本公开涉及重组融合蛋白，如被称为疫苗体的基于人抗体的分子，其能够引发T细胞和B细胞免疫应答。本公开还涉及通过这些特殊的融合蛋白治疗癌症或传染病的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的重组融合蛋白，如被称为疫苗体(Vaccibody)的基于人抗体的分子，其能够引发T细胞和B细胞免疫应答。本专利技术还涉及通过这些特殊的融合蛋白治疗癌症或传染病例如多发性骨髓瘤或流感的方法。
技术介绍
DNA接种是一种在技术上简单的诱发免疫应答的方式。然而，在小动物中的成功还未在临床试验中重复。目前进行数种策略以增加DNA疫苗的效力。将蛋白质抗原靶向抗原递呈细胞(APC)可以改善T细胞和B细胞应答。重组免疫球蛋白(Ig)分子非常适合此目的。例如，短的抗原表位可以代替Ig恒定结构域中的@链 之间的环，同时通过给重组Ig配备对APC上的表面分子特异的可变(V)区获得定向的抗原递送。然而，这样的策略不适合含未识别的表位的较大的抗原，此外，具有短的T细胞表位的重组Ig分子不能诱发针对构象表位的抗体。为克服这些限制，已经生产出基于定向的Ig的同型二聚体DNA疫苗(疫苗体)，其表达大小为至少550aa并保持构象表位的传染性或肿瘤抗原。趋化因子(C-C基序)配体3(CCL3)是人中的蛋白质，其由CCL3基因编码。CCL3，也被称为巨噬细胞炎性蛋白-I a (MIP-1 a )，是属于CC趋化因子家族的细胞因子，其参与多形核白细胞的招募和活化中的急性炎症状态。虽然小鼠CCL3是编码69个氨基酸的成熟趋化因子的单拷贝基因，已经将人同系物复制并突变从而产生两个非等位变体，LD78a (CCL3)和LD78 P (CCL3-L1)，两者都显示与小鼠CCL3具有74%同源性。由于缺乏效力，目前还没有DNA疫苗被批准用于人用途。同样，没有可用于数种传染病的有效疫苗。尤其，没有治疗性DNA癌症疫苗被批准用于人用途。WO 2004/076489涉及被称为疫苗体的基于重组人抗体的分子，其能够引发T细胞和B细胞免疫应答。US20070298051 $&MIP-l_a在增强哺乳动物中对免疫原的免疫应答中的用途。EP920522涉及多核苷酸载体疫苗，所述多核苷酸载体疫苗包含cDNA目标产物，该目标产物包含编码细胞因子或趋化因子的核苷酸序列。Fredriksen AB等(Mol Ther 2006 ;13 :776-85)涉及将肿瘤抗原祀向抗原递呈细胞的DNA疫苗。Fredriksen AB和Bogen B(Blood 2007 ;110 :1797-805)涉及小鼠趋化因子独特型融合DNA疫苗。专利技术目的本专利技术的实施方案的一个目的是提供融合蛋白，所述融合蛋白对甚至是弱的抗原(如来源于例如骨髓瘤细胞的独特型抗原)仍能够引发有效免疫应答。此外，本专利技术的实施方案的一个目的是提供多核苷酸，如DNA多核苷酸,所述多核苷酸编码融合蛋白，所述融合蛋白对甚至是弱的抗原(如来源于例如骨髓瘤细胞的独特型抗原)仍能够引发有效免疫应答。这些多核苷酸可以用作针对癌症或传染病的免疫刺激组合物或疫苗，特征在于疾病特异性或疾病相关的抗原。专利技术概述本专利技术人已经发现，人趋化因子LD78P (其全长和截短版本两者)适合用作将抗原表位祀向APC的表面的祀向单元(targeting unit)。趋化因子或其截短版本以同型二聚体蛋白质构建体的形式结合到APC表面上的趋化因子受体，这有助于两种相同的趋化因子结合从而提供更有效的寻靶和信号传导。同型二聚体构建体还提供将两种相同的抗原表位递送到APC，其又将它们递呈到T细胞。甚至对于 相对较大尺寸的同型二聚体蛋白质构建体，细胞仍能够生产并输出完整分子。所以，在第一方面，本专利技术涉及两个相同的氨基酸链的同型二聚体蛋白质，每个氨基酸链包含靶向单元，所述靶向单元包含与SEQ ID NO: I的氨基酸序列5-70具有至少80%序列同一性的氨基酸序列；和抗原单元，所述靶向单元和所述抗原单元通过二聚化基序连接。在第二方面，本专利技术涉及两个相同的氨基酸链的同型二聚体蛋白质，每个氨基酸链包含靶向单元，所述靶向单元包含SEQ ID NO : I的氨基酸3-70 ;以及抗原单元，靶向单元和抗原单元通过二聚化基序连接。