可被O-糖基化修饰的多肽制造技术

本发明专利技术公开了可被O-糖基化修饰的多肽。本发明专利技术所提供的多肽为：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸；所述氨基酸中的氨基酸为20种天然氨基酸中的任一种。实验证明，本发明专利技术所提供的可被O-糖基化的多肽可仅包括W-P-Xn-S-Ym的多肽(即核心肽段)，序列达到了最短，可插入蛋白表面较强免疫原性的部位，利于抗原的递呈及被MHC-II识别等免疫过程，本发明专利技术所提供的可被O-糖基化的多肽可用于生物法生产多糖结合疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域中可被O-糖基化修饰的多肽。
技术介绍
在很长一段时间内，人们一直认为蛋白糖基化只存在于真核生物中。自从1974年Mescher首次发现细菌中存在糖蛋白以及糖基化修饰以来，人们已经在原核、真核、古生菌等所有生命领域均发现蛋白糖基化的存在。蛋白糖基化包括O-糖基化和N-糖基化，细菌中大多为O-糖基化。脑膜炎奈瑟球菌糖基转移酶PglL为O-寡糖转移酶，单独存在即可催化脑膜炎奈瑟球菌Ⅳ型菌毛蛋白PilE发生O-糖基化。同时由于糖基化过程和细菌脂多糖LPS的合成具有很大的相似性，因此可以利用细菌的糖基化生产多糖结合疫苗。目前只有三套糖基化系统(PglB、PglL、PilO)成功地在大肠杆菌中表达，使外源细菌多糖转移至底物蛋白中。同PglB相比，PglL一个优势即具有更加宽松的底物特异性，可以转移更多的聚糖。从而为生物法生产多糖结合疫苗提供了更广泛的空间。目前生物法生产多糖结合疫苗利用细菌中PglB的蛋白N-糖基化修饰，其中一个原因是其糖基化位点已经明确，不同于真核中的保守三肽结构N-X-S/T，原核细菌N糖基化修饰位点是D/E-Y-N-X-S/T的五肽结构，因此可以将这个短的位点插入不同的底物蛋白中使其糖基化。目前已有相关N-糖基化的多糖结合疫苗进入一期临床试验。尽管PglL比PglB识别更多的糖，然而蛋白O-糖基化位点并不明确，已发现的PglL的天然底物蛋白在糖基化位点周围序列并无特殊的结构或规律，使得在利用O-糖基化生产多糖结合疫苗时必须截取天然底物蛋白糖基化位点周围较长的一段区域(20个左右氨基酸)作为糖基化位点，而在免疫识别过程中，MHC-II识别肽段长度约为15-30个氨基酸。由于糖基化位点序列过长使得最终被识别的的糖-肽中肽的序列单一，不利于抗原的递呈及识别等免疫过程。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何制备多糖结合疫苗。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了a1)或a2)的多肽：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸。上述多肽中，所述氨基酸为20种天然氨基酸中的任一种。上述多肽中，所述Xn的序列是下述A1)-A12)中的任一种：A1)A-A-A；A2)A-A；A3)A；A4)G-N-N-T；A5)A-N-N-T；A6)G-A-N-T；A7)G-N-A-T；A8)G-N-N-A；A9)G-A-T；A10)G-T；A11)G-N-T；A12)G-A-A；所述Ym的序列是下述B1)-B25)中的任一种：B1)A-G-V；B2)A-P；B3)A-G；B4)G-P；B5)M-P；B6)S-P；B7)Q-P；B8)F-P；B9)V-P；B10)L-P；B11)I-P；B12)P-P；B13)N-P；B14)T-P；B15)C-P；B16)A-A-V；B17)A-G-A；B18)A；B19)W-P；B20)Y-P；B21)D-P；B22)E-P；B23)K-P；B24)R-P；B25)H-P。