抗妇科感染特异性IgY及其组合制剂制造技术

一种抗妇科感染特异性ＩｇＹ，其特征在于该抗妇科感染特异性ＩｇＹ的制备方法包括下列步骤： 优选引致妇科感染的主要致病菌，制备妇科感染主要致病菌抗原；制备免疫蛋；制备抗妇科感染主要致病菌特异性ＩｇＹ粗品；抗妇科感染主要致病菌特异性ＩｇＹ粗品的纯化；制备抗妇科感染特异性ＩｇＹ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗妇科感染特异性IgY及其制备方法，特别是涉及用于防治各种妇科感染性疾病特异性复合IgY及其制备方法和组合制剂更重要的是应用化学药品、抗菌素治疗上述妇科感染性炎症过程中，会破坏阴道环境局部微生态平衡，不仅杀死了有害菌，也杀死了正常的阴道菌群，如乳酸杆菌、棒状杆菌、肠球菌、非溶血链球菌等有益菌。乳酸杆菌使阴道局部形成弱酸性环境和低PH值，从而抑制了其他微生物的过度生长和粘附，其它杆菌繁殖又促进了有益厌氧菌生长，因而从正反两方面维持了阴道正常菌群平衡，对增加阴道免疫力十分有益。使用化学药品和抗菌素治疗妇科炎症，则将直接杀灭乳酸杆菌等有益菌，破坏阴道正常菌群平衡，丧失阴道原有的天然防御疾病的屏障，反而加重病情。因此目前国内外对妇科感染这种多发常见病，尚没有理想的、绿色的、无副作用的治疗药物。抗妇科感染性疾病特异性复合卵黄免疫抗体(Immunoglobulin of yolk IgY)属IgG类免疫球蛋白，是用妇科感染性疾病的多种病原体，免疫良种母鸡，使之产生大量相应免疫球蛋白，经提取分离纯化，而制得特异性的复合卵黄免疫抗体。这些复合抗体对导致多种妇科阴道炎的病原微生物，有特异性结合抑制作用，在浓度极低的情况下(数十ng/ml)就能起到有效作用。它的特点是只对阴道有害菌起杀灭作用，而对共生有益菌，则毫无作用，这与化学药品和抗菌素是截然不同的。用该复合抗体(IgY)治疗，可保护阴道环境微生态平衡，起到既治病又保健的作用。这在国内外治疗妇科感染性疾病方面，是一开创性先例。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的(1)筛选引致妇科感染性疾病的病菌阴道加德纳杆菌、白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌、阴道毛滴虫等。根据这些有代表性的致病菌的“抗原交叉性”进行分类组合。(2)在筛选和分类组合各种妇科感染致病菌的基础上，分别制备单一或复合的妇科感染致病菌抗原按照各种妇科感染致病菌的培养特性和最适培养条件，分别选择适宜的培养基，进行菌虫株大量繁殖，收集培养物，提纯、菌株计数，稀释分装；将各种单一或混合的妇科感染致病菌加入福氏佐剂，再放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，形成乳状浆液，制得单一或复合的妇科感染致病菌抗原。(3)制备免疫蛋选择具有高免疫应答能力的临开产或正在产蛋的健康无特定病原体携带的(SPF)健康产蛋母鸡，每只在胸部肌肉或皮下分别注射所制备的单一或复合的妇科感染致病菌抗原，在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7天以相同剂量注射第3次，第一次注射后从第20天开始拣取高免疫鸡蛋，并对应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记。(4)抗妇科感染致病菌特异性复合IgY粗品的制备将不同抗原分别免疫的母鸡所产鸡蛋等量混合，用0.5％新洁而灭溶液或0.1％KMnO4溶液或其他同类消毒液将免疫蛋浸泡15-30分钟消毒，无菌蒸馏水冲洗、晾干，置于打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1mol/lNaOH液或者1mol/l HCL液调节PH至5.5-6.0 4-6℃下静置过夜，稀释液1000-3000r/min高速离心20分钟，取上清液用17万分子量至20万分子量截留超滤浓缩10-20倍，浓缩液用冷冻喷雾干燥法喷干即得抗妇科感染特异性复合IgY粗品。(5)抗妇科感染致病菌特异性复合IgY纯品制备采用本公司已公开的专利技术(专利申请号00101270.3，专利公开号1307061)分别过离子交换柱和凝胶交换柱对按以上工艺所制取的抗妇科感染复合IgY粗品进行纯化，即得纯复合IgY；应用SDS-PAGE电泳测定法，对按以上工艺所制取的抗妇科感染致病菌特异性IgY粗品进行检测，测得其中复合IgY含量为50％以上。