本申请涉及通过测量在血液样品中活化的纤维蛋白溶解过程中产生的Ｄ－二聚体和可溶性纤维蛋白的水平，来检测凝血活化的方法和测试，尤其当所述凝血活化引起静脉血栓栓塞性疾病时。本发明专利技术的方法基于将对应于可溶性纤维蛋白降解的Ｄ－二聚体水平和具有正常阈值的样品的Ｄ－二聚体水平进行比较。本发明专利技术的测试还可以用于确定患者的抗凝是否充分。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过测量D-二聚体和可溶性纤维蛋白水平检测静脉血栓栓塞性疾病本申请涉及在血液的凝血活化过程中通过分析D-二聚体和可溶性纤维蛋白检测凝血活化的方法和测试，尤其当凝血活化与静脉血栓栓塞性 疾病有关时。纤维蛋白溶解是血液中纤维蛋白的降解过程。纤维蛋白溶解参与许 多病理生理过程，并且在组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原结合纤维蛋白的情况下被触发，形成三元纤维蛋白-纤溶酶原复合物，其中t-PA对纤溶 酶原具有高亲和力，导致纤溶酶的产生，所述纤溶酶是将纤维蛋白降解 成D-二聚体的酶。缺少纤维蛋白时，t-PA对纤溶酶原几乎没有亲和力， 这解释了循环的纤维蛋白不被降解的事实。纤维蛋白降解或者纤维蛋白溶解，导致尤其包括"D-二聚体"片段 的降解产物的形成。所述D-二聚体与另一纤维蛋白单体分子降解产生的 E片段结合，形成DDE复合物，但即使是这种形式的复合物通常也被称 为D-二聚体。在凑是血酶(enzyme de la coagulation, 即thrombineyf乍用下，纤纟隹蛋白 原转化形成处于纤维蛋白溶解过程的纤维蛋白。在凝血活化期间，产生 的凝血酶因此诱导纤维蛋白沉积物的形成和可溶性纤维蛋白的形成，所 述纤维蛋白沉积物的形成将形成血栓。为了实现这一过程，凝血酶攻击 纤维蛋白原分别位于2条A a和2条B p链的4条肽4建，造成两条Aa 链释放两个A纤维蛋白肽并且B p链释放两个B纤维蛋白肽，引起纤维 蛋白单体的形成，所述纤维蛋白单体借助氢键力自发聚合成聚合物的形 式，所述氲键通过A和B纤维蛋白肽释放期间暴露的A和B聚合部位之 间以及y和卩链末端分别提供的a和b部位之间的相互作用来建立。纤 维蛋白多聚体然后立即被因子xm(a)稳定。体外测试期间凝血酶生成要 比体内产生的多得多。因此，体内凝血活化过程中纤维蛋白单体的生成 要比体外的生成慢得多，这造成部分形成的单体聚合产生不溶性的纤维 蛋白，所述不溶性的纤维蛋白形成血栓，所述单体的另一部分与纤维蛋白原反应，其中a和b部位是可接近的，或者所述单体的另一部分与纤 维蛋白原降解产物反应产生可溶性的纤维蛋白，其中纤维蛋白单体与纤 维蛋白原结合。为了见证患者中凝血的活化，确定可溶性纤维蛋白的浓度是非常重 要的。所述确定可以利用从血液样品获得的血液或者血浆样品进行，所 述血液样品^^自患者。已经表明分析可溶性纤维蛋白是对分析纤维蛋白溶解降解产物的有 效补充，因为可溶性纤维蛋白可以检测正在进行的凝血活化，而D-二聚 体的浓度指示血栓的降解，即使活化凝血过程被终止。总之，当纤维蛋白凝块在体内降解时，D-二聚体血浆水平增加。因 此，如果血栓存在并且处于降解过程，则无论凝血持续还是终止，D-二 聚体水平应该较高。相反，只有当凝血持续时可溶性纤维蛋白的水平才 升高。与D-二聚体的水平相比，可溶性纤维蛋白血浆水平的特异性测量因 此能够确定提取待分析样品时患者发生的凝血，并且能够评价凝-溶平衡 (balance coagulolytique)。确定样品中D-二聚体的水平，称为基础水平，反映体内发生的血栓 降解，而确定外源加入特异性纤维蛋白血栓溶解剂后获得的D-二聚体水 平代表基础D-二聚体和来自可溶性纤维蛋白降解产生的D-二聚体的总 和，所述可溶性纤维蛋白也称为循环纤维蛋白。国际专利申请WO-A-02/18628描述了分析血液样品中可溶性纤维蛋 白的方法，其需要将血浆与对可溶性纤维蛋白具有高亲和力的纤溶酶原 激活物(PA-Fb sp)接触，然后确定纤维蛋白降解产物(D-二聚体)的水平。 因此经PA-Fb sp处理的样品中D-二聚体浓度与未经PA-Fb sp处理的血浆 中确定的基础D-二聚体浓度之间的差异表示与可溶性纤维蛋白降解相关 的D-二聚体。专利技术人已经注意到还可以有利地补充现有技术国际申请 WO-A-02/18628提供的方法，使其用于静脉血栓栓塞性疾病的诊断，以 及弥漫性血管内凝血症(DIVC)的诊断和监测。它还能够确定抗凝治疗是 否能够有效的完成。静脉血栓栓塞性疾病主要包括四肢的静脉血栓形成和肺栓塞，后者由前者血栓形成的并发症造成。