艾替班特的合成制造技术

本发明专利技术涉及由式(I)表示的艾替班特的有效固相合成。本发明专利技术涉及通过顺序偶联采用固相方法的用于制备艾替班特的有效方法。其涉及顺序偶联受保护的氨基酸以制备艾替班特。本发明专利技术还涉及在偶联期间使用无机盐，在Fmoc去保护步骤后用在DMF溶液中的HOBt进行洗涤以保证哌啶的完全去除并且反应进行完成，以及因此避免添加/缺失序列并且还提高方法产率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】艾替班特的合成专利技术的
本专利技术涉及由式-I表示的艾替班特的有效的固相合成。艾替班特被指示为用于治疗18岁以上成人中的遗传性血管性水肿的急性发作。专利技术背景艾替班特是对缓激肽B2受体具有选择性的竞争性拮抗剂，具有与缓激肽类似的亲和性。遗传性血管性水肿由C1酯酶抑制剂(导致缓激肽产生的因子XII/激肽释放酶蛋白质水解级联的关键调节剂)的缺失或功能紊乱引起。缓激肽是一种血管舒张药，其被认为是特征性HAE症状局部肿胀、炎症和疼痛的原因。艾替班特抑制缓激肽结合B2受体并且由此治疗HAE的急性偶发性发作的临床症状。(艾替班特)是合成的十肽，其具有五个非蛋白氨基酸。由ShireOrphanTherapies开发的艾替班特最初作为皮下注射剂在2011年在美国获得批准。US5,648,333B1公开了艾替班特及其制备方法。CN102532267公开了用于制备艾替班特的方法，其使用CTC树脂、利用不同偶联剂用于偶联不同的氨基酸。CN103992383公开了用于制备艾替班特的方法，其利用Boc-D-Arg-Arg-OH.2HCl的液相合成，之后通过固相合成使用王树脂与剩余的片段偶联。CN104072585公开了用于制备艾替班特的方法，其使用利用王树脂或p-羟甲基苯氧基甲基苯乙烯树脂作为固体支持物的氨基酸的顺序偶联。WO2016157177公开了用于在生物相容性叔胺烟酰胺作为催化剂存在下制备艾替班特的方法。5473/CHE/2014公开了用于制备艾替班特的方法，其使用在王树脂上的氨基酸的顺序偶联。之前的用于制备艾替班特的方法具有缺点。由于技术复杂且成本高，所述方法不适合于大规模生产艾替班特；因此，所述方法在商业上不可行或者会持续存在执行问题。在固相合成期间，观察到在采用的条件下肽聚集的强烈趋势。这是由于以下原因：生长的肽序列易于形成β片型结构，其导致肽基树脂的崩塌；在此种情况下，试剂分散到肽基树脂中受限，偶联和去保护反应将是迟缓和不完全的，由此产生缺失/添加，外消旋肽杂质，导致难以纯化并且导致低产率。因此，仍然需要提供用于制备艾替班特的有效方法，所述方法通过避免重复繁复且冗长的纯化步骤而产率高、可扩展、有成本效益、环境友好并且具有商业可行性。专利技术目的本专利技术的目的是开发用于制备式I的艾替班特的简单稳健且具有商业可行性的顺序方法，所述方法是在无机盐、新的且有效的偶联条件、序列中各氨基酸后的去保护和洗涤条件的帮助下进行的。附图简述图1：根据本专利技术的用于艾替班特(式-I)的固相合成的方法的流程图。专利技术概述本专利技术的一个实施方案涉及用于制备艾替班特的合成方法，所述方法包括以下步骤：A)在偶联剂存在下将精氨酸加载至树脂固相支持物，B)给未反应的功能位点加帽(capping)，C)在偶联剂和无机盐存在下顺序偶联侧链保护的氨基酸以制备艾替班特的主链，D)通过去除保护基并且将肽从所述树脂上切解获得粗艾替班特，E)纯化粗艾替班特。所述方法的示意性描述如图1所示。采用的方法是通过顺序方法的艾替班特的固相肽合成并且在偶联期间涉及无机盐以及常规偶联剂和添加剂。所述方法提供偶联和去保护反应的完成以及外消旋的减少并且由此控制与目标分子非常接近的异构杂质并且由此易化了所述肽的纯化方法。专利技术详述本专利技术涉及通过采用固相方法顺序偶联个体氨基酸来制备艾替班特的有效方法。本专利技术采用的方法是固相手工肽合成，其使用2-氯三苯甲基氯作为固体支持物，采用Fmoc-/tBu方法，并且包括偶联期间使用的位点特异性的有效的偶联剂和无机盐以及常规偶联剂和添加剂。并且在使用15-20％哌啶的Fmoc基团的去保护后，用0.01-0.5MHOBt/DMF而不是普通DMF洗涤肽基树脂以保证哌啶的完全去除，这有利于避免插入杂质。通过顺序方法实现完全的合成。所述方法提供偶联和去保护反应的完成以及外消旋的减少并且由此控制与目标分子非常接近的异构杂质并且由此易化了所述肽的纯化方法。