上述多肽中，a1)所述多肽的氨基酸序列是C1)-C36)中的任一种：C1)序列表中SEQ ID No.2的第32-41位氨基酸；C2)序列表中SEQ ID No.5的第11-19位氨基酸；C3)序列表中SEQ ID No.6的第11-18位氨基酸；C4)序列表中SEQ ID No.7的第11-17位氨基酸；C5)序列表中SEQ ID No.8的第11-20位氨基酸；C6)序列表中SEQ ID No.9的第11-20位氨基酸；C7)序列表中SEQ ID No.10的第11-20位氨基酸；C8)序列表中SEQ ID No.11的第11-20位氨基酸；C9)序列表中SEQ ID No.12的第11-19位氨基酸；C10)序列表中SEQ ID No.13的第11-18位氨基酸；C11)序列表中SEQ ID No.14的第11-19位氨基酸；C12)序列表中SEQ ID No.15的第11-19位氨基酸；C13)序列表中SEQ ID No.16的第11-18位氨基酸；C14)序列表中SEQ ID No.17的第11-18位氨基酸；C15)序列表中SEQ ID No.18的第11-18位氨基酸；C16)序列表中SEQ ID No.19的第11-18位氨基酸；C17)序列表中SEQ ID No.20的第11-18位氨基酸；C18)序列表中SEQ ID No.21的第11-18位氨基酸；C19)序列表中SEQ ID No.22的第11-18位氨基酸；C20)序列表中SEQ ID No.23的第11-18位氨基酸；C21)序列表中SEQ ID No.24的第11-18位氨基酸；C22)序列表中SEQ ID No.25的第11-18位氨基酸；C23)序列表中SEQ ID No.26的第11-18位氨基酸；C24)序列表中SEQ ID No.27的第11-18位氨基酸；C25)序列表中SEQ ID No.28的第11-18位氨基酸；C26)序列表中SEQ ID No.29的第11-18位氨基酸；C27)序列表中SEQ ID No.30的第11-20位氨基酸；C28)序列表中SEQ ID No.31的第11-20位氨基酸；C29)序列表中SEQ ID No.32的第11-17位氨基酸；C30)序列表中SEQ ID No.33的第11-18位氨基酸；C31)序列表中SEQ ID No.34的第11-18位氨基酸；C32)序列表中SEQ ID No.35的第11-18位氨基酸；C33)序列表中SEQ ID No.36的第11-18位氨基酸；C34)序列表中SEQ ID No.37的第11-18位氨基酸；C35)序列表中SEQ ID No.38的第11-18位氨基酸；C36)序列表中SEQ ID No.39的第11-18位氨基酸。上述多肽中，a2)所述多肽还含有下述b1)或b2)或b3)：b1)1个或多个氨基酸；b2)1个亲水氨基酸或亲水肽段；b3)将所述b1)与所述b2)连接得到的肽段；所述b1)或所述b2)或所述b3)位于所述多肽的N端或/和C端。上述多肽中，所述肽段为由两个或两个以上氨基酸连接得到的多肽。上述多肽中，所述亲水氨基酸为可溶于水的氨基酸，如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸和/或甘氨酸。上述多肽中，a2)所述多肽的氨基酸序列为下述D1)或D2)：D1)序列表中SEQ ID No.3的第11-21位氨基酸；D2)序列表中SEQ ID No.4的第11-22位氨基酸；和/或，所述亲水肽段的氨基酸序列为下述E1)或E2)：E1)序列表中SEQ ID No.2的第22-31位氨基酸；E2)序列表中SEQ ID No.2的第42-48位氨基酸。上述多肽中，a2)所述多肽的氨基酸序列为下述F1)-F38)：F1)序列表中SEQ ID No.2的第22-48位氨基酸；F2)序列表中SEQ ID No.3；F3)序列表中SEQ ID No.4；F4)序列表中SEQ ID No.5；F5)序列表中SEQ ID No.6；F6)序列表中SEQ I本文档来自技高网...