(6)采用酶联免疫法(ELISE)测得复合IgY生物活性效价达1∶256～512。将0.02-30％这种抗妇科感染致病菌特异性IgY配以99.98-70％的辅料，可制成各种临床可接受的剂型，如洗液、喷雾剂、泡腾剂(泡腾片、泡腾胶囊)、凝胶剂、乳膏剂、栓剂等，用于防治常见妇科感染性疾病。本专利技术将以上剂型直接施于外阴、阴道、子宫颈病原体最集中的部位，直接杀灭，效果好、见效快，解决了常规用药方式使药物进入人体循环后所产生的各种不良弊端，也克服了常规药物施用后所造成的阴道粘膜干燥、红肿、过敏或出血现象。本专利技术为一种特异性、纯天然绿色生物制剂，对阴道共生有益菌有很好的保护作用，完全不会象施用抗生素或化学消毒药那样将致病菌和有益菌一起杀灭，破坏阴道环境微生态平衡，或造成细菌抗药性。达到了既治病又预防保健的双重作用。实验例1将阴道加德纳杆菌10-20亿、阴道毛滴虫纯化抗原蛋白100ug制成0.5ml菌液，加入0.5ml福氏佐剂充分混匀，制成复合抗原，再用这种抗原免疫母鸡，制备抗阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫特异性复合IgY。然后，以阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫、阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌为检测抗原，用“ELISA法”(酶联免疫吸附试验)检测所制得的抗妇科感染特异性复合IgY抗体结合效价。结果如下表 从以上检测结果看出，采用本专利技术的方法制取致病菌抗原，又采用本专利技术的强化免疫方法免疫产蛋母鸡，所制备的抗阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫特异性复合IgY具有理想的广谱性，不仅对直接免疫的阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫抗原有很强的抑制作用，所测的抗体结合效价较高(1∶512)；对没有直接免疫的其他两种妇科感染致病菌也同样有一定的抑制作用，所检测到的抗体结合效价仍属理想。实验例2将阴道白色念珠菌10-20亿和杜克雷氏嗜血杆菌10-20亿制成0.5ml菌液，加入0.5ml福氏佐剂充分混匀，制成复合抗原，再用这种抗原免疫母鸡，制备抗阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌特异性复合IgY。然后，以阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫、阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌为检测抗原，用“ELISA法”(酶联免疫吸附试验)检测所制得的抗妇科感染特异性复合IgY抗体结合效价。结果如下表 从以上检测结果看出，采用本专利技术的方法制取致病菌抗原，又采用本专利技术的强化免疫方法免疫产蛋母鸡和制备相应的复合IgY，所制备的抗阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌特异性复合IgY具有理想的广谱性，不仅对直接免疫的阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌抗原有很强的抑制作用，所测的抗体结合效价较高(1∶512)；对没有直接免疫的其他两种妇科感染致病菌也同样有一定的抑制作用，所检测到的抗体结合效价仍属理想。实验例3将实验例1与实验例2中的两种不同复合抗原分别免疫的母鸡所产鸡蛋等量混合，制备抗妇科感染特异性复合IgY。然后用“ELISA法”(酶联免疫吸附试验)分别以阴道加德纳杆菌、阴道毛滴虫、阴道白色念珠菌、杜克雷氏嗜血杆菌作为检测用抗原，检测所制得的抗妇科感染特异性IgY对这4种不同抗原的抗体结合效价。检测结果如下表 从以上结果可以看到，以本专利技术的方法用多种致病菌制备的含多种菌体成份的特殊复合抗原，再用这种特殊复合抗原，应用本专利技术的强化免疫方法免疫产蛋母鸡，所制备的抗妇科感染特异性复合IgY，对作为抗原直接免疫的妇科感染致病菌具有很高的抗体结合效价，达到相当理想的效果。实验例4妇科阴道炎患者使用以本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：包晟，李同森，
申请(专利权)人：雅臣药业集团远东有限公司，
类型：发明
国别省市：