苏丹草品种真实性检测方法及专用引物技术

本发明专利技术公开了一种检测或辅助检测苏丹草国审品种方法。本发明专利技术提供了一组用于检测或辅助检测苏丹草国审品种的引物组，由引物对P01-引物对P18共18个引物对组成。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术筛选出18对SSR引物，用其对牧草进行PCR扩增，得到的18种产物的电泳图谱与9种苏丹草国审品种的电泳图谱进行目的特异条带的谱带比较，若18种产物的电泳图谱中至少16种与目的特异条带的谱带一致，则可以候选判断该牧草与为同一品种。根据本发明专利技术的引物和方法进行鉴定，可以简单、快速、高效、准确鉴定出待测苏丹草是否为9个国审品种真伪性。

【技术实现步骤摘要】
苏丹草品种真实性检测方法及专用引物
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种苏丹草品种真实性检测方法及专用引物。
技术介绍
苏丹草(Sorghum, Sudanense)为禾本科一年生草本,原产于非洲北部苏丹(高原)地区，在我国从北到南均有栽培地域极其广泛。在北方地区作为夏季青饲草及冬季青贮草，并且已经形成了我国主要的种子生产基地；南方地区做为长年的家畜青贮草及优良的鱼饲草，素有“渔业青饲料之王”美称。目前通过国家审定的品种有9个，分别是宁农(育成品种)、乌拉特2号(育成品种)、蒙农青饲3号(育成品种)、蒙农青饲2号(育成品种)、新苏2号(育成品种)、乌拉特I号(育成品种)、奇台(育成品种)、盐池(育成品种)、内农I号(育成品种)。农业部自2006年开始对全国的生产和销售的草种质量进行了连续抽查，结果显示苏丹草等重要草种品种掺假的现象比较严重，常常发生不法经营者利用假冒伪劣的种子坑农害农，不仅扰乱了正常的种子市场贸易，又造成了很大的经济损失。由于缺乏快速、准确地鉴定方法，该问题迟迟得不到解决。传统的品种鉴定多采用形态学鉴定方法，但其鉴定周期长、费用高且易受环境影响。现有的其他品种鉴定方法中，同工酶和蛋白质电泳应用较广，但检测到的位点少、蛋白质类型不多、多态性水平低，不能有效区分同一作物不同品种；RFLP技术较繁琐，对人员设备要求较高；RAPD技术相对简单，然而可靠性差难以在品种鉴定中广泛应用。SSR指纹图谱技术在作物育种和品种鉴定中有广泛应用。利用SSR指纹图谱鉴别品种真伪的优越性在于:①数量大，多态性水平高，可鉴定表型难于鉴别的品种不受任何环境因素的影响，可在生长发育的任何阶段取材鉴定分离出的样品DNA可长期保存，这对于进行追溯性或仲裁性鉴定非常有利；④不仅准确可靠，而且还便于实现自动化。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供用于检测或辅助检测待测草种是否为苏丹草国审品种的引物组。本专利技术提供的引物组，由引物对POl-引物对P18共18个引物对组成；所述引物对POl由序列表中序列I所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P02由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；所述引物对P03由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；所述引物对P04由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成；所述引物对P05由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所示的单链DNA分子组成；所述引物对P06由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序列12所示的单链DNA分子组成；所述引物对P07由序列表中序列13所示的单链DNA分子和序列表中序列14所示的单链DNA分子组成；所述引物对P08由序列表中序列15所示的单链DNA分子和序列表中序列16所示的单链DNA分子组成；所述引物对P09由序列表中序列17所示的单链DNA分子和序列表中序列18所示的单链DNA分子组成；所述引物对PlO由序列表中序列19所示的单链DNA分子和序列表中序列20所示的单链DNA分子组成；所述引物对Pll由序列表中序列21所示的单链DNA分子和序列表中序列22所示的单链DNA分子组成；所述引物对P12由序列表中序列23所示的单链DNA分子和序列表中序列24所示的单链DNA分子组成；所述引物对P13由序列表中序列25所示的单链DNA分子和序列表中序列26所示的单链DNA分子组成；所述引物对P14由序列表中序列27所示的单链DNA分子和序列表中序列28所示的单链DNA分子组成；所述引物对P15由序列表中序列29所示的单链DNA分子和序列表中序列30所示的单链DNA分子组成；所述引物对P16由序列表中序列31所示的单链DNA分子和序列表中序列32所示的单链DNA分子组成；所述引物对P17由序列表中序列33所示的单链DNA分子和序列表中序列34所示的单链DNA分子组成；所述引物对P18由序列表中序列35所示的单链DNA分子和序列表中序列36所示的单链DNA分子组成；上述引物组中的各条引物均独立包装；所述苏丹草国审品种为奇台、新苏2号、宁农、乌拉特I号、盐池、乌拉特2号、内农I号、蒙农青饲2号或蒙农青饲3号。本专利技术的另一个目的是提供一种用于检测或辅助检测待测草种是否为苏丹草国审品种的PCR试剂组。本专利技术提供的PCR试剂组，由如下18种PCR试剂组成:I)由上述引物组中的引物对P01、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；2)由上述引物组中的引物对P02、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；3)由上述引物组中的引物对P03、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；4)由上述引物组中的引物对P04、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；5)由上述引物组中的引物对P05、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；6)由上述引物组中的引物对P06、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；7)由上述引物组中的引物对P07、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；8)由上述引物组中的引物对P08、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；9)由上述引物组中的引物对P09、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；10)由上述引物组中的引物对P10、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；11)由上述引物组中的引物对Pll、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；12)由上述引物组中的引物对P12、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；13)由上述引物组中的引物对P13、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；14)由上述引物组中的引物对P14、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；15)由上述引物组中的引物对P15、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；16)由上述引物组中的引物对P1 6、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；17)由上述引物组中的引物对P17、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水；18)由上述引物组中的引物对P18、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水。上述的PCR试剂组中，每个引物对中的每条引物在对应的所述PCR试剂中的终浓度为0.25 μ mol/L ;所述PCR试剂均独立包装；所述苏丹草国审品种为奇台、新苏2号、宁农、乌拉特I号、盐池、乌拉特2号、内农I号、蒙农青饲2号或蒙农青饲3号。含有上述引物组的试剂盒或含有上述PCR试剂组的试剂盒也是本专利技术保护的范围。上述引物组、上述PCR试剂组或上述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品是否为苏丹草国审品种中的应用也是本专利技术保护的范围。上述的应用中:所述苏丹草国审品种为奇台、新苏2号、宁农、乌拉特I号、盐池、乌拉特2号、内农I号、蒙农青饲2号或蒙农青饲3号。本专利技术的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测草种是否为9个苏丹草国审品种中任一种的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤:I)用上述引物组中的18个引物对、上述PCR试剂组或权利要求5所述的试剂盒对待测草种和9个苏丹草国审品种进行SSR扩增，电泳检测扩增产物，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测或辅助检测待测草种是否为苏丹草国审品种的引物组，由引物对P01‑引物对P18共18个引物对组成；所述引物对P01由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；所述引物对P02由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；所述引物对P03由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；所述引物对P04由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成；所述引物对P05由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所示的单链DNA分子组成；所述引物对P06由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序列12所示的单链DNA分子组成；所述引物对P07由序列表中序列13所示的单链DNA分子和序列表中序列14所示的单链DNA分子组成；所述引物对P08由序列表中序列15所示的单链DNA分子和序列表中序列16所示的单链DNA分子组成；所述引物对P09由序列表中序列17所示的单链DNA分子和序列表中序列18所示的单链DNA分子组成；所述引物对P10由序列表中序列19所示的单链DNA分子和序列表中序列20所示的单链DNA分子组成；所述引物对P11由序列表中序列21所示的单链DNA分子和序列表中序列22所示的单链DNA分子组成；所述引物对P12由序列表中序列23所示的单链DNA分子和序列表中序列24所示的单链DNA分子组成；所述引物对P13由序列表中序列25所示的单链DNA分子和序列表中序列26所示的单链DNA分子组成；所述引物对P14由序列表中序列27所示的单链DNA分子和序列表中序列28所示的单链DNA分子组成；所述引物对P15由序列表中序列29所示的单链DNA分子和序列表中序列30所示的单链DNA分子组成；所述引物对P16由序列表中序列31所示的单链DNA分子和序列表中序列32所示的单链DNA分子组成；所述引物对P17由序列表中序列33所示的单链DNA分子和序列表中序列34所示的单链DNA分子组成；所述引物对P18由序列表中序列35所示的单链DNA分子和序列表中序列36所示的单链DNA分子组成。...