在第三方面，本专利技术涉及核酸分子，所述核酸分子编码能够形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质。在另一方面，本专利技术涉及根据本专利技术的同型二聚体蛋白质；其用作药物。在另一方面，本专利技术涉及核酸分子，所述核酸分子编码能够形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质；所述核酸分子用作药物。在另一方面，本专利技术涉及药物组合物，所述药物组合物包含根据本专利技术的同型二聚体蛋白质。在另一方面，本专利技术涉及药物组合物，所述药物组合物包含核酸分子，所述核酸分子编码能够形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质。在另一方面，本专利技术涉及宿主细胞，所述宿主细胞包含核酸分子，所述核酸分子编码能够形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质。在另一方面，本专利技术涉及制备根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的方法，所述方法包括a)将根据本专利技术的核酸分子转染到细胞群中；b)培养所述细胞群；c)收集并纯化由所述细胞群表达的同型二聚体蛋白质。在另一方面，本专利技术涉及针对癌症或传染病的疫苗，所述疫苗包含免疫学有效量的根据本专利技术的同型二聚体蛋白质或编码能够形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质的核酸分子，其中所述疫苗能够引发T细胞和B细胞免疫应答，并且其中所述同型二聚体蛋白质包含与所述癌症或传染病相关的抗原单元。在另一方面，本专利技术涉及针对癌症或传染病的免疫调节或免疫刺激组合物，其包含免疫学有效量的根据本专利技术的同型二聚体蛋白质或编码可以形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质的核酸分子，其中所述免疫调节或免疫刺激组合物能够引发T细胞和B细胞免疫应答，并且其中所述同型二聚体蛋白质包含与所述癌症或传染病相关的抗原单元。 在另一方面本专利技术涉及治疗患者的癌症或传染病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用根据本专利技术的同型二聚体蛋白质，或编码可以形成根据本专利技术的同型二聚体蛋白质的单体蛋白质的核酸分子，其中所述同型二聚体蛋白质包含与所述癌症或传染病相关的抗原单元。附图说明图I.用于本研究的融合疫苗。(A)同型二聚体趋化因子_抗原融合蛋白(疫苗体)的示意结构。祀向、二聚化和抗原单元被指示为以不同单元表示的部分。在所有构建体中，二聚化单元和铰链来源于人IgG3。G3S2G3SG接头将铰链外显子hl+h4连接到CH3结构域。GLSGL接头连接CH3和抗原单元，而(G4S) 3接头连接抗原单元中的Vh和八。(B)人CCL3同种型的NH2端序列(aa. 1-12)，以及它们的点突变对照(C11S，粗体显示)。短横线表示缺失。(C)推定CllS点突变破坏趋化因子结构中的S-S桥(右)。图2.通过ELISA和蛋白质印迹法表征表达LD78P的疫苗体。通过使用对疫苗体分子的不同组分具有特异性的HiAbs在ELISA中测试在第5天收集的瞬时转染的293E细胞的上清。(A)，通过结合DNP-BSA涂层(DNP-BSA coat)(结合scFv315)和利用生物素化的HP6017 (结合CH3 二聚化基序)检测来评估具有显示的靶向单元的编码scFv315的疫苗体。(B)，通过结合187. ImAb (结合小鼠Ck)涂层和利用生物素化的187. ImAb检测来评估具有显示的靶向单元的编码Ck Ck的疫苗本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：皮尔·阿代尔基·鲁菲尼，比亚内·博根，阿格妮特·不伦瑞克·弗雷德里克森，
申请(专利权)人：瓦西博迪公司，
类型：
国别省市：
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