公开了从在病原体比如病毒中发现的天然存在的蛋白序列制造的模板化缀合物。该序列被“模板化”成共有卷曲螺旋序列，以便形成适合免疫受试者的双链抗原。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及产生有效刺激对各种病毒疾病免疫应答的缀合物的技术。
技术介绍
传染病比如流感每年感染数亿人。世界上，流感可影响上达5-15%的人口，估计三百万至五百万的病例为严重疾病，并且估计每年250，000至500，000的死亡。(见URLwww. who, int/mediacentre/factsheets/2003/fs21 l/en/)。其{也病毒病原体，I匕如严重急性呼吸综合征(SARS)病毒、副流感病毒和呼吸道合胞体病毒，每年造成额外的发病率和死亡率。由于病原体中的突变，比如流感病毒恒定的抗原性漂移和周期性的抗原性转变，使得控制这些疾病复杂化。随着突变造成之前循环的流感病毒株的抗原性改变的积累，从而突变体病毒遇到不具有对抗该突变体病毒株的保护抗体的个体，疾病的传播增加。由于免疫压力造成的突变体流感病毒的快速选择需要每年开发和生产新的流感疫苗。数位研究人员已经记载了有效疫苗策略的需要。Nabel和Fauci在NatureMedicine, 16 (12) : 1389 (2010)中对需要广泛保护性“通用的流感疫苗”进行评论。在“Template-based coiled-coil antigens elicit neutralizing antibodies tothe SARS-coronavirus” Journal of Structural Biology, 155:176-194 (2006)中，和在国际专利申请WO 2005/077103中，Tripet等描述了肽疫苗的一种方法。在“Broadly cross-reactive antibodies dominatethe human B cell response against2009pandemic HlNl influenza virus infection,，，J. Experimental Medicine, 2011 年 I月10日，打印前电子公开，PMID:21220454中，Wrammer等描述了与多重流感株交叉反应的中和抗体。本专利技术解决了对抗病原体比如呼吸道病毒的有效疫苗的需要。本专利技术也解决了通过单个疫苗保护免遭快速突变病原体、多抗原性不同毒株的单个病原体、或多病原体的需要。
技术实现思路
本专利技术包括两个肽的模板化缀合物。如下产生缀合物将天然存在的α螺旋表位的第一氨基酸序列改变成七残基重复序列以形成第一模板化表位；将天然存在的α螺旋表位的第二序列改变成七残基重复序列以形成第二模板化表位；形成两个模板化表位的复合体以产生卷曲螺旋结构；并连接卷曲螺旋结构至载体，比如载体蛋白，以形成缀合物。在一种实施方式中，两个模板化表位具有不同的序列。本专利技术也包括通过施用缀合物至受试者，比如需要其的受试者产生免疫应答的方法。缀合物以足够的量施用至受试者以在受试者中产生保护性免疫应答。在一种实施方式中，至少一个表位不衍生自流感病毒蛋白。在一种实施方式中，缀合物包含两条多肽，即，第一多肽和第二多肽，其中每个多肽包含至少一个七残基重复序列，并且其中所述两条多肽具有小于或不大于约90%的序列同一'I"生；两条多肽之间的共价连接(covalent linkage);和载体，比如载体蛋白，其与多肽之一共价连接。在另一种实施方式中，缀合物包含两条多肽，即，第一多肽和第二多肽，其中每个多肽包含至少一个七残基重复序列，并且其中所述两条 多肽具有约100%的序列同一性；两条多肽之间的共价连接；和载体，比如载体蛋白，其与多肽之一共价连接。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少两个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少三个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少四个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少五个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少六个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少七个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少八个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少九个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少十个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少i^一个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少十二个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少十三个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少十四个七残基重复序列。在任何一种实施方式中，缀合物包含至少十五个七残基重复序列。在另外的实施方式中，单个另外的异亮氨酸残基紧接在最后的七残基重复序列之后存在。在任何一种实施方式中，至少一个表位不衍生自流感病毒蛋白。在一种实施方式中，缀合物的第一多肽可包含下列形式 η，其中是在第二多肽的序列中重复η次的片段。在每个片段中的“I”为异亮氨酸和在每个片段中的“L”为亮氨酸。数字N为至少3的整数并且与第一多肽的η相同。在一些实施方式中，η为从3至15的整数，并包括3和15 ;S卩，η为3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15，并且与第一多肽的η相同。数字i为从I至η的整数，其中i的值由其出现在片段中的位置确定，从而在序列中首先出现的N末端片段赋予i=l的值，对于每一个另外的片段i增加1，并且C末端片段赋予i=n的值。可独立于在第二多肽的所有其他片段中每个b、c、e、f和g氨基酸和第一多肽的所有片段，选择在η个片段的每个中的每个b、c、e、f和g。b、c、e、f和g氨基酸选自免疫应答期望对抗的病原体的I类病毒融合蛋白的α螺旋区域。在一种实施方式中，缀合物的第二多肽具有与缀合物的第一多肽相同的序列。在另一种实施方式中，缀合物的第二多肽具有与缀合物的第一多肽不同的序列，并且b、c、e、f和g氨基酸选自与第一多肽所选自的蛋白不同的I类病毒融合蛋白，或选自相同I类病毒融合蛋白的与第一多肽所选自的区域不同的部分。在另外的实施方式中，单个另外的异亮氨酸残基紧接在最后的片段之后(即，在最后片段的C末端)存在。在一种实施方式中，第一多肽和第二多肽长度相等。在另一种实施方式中，本专利技术包含下列形式的缀合物 -----其中连接体A、连接体B、表位I修饰体(modifier)和表位2修饰体任选存在。在进一步的实施方式中，缀合物可任选地包括模板化表位I和模板化表位2之间的另外的共价连接体C ;任选地包括表位I修饰体和表位2修饰体之间的另外的共价连接体D或任选地包含模板化表位I和模板化表位2之间的另外的共价连接体C以及表位I修饰体和表位2修饰体之间的另外的共价连接体D。在缀合物的一种实施方式中，表位I修饰体和表位2修饰体都存在，并选自亲水的、极性和带电的氨基酸。表位I修饰体和表位2修饰体每个可包含一个半胱氨酸残基，用于在模板化表位I和模板化表位2之间形成二硫键(这样二硫键将接着包括表位I修饰体和表位2修饰体之间的连接体D)。表位I修饰体和表位2修饰体可相同或不同，并可选自-Arg、- (Arg) 2> - (Arg) 3、- (Arg) 4、-Lys>- (Lys) 2、- (Lys) 3、- (Lys) 4、-Arg-酰胺、-(Arg) 2_ 酰胺、-(Arg) 3-酰胺、-(Arg) 4_ 酰胺、-Lys本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·S·霍奇斯，K·V·霍尔姆斯，Z·颜，W·J·哈特索克，Z·钱，B·E·B·希尔什，
申请(专利权)人：科罗拉多大学董事会，法人，
类型：
国别省市：
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