还会遇到除了四肢静脉血栓形成以外的 静脉血栓形成，因为所有的静脉范围都有可能遭受血栓形成。在处于病 理学起源的那些静脉中尤其可以引证肾静脉和肠系膜静脉。血栓栓塞性疾病例如深静脉血栓形成(TVP)和/或肺栓塞(EP)是危急生命的疾病，占据 工业化国家残疾和死亡的4艮大部分，因此建立这些疾病的诊断对于完成 检查是非常重要的，所述检查通过影像检查例如诊断静脉血栓形成的超 声成像以及诊断肺栓塞的显像或者血管造影。这些探查法的实现很需要 技巧，并且一直不能足够迅速的实现。结果， 一直需要定义能够快速诊断患者的血栓栓塞性疾病的测试， 所述诊断包括以下可能，即不必求助其他检查就能排除该疾病。在与凝血相关的疾病诊断领域，已知如果D-二聚体的水平是正常的， 则利用D-二聚体的容量是血栓形成的负指标，因为一致认为血栓形成涉 及凝血的活化和纤维蛋白溶解。但是，迄今为止测量的唯一D-二聚体计数缺少特异性，无法使人确 认已经形成血管内血栓，因为循环中存在的D-二聚体可能来自于血管外 纤维蛋白沉积物的降解。然后原位形成的D-二聚体可能进入循环，从而 产生高水平的循环D-二聚体。在本专利技术中，专利技术人评估了基于D-二聚体 测试并结合确定可溶性纤维蛋白的快速测试的诊断法的相关性，所述可 溶性纤维蛋白代表血管内的凝血活化。已经证明这种分析的结合有利于 诊断深静脉血栓形成(TVP)和/或肺栓塞(EP)以及诊断弥漫性血管内凝血 症(DIVC)。进行的可溶性纤维蛋白测试，称为可溶性可降解纤维蛋白 SDF,允许通过确定在外源供给样品的组织纤溶酶原激活物(或者另 一血 栓溶解剂例如纤维蛋白的特异性纤溶酶原激活物)使其降解期间产生的降 解产物，来分析可溶性纤维蛋白。因此，本专利技术涉及诊断血液样品中凝血活化的体外方法，所述血液 样品取自患者，所述方法包括i) 测量测试样品中包含的纤维蛋白降解产物的量，包括测量样品中 存在的D-二聚体的量并构成D-二聚体的基础水平；ii) 在能够将样品包含的可溶性纤维蛋白降解为降解产物而不造成 纤维蛋白原降解的条件下，通过与对纤维蛋白具有高亲和力的纤溶酶原激活物(PA-Fbsp)孵育，来处理样品，并测量被处理样品包含的D-二聚体 的量；iii) 计算步骤ii)中用Pa-Fb sp激活物活化后测量的D-二聚体的量和 步骤i)中测量的所述活化前D-二聚体的量之间的差异，所述差异构成可 溶性纤维蛋白(SDF)的降解度；iv) 将步骤i)测量的D-二聚体水平与确定的所述降解产物的正常阈 值进行比较，并且将步骤iii)中计算得到的SDF水平与确定的SDF正常 阈值进行比较。当利用样品进行所述分析法时，有可能确定患血栓栓塞性疾病的风 险如果所述纤维蛋白降解产物或者SDF(D-二聚体)中的至少一个计算水 平高于正常值，则存在患病风险，而当纤维蛋白所述降解产物的计算水 平和SDF水平低于各自的正常阈值时，所述风险被排除。无论凝血过程是局部的(例如深静脉血栓形成)还是全身的(例如在 DIVC情况下)，本专利技术的诊断方法都适用于血液凝固的诊断。如果合适，在上述步骤a)ii)加入纤溶酶原激活本文档来自技高网...
【技术保护点】
诊断血液样品中凝血活化的体外方法，所述血液样品取自患者，所述方法包括： ｉ）测量所述测试样品所含纤维蛋白降解产物的量，包括测量所述样品中存在的Ｄ－二聚体的量并构成Ｄ－二聚体的基础水平； ｉｉ）在允许将所述样品所含可溶性纤维蛋白降 解为降解产物而不造成纤维蛋白原降解的条件下，通过与对纤维蛋白具有高亲和力的纤溶酶原激活物（ＰＡ－Ｆｂ ｓｐ）孵育，来处理样品，并测量被处理样品所含Ｄ－二聚体的量； ｉｉｉ）计算步骤ｉｉ）中用Ｐａ－Ｆｂ ｓｐ激活物活化后测量的Ｄ－二聚体 的量和步骤ｉ）中所述活化前Ｄ－二聚体的量之间的差异，所述差异构成所述可溶性纤维蛋白（ＳＤＦ）降解的水平； ｉｖ）将步骤ｉ）测量的Ｄ－二聚体水平与所确定的所述降解产物的正常阈值进行比较，并且将步骤ｉｉｉ）中计算得到的ＳＤＦ水平与所确定的 ＳＤＦ的正常阈值进行比较； 如果步骤ｉ）测量的Ｄ－二聚体水平或者计算的ＳＤＦ水平中的至少一种高于所确定的各自的正常值，则存在患血栓栓塞性疾病的风险，而当步骤ｉ）获得的Ｄ－二聚体水平和步骤ｉｉｉ）获得的ＳＤＦ水平低于各自的正常阈值时，所 述风险被排除。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：比比沙索尔丹米尔沙利，简奈特索利亚，
申请(专利权)人：斯塔戈诊断公司，巴黎国立医院，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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