本专利技术以下面的实施例作为代表。这些实施例仅用于说明并且因此不应当被视为本专利技术范围的限制。缩写：ACN：乙腈Boc：叔丁基氧基羰基COMU：1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉基-碳鎓六氟磷酸盐CuCl2：氯化铜DEPBT：3-(二乙氧基磷酰基氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮DIC：N,N'-二异丙基碳二亚胺DMAP：二甲基氨基吡啶DMF：N,N'-二甲基甲酰胺DIPEA：二异丙基乙胺Fmoc：9-芴基甲氧基羰基HBTU：O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐HOBt：N-羟基苯并三唑HFIP：1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇Mtt：甲基三苯甲基MeOH：甲醇MgCl2：氯化镁NMM：N-甲基吗啉NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮TES：三乙基硅烷TFE：三氟乙醇TFA：三氟乙酸Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃RT：室温tBu：叔丁基TIS：三异丙基硅烷Trt：三苯甲基TMP：2,4,6-三甲基吡啶本专利技术以下面的实施例作为代表。这些实施例仅用于说明并且因此不应当被视为本专利技术范围的限制。实施例1：将具有取代的1.22mmol/g的CTC树脂(10g)放入固相肽合成容器中。在DMF(80-100mL)中进行树脂的溶胀达1h并沥干。将Fmoc-Arg(Pbf)-OH(7.9g，1.0当量)溶解在DMF(80-100mL)中并加入至溶胀的树脂。在搅拌下加入DIPEA、NMM和TMP(2.0-4.0当量)，优选DIPEA。在室温持续搅拌2-3h并将反应混合物沥干。用DMF(80-100mL)洗涤树脂。进行第一氨基酸加载评估并且发现其为0.61mmol/g。使用在DMF(86mL)中的甲醇(10％)、DIPEA(4％)进行树脂的未反应位点的加帽。用DMF(80-100mL*3)洗涤树脂。通过用在DMF中的5-20％哌啶处理树脂两次达5-15min来进行Fmoc的去封闭。用在DMF中的0.01–0.5MHOBt溶液(100mL*2)洗涤树脂并且继之以DMF(80-100mL*2)。将Fmoc-Oic-OH(2.0-4.0当量)和HOBt(2.0-4.0当量)溶解在DMF(80-100mL)中并加入至反应容器。搅拌反应物质并加入溶解在DMF(20mL)中的HBTU(2.0-4.0当量)。加入DIPEA(4.0-6.0当量)并在氮气氛下将物质搅拌1.0–2.0h。通过Kaiser测试监测偶联的完成。在偶联完成后，将树脂用DMF(80-100mL*3)洗涤并用于Fmoc的去封闭。序列中其余的氨基酸偶联使用HBTU/HOBt进行。在根据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于制备艾替班特的方法，所述方法包括以下步骤：/n将精氨酸(Pbf)-OH加载至树脂固相支持物，/n给未反应的功能位点加帽，/n在偶联剂和无机盐存在下顺序偶联侧链保护的氨基酸以制备艾替班特，/n通过除去保护基并将肽从所述树脂上切解获得粗艾替班特，/n任选地纯化粗艾替班特。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170927 IN 2017410343141.用于制备艾替班特的方法，所述方法包括以下步骤：
将精氨酸(Pbf)-OH加载至树脂固相支持物，
给未反应的功能位点加帽，
在偶联剂和无机盐存在下顺序偶联侧链保护的氨基酸以制备艾替班特，
通过除去保护基并将肽从所述树脂上切解获得粗艾替班特，
任选地纯化粗艾替班特。


2.根据权利要求1所述的用于制备艾替班特的方法，其包括以下步骤，
在偶联剂存在下将精氨酸(Pbf)加载至树脂固相支持物，
在偶联剂、oxymapure和无机盐存在下顺序偶联侧链...

【专利技术属性】
技术研发人员：瓦桑塔库玛·甘伽·拉姆，尼廷·索潘饶·帕蒂尔，文卡塔·拉加文德拉查玉鲁·帕勒，尤盖希，
申请(专利权)人：拜康有限公司，
类型：发明
国别省市：印度;IN