PMT6基因分别具有与SEQ ID No. 1、2、3、4和5表示的核苷酸序列至少80%同源性的核苷酸序列，所述载体整合到同源基因座中抑制了功能性蛋白甘露糖基转移酶在宿主中，优选在甲醇营养型酵母中的表达。10.一种减少或改变甲醇营养型酵母生产的蛋白质上的糖基化的方法，包括用权利要求9所述的载体转化所述酵母。11.根据权利要求9所述的方法，其中所述甲醇营养型酵母属于毕赤酵母。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述甲醇营养型酵母是巴斯德毕赤酵母。13.一种用于生产甲醇营养型酵母的敲除菌株的方法，其中(a)—种载体并入了能够同源重组的核酸序列，所述同源重组的核酸序列包含编码选自包括PMT...
【专利技术属性】
技术研发人员：纳加拉杰·戈文达帕，科玛尔·卡诺贾，克里希纳穆尔蒂·文卡特森，尼特斯·戴夫，穆克什·巴布阿帕·帕塔勒，桑贾伊·蒂瓦里，克达纳斯·N·萨斯特里，哈里什·耶尔，
申请(专利权)人：拜康有限公司，
类型：
国别省市：
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