利用电荷排斥作用制备同二聚体蛋白混合物的方法技术

技术编号:8157806 阅读:364 留言:0更新日期:2013-01-06 16:05
本发明专利技术公开了利用电荷排斥作用制备同二聚体蛋白混合物的方法。实验证明,在序列表序列4所示的ScFv-Fc蛋白上引入三个突变位点K435D/K452D/D442K时,与同一宿主细胞中同时表达Fc蛋白后,经非还原条件下SDS-PAGE电泳检测,蛋白是以ScFv-Fc/ScFv-Fc和Fc/Fc同二聚体蛋白混合物的形式存在。本发明专利技术所提供的方法可在增加同二聚体含量的同时降低其他不需要的产物如异源二聚体的含量。同二聚体蛋白混合物可以同时作用于同一靶标的不同表位,也可以通过不同形式的抗体结合不同来源的抗体同时抑制多个抗原的作用等,为肿瘤的免疫诊断及免疫治疗方面提供新的方法和途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
单克隆抗体药物在近十五年内增长迅速,成为制药行业的成长点。自1996年起,一共有30个左右单抗药物被批准上市。其中有九个单抗药物年销售超过十亿美元。2010年单抗药物总销售超过300亿美元,并且年增长率超过10%。由于单克隆抗体的靶标特异性强,只能抑制单一靶点。而在肿瘤、自体免疫等多种疾病中,需要抑制多重信号通路来避免代偿效应。对于病毒感染疾病,由于病毒的高突变率,往往需要抑制多抗原位点来防止逃逸。因此,有以下几种备选方案可以解决此类问题。一种备选方案是使用多克隆抗体,或通过改造抗体Fe段获得异二聚体如双特异抗体。还有一种方案是使用抗体混合物来治疗,抗体混合物可包含两种或更多种针对同一靶物上不同表位的抗体,或针对不同靶物的抗体的 混合物。US7262028记载了一种通过表达一种轻链和不同重链从单一宿主细胞克隆生成二价抗体或者二价抗体混合物的方法。US7262028中披露的专利技术提供了一种用于生成抗体组合的方法,可以对该抗体组合筛选在多种应用中的有用性。W0/2010/084197则描述了一种从单一宿主细胞克隆生产包含两种或者更多种不同抗体混合物的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在单一重组宿主细胞中生成包含两种或多种同二聚体蛋白或抗体混合物的方法,包括在所述宿主细胞中表达至少两种编码具有不同CH3区的多肽的核酸构建体,所述具有不同CH3区的多肽之间不含有形成二硫键或共价或稳定非共价多肽链间键的氨基酸残基;具有相同CH3区的所述多肽通过稳定非共价多肽链间键形成所述同二聚体蛋白;所述稳定非共价多肽链间键包括离子键。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:徐霆须涛汪皛皛孙兴鲁范英曾燕
申请(专利权)人:苏州康宁杰瑞生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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