一种适于水稻品种真实性鉴定的ＩＳＳＲ指纹图谱构建方法技术

本发明专利技术公开了一种适于水稻品种真实性鉴定的ＩＳＳＲ指纹图谱构建方法，提供一种快速、准确的水稻品种的ＩＳＳＲ指纹图谱构建方法及其应用。该方法包括以下步骤：用改进的ＣＴＡＢ法提取水稻幼苗ＤＮＡ；以幼苗ＤＮＡ为模板进行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增；对ＰＣＲ产物进行１．５％琼脂糖凝胶电泳检测并在紫外光下拍照；构建水稻品种的ＤＮＡ指纹图谱，用于水稻品种真实性鉴定。本发明专利技术ＤＮＡ指纹图谱是以水稻品种编号、扩增谱带带型、每条谱带的位点编号及“０”“１”阵列为基本信息，该方法具有操作简单、直观实用等特点，可以促进ＩＳＳＲ分子标记技术在准确、快速、简便的水稻品种真实性鉴定中更广泛地应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种适于水稻品种真实性鉴定的ＩＳＳＲ指纹图谱构建方法，该方法包括ＤＮＡ提取、ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增及电泳检测、ＤＮＡ指纹图谱构建等内容。　　具体包括以下步骤：　　（１）ＤＮＡ提取　　以不同水稻品种种子为材料，于苗期取幼嫩叶片采用改进的ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡ，取部分ＤＮＡ溶液测其浓度，稀释至２０ｎｇ／μＬ，于－２０℃保存备用；　　（２）ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增及电泳检测　　采用２５μＬ反应体系，Ｍｇ２＋浓度为２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物浓度为０．２μｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰｓ的浓度为０．２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＤＮＡ用量为４０ｎｇ，Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶的用量为１Ｕ；　　ＰＣＲ扩增程序条件为：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性４５ｓ，５０－５６℃退火４５ｓ，７２℃延伸９０ｓ，４０个循环；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃保存；　　用１．５％琼脂糖凝胶电泳，Ｇｅｌ－Ｒｅｄ染色，检测ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物，在紫外灯下拍照；　　（３）ＤＮＡ指纹图谱构建　　根据每条引物呈现的条带信息建立指纹图谱：以水稻品种编号和扩增谱带带型为纵列，以每条谱带的位点编号为横行，在每一纵横交结处，有扩增谱带用“１”表示，没有扩增谱带用“０”表示，分别制得每条引物对不同品种的ＤＮＡ指纹图谱表，以２４个水稻品种为例，引物ＵＢＣ　８１５对２４个水稻品种构建的指纹图谱表为：　　＊＊＊　　引物ＵＢＣ　９００对２４个水稻品种构建的指纹图谱表为：　　＊＊＊　　（４）利用构建的ＤＮＡ指纹图谱进行品种真实性鉴定　　将待鉴定的水稻品种样品在上述条件下所建立的指纹图谱与已构建的ＤＮＡ指纹图谱相比较，与所建ＤＮＡ指纹图谱不同的即为假种子。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晋，朱岩芳，关亚静，祝水金，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]