【技术保护点】
a1)或a2)的多肽：a1)序列为W‑P‑Xn‑S‑Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸。

【技术特征摘要】
1.a1)或a2)的多肽：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：所述Xn的序列是下述A1)-A12)中的任一种：A1)A-A-A；A2)A-A；A3)A；A4)G-N-N-T；A5)A-N-N-T；A6)G-A-N-T；A7)G-N-A-T；A8)G-N-N-A；A9)G-A-T；A10)G-T；A11)G-N-T；A12)G-A-A；所述Ym的序列是下述B1)-B25)中的任一种：B1)A-G-V；B2)A-P；B3)A-G；B4)G-P；B5)M-P；B6)S-P；B7)Q-P；B8)F-P；B9)V-P；B10)L-P；B11)I-P；B12)P-P；B13)N-P；B14)T-P；B15)C-P；B16)A-A-V；B17)A-G-A；B18)A；B19)W-P；B20)Y-P；B21)D-P；B22)E-P；B23)K-P；B24)R-P；B25)H-P。3.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于：a1)所述多肽的氨基酸序列是C1)-C36)中的任一种：C1)序列表中SEQ ID No.2的第32-41位氨基酸；C2)序列表中SEQ ID No.5的第11-19位氨基酸；C3)序列表中SEQ ID No.6的第11-18位氨基酸；C4)序列表中SEQ ID No.7的第11-17位氨基酸；C5)序列表中SEQ ID No.8的第11-20位氨基酸；C6)序列表中SEQ ID No.9的第11-20位氨基酸；C7)序列表中SEQ ID No.10的第11-20位氨基酸；C8)序列表中SEQ ID No.11的第11-20位氨基酸；C9)序列表中SEQ ID No.12的第11-19位氨基酸；C10)序列表中SEQ ID No.13的第11-18位氨基酸；C11)序列表中SEQ ID No.14的第11-19位氨基酸；C12)序列表中SEQ ID No.15的第11-19位氨基酸；C13)序列表中SEQ ID No.16的第11-18位氨基酸；C14)序列表中SEQ ID No.17的第11-18位氨基酸；C15)序列表中SEQ ID No.18的第11-18位氨基酸；C16)序列表中SEQ ID No.19的第11-18位氨基酸；C17)序列表中SEQ ID No.20的第11-18位氨基酸；C18)序列表中SEQ ID No.21的第11-18位氨基酸；C19)序列表中SEQ ID No.22的第11-18位氨基酸；C20)序列表中SEQ ID No.23的第11-18位氨基酸；C21)序列表中SEQ ID No.24的第11-18位氨基酸；C22)序列表中SEQ ID No.25的第11-18位氨基酸；C23)序列表中SEQ ID No.26的第11-18位氨基酸；C24)序列表中SEQ ID No.27的第11-18位氨基酸；C25)序列表中SEQ ID No.28的第11-18位氨基酸；C26)序列表中SEQ ID No.29的第11-18位氨基酸；C27)序列表中SEQ ID No.30的第11-20位氨基酸；C28)序列表中SEQ ID No.31的第11-20位氨基酸；C29)序列表中SEQ ID No.32的第11-17位氨基酸；C30)序列表中SEQ ID No.33的第11-18位氨基酸；C31)序列表中SEQ ID No.34的第11-18位氨基酸；C32)序列表中SEQ ID No.35的第11-18位氨基酸；C33)序列表中SEQ ID No.36的第11-18位氨基酸；C34)序列表中SEQ ID No.37的第11-18位氨基酸；C35)序列表中SEQ ID No.38的第11-18位氨基酸；C36)序列表中SEQ ID No.39的第11-18位氨基酸。4.根据权利要求1或2或3所述的多肽，其特征在于：a2)所述多肽还含有下述b1)或b2)或b3)：b1)1个或多个氨基酸；b2)1个亲水氨基酸或亲水肽段；b3)将所述b1)与所述b2)进行连接得到的肽段；所述b1)或所述b2)或所述b3)位于权利要求1或2或3所述多肽的N端或/和C端。5.根据权利要求4中所述的多肽，其特征在于：a2)所述多肽的氨基酸序列为下述D1)或D2)：D1)序列表中SEQ ID No.3的第11-21位氨基酸；D2)序列表中SEQ ID No.4的第11-22位氨基酸；和/或，所述亲水肽段的氨基酸序列为下述E1)或E2)：E1)序列表中SEQ ID No.2的第22-31位氨基酸；E2)序列表中SEQ ID No.2的第44-50位氨基酸。6.根据权利要求1-5中任一所述的多肽，其特征在于：a2)所述多肽的氨基酸序列为下述F1)-F38)：F1)序列表中SEQ ID No.2的第22-48位氨基酸；F2)序列表中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王恒樑，潘超，朱力，吴军，冯尔玲，刘先凯，孙鹏，王东澍，曾明，王斌，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11