抗性病特异性IgY的制备方法及其组合制剂技术

一种抗性病特异性ＩｇＹ，其特征在于该抗性病特异性ＩｇＹ的制备方法包括下列步骤： 优选引致性病的主要致病病原体，分别制备引致性病的各种病原体的单一或复合抗原；制备免疫蛋；制备抗性病各种病原体特异性ＩｇＹ粗提物；抗性病各种病原体特异性ＩｇＹ粗提物的纯化。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗性病特异性IgY(卵黄免疫球蛋白)及其制备方法，特别是涉及用于预防梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹性病的特异性复合IgY及其制备方法和组合制剂。
技术介绍
当前国内外治疗梅毒主要用大剂量的长效青霉素制剂，即普鲁卡因青霉素或苄星青霉素。如剂量不足，疗程不规则，可增加发生三期梅毒的危险性。治疗淋病主要应用抗生素，但由于淋病双球菌对很多抗生素出现耐药性，特别是耐青霉素和耐四环素及其他耐药菌株的出现，且日趋严重，青霉素和四环素已不再作为治疗淋病的第一线药物，改用使用第三代头孢类、大观霉素、喹喏酮类、阿齐霉素等治疗，但仍有高达6％-14％的耐药菌出现。对尖锐湿疣治疗目前无确切疗效药物，主要用外科切除、电凝、冷冻疗法、CO2激光疗法等，但都无法根除尖锐湿疣病毒，即人乳头瘤病毒(HPV)。GH经一般治疗或抗病毒治疗可使病情缓解，但大多数患者不能根除单纯疱疹病毒(HSV)。更重要的是应用上述治疗常见性病过程中，会破坏阴道或尿道局部微生态平衡，不仅杀死了有害菌，也杀灭了正常菌群，如乳酸杆菌、棒状杆菌、肠球菌、非溶血链球菌等有益菌。乳酸杆菌使阴道或尿道局部形成弱酸性或低pH值，从而抑制了其他微生物和病毒的过度生长和粘附，其他杆菌繁殖又促进了有益厌氧菌生长，因而从正反两方面维持了阴道或尿道正常菌群平衡，对增强免疫力十分有益。使用抗生素治疗性病，不仅产生耐药菌株，还将杀灭乳酸杆菌等有益菌，破坏正常菌群平衡，使阴道或尿道失去原有的天然防御疾病的屏障，反而加重病情。因此，目前国内外对上述多发性性病尚没有理想的、环保的、无毒副作用的预防和治疗药物或手段。抗四种性病特异性复合IgY属IgG类免疫球蛋白，主要用导致梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的四种病原体免疫良种产蛋母鸡，使之卵内产生大量相应的IgY，经提取、分离、纯化而制得特异性的复合卵黄抗体。这种复合抗体对引起梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的病原体有特异性结合和抑灭作用。在浓度极低的情况下(50ng/ml)就能起到有效作用。它的特点是只对病灶病原体起抑灭作用，而对共生有益菌则秋毫无犯，这与化学药品和抗生素的作用是截然不同的。用该复合抗体(IgY)治疗，既可保护病灶部位的微生态平衡，又可抑灭病原体，起到预防和保健的作用。这在国内外预防性病方面，是一项开创性的先例。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种直接抑灭梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹病原体的特异性复合IgY的制备方法；本专利技术的目的还在于提供一种由可直接抑灭苍白密螺旋体(treponema pallidum，TP)、淋病双球菌(gonococci，GC)、人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)和II型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-2，HSV-2)的特异性复合IgY制成的高效、特效生物制剂，并由不同的剂型组成。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的1、根据流行病学调查，选取TP、GC、HPV和HSV-2作为具代表性的性病病原体；2、抗原制备采用TP、GC、HPV和HSV-2标准株，按常规方法分别进行培养。收集培养物，然后提纯、稀释分装。将此四种病原体液按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐剂，置高速匀浆机中，10,000-20,000rpm匀化，使形成油包水乳状液，即为TP、GC、HPV和HSV-2四种复合抗原；3、制备免疫蛋选取高免疫应答性、健康、无特殊病原体携带的(SPF)的产蛋母禽(包括产鸡、鸭、鹅、火鸡和鸵鸟等)进行强化免疫，在胸肌或皮下注射，每2周注射一次，计3次。第一次注射后第20天开始拣取免疫蛋；4、抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCL溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩10-20倍，继而冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合IgY粗提物；5、抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上四种性病特异性复合IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层系析柱进行纯化，即制得该特异性复合IgY纯品；6、经用SDS-PAGE测定抗四种性病复合IgY纯品，达到PAGE纯。用酶联免疫吸附法(ELISA法)测得该复合IgY的四种抗体(抗-TP，抗-GC，抗-HPV，抗-HSV-2)效价分别达1∶512-1∶1024。本专利技术另又采用上述方法制备得到的四种单一的抗性病特异性IgY，加以混合，制成另 实施例5 本专利技术的实施例与现有技术的性能的对比 从以上结果看，抗HPV特异性IgY，抗HPV活性十分理想。实验例4将HSV-2按上述
技术实现思路
第2条的方法制作抗原，再用这种抗原免疫产蛋母鸡，并采用本专利技术
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第4条的方法制备抗HSV-2特异性IgY。分别以HSV-1和HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测所制得的抗HSV-2特异性IgY抗体效价。结果如下表 从以上结果看出，不但对直接作为抗原免疫的HSV-2有高的抗体效价，而且对没有直接作为抗原免疫的同种不同型的HSV-1也有一定的抗HSV-1活性。这提示HSV-1和HSV-2具有共同抗原决定簇。实验例5将抗TP特异性IgY，抗GC特异性IgY、抗HPV特异性IgY和抗HSV-2特异性IgY等量混合，加无菌蒸馏水稀释至0.4％浓度。分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测此抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价，结果如下表 从以上结果看出，以上述四种特异性IgY混合所制备的抗四种性病特异性复合IgY，达到抗四种性病病原体的理想活性效果。实验例6将上述
技术实现思路
第2条的方法制作的四种复合抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡以及产蛋鸵鸟，再分别采用本专利技术的方法制备得到(1)抗四种性病特异性复合鸭IgY、(2)抗四种性病特异性复合鹅IgY、(3)抗四种性病特异性复合火鸡IgY、(5)抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY。然后用ELISA方法，分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，检测所制得的抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价。 从以上试验结果可以看出，采用本专利技术的方法制作抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡和产蛋鸵鸟，再采用本专利技术的方法分别制得抗四种性病特异性复合鸭IgY、抗四种性病特异性复合鹅IgY、抗四种性病特异性复合火鸡IgY、抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY四种不同的IgY，虽然免疫的禽类不同，但均获得了较高的效价。虽然免疫产蛋鸵鸟和产蛋火鸡所制得的IgY抗体效价稍微低了一些，但是，由于鸵鸟和火鸡蛋个体重量重，每个免疫蛋所能提取得到的IgY比鸡免疫蛋、鸭免疫蛋和鹅免疫蛋皆量大，这点对于工业化大规模生产，也是十分可取的。实施例1制备抗四种性病特异性复合IgY抗原制备选取TP、GC、HPV和HSV-2标准株，分别按他们的培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、稀释分装；将TP、GC、HPV和HSV-2四种病原体液，按1∶1∶1∶1比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：包晟，杨荣鑑，林元藻，
申请(专利权)人：雅臣药业集团远东有限公司，
类型：发明
国别省市：