【技术特征摘要】
1.用于检测或辅助检测待测草种是否为苏丹草国审品种的引物组，由引物对POl-引物对P18共18个引物对组成； 所述引物对POl由序列表中序列I所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P02由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P03由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P04由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P05由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P06由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序列12所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P07由序列表中序列13所示的单链DNA分子和序列表中序列14所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P08由序列表中序列15所示的单链DNA分子和序列表中序列16所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P09由序列表中序列17所示的单链DNA分子和序列表中序列18所示的单链DNA分子组成； 所述引物对PlO由序列表中序列19所示的单链DNA分子和序列表中序列20所示的单链DNA分子组成； 所述引物对Pll由序列表中序列21所示的单链DNA分子和序列表中序列22所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P12由序列表中序列23所示的单链DNA分子和序列表中序列24所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P13由序列表中序列25所示的单链DNA分子和序列表中序列26所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P14由序列表中序列27所示的单链DNA分子和序列表中序列28所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P15由序列表中序列29所示的单链DNA分子和序列表中序列30所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P16由序列表中序列31所示的单链DNA分子和序列表中序列32所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P17由序列表中序列33所示的单链DNA分子和序列表中序列34所示的单链DNA分子组成； 所述引物对P18由序列表中序列35所示的单链DNA分子和序列表中序列36所示的单链DNA分子组成。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于:所述引物组中的各条引物均独立包装; 所述苏丹草国审品种为奇台、新苏2号、宁农、乌拉特I号、盐池、乌拉特2号、内农I号、蒙农青饲2号或蒙农青饲3号。3.一种用于检测或辅助检测待测草种是否为苏丹草国审品种的PCR试剂组，由如下18种PCR试剂组成: 1)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P01、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 2)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P02、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 3)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P03、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 4)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P04、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 5)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P05、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 6)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P06、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 7)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P07、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 8)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P08、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 9)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P09、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 10)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P10、PCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 11)由权利要求1或2所述引物组中的引物对PlUPCR扩增缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水； 12)由权利要求1或2所述引物组中的引物对P...

【专利技术属性】
技术研发人员：高秋，孙娟，冯葆昌，马金星，张义，贠旭江，屠德鹏，李玉荣，王杰，齐晓，刘芳，李存福，王梅娟，何珊珊，
申请(专利权)人：全国畜牧总站，
类型：发明
国别省市：北京;11