本发明专利技术提供了一种检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括CaMV‑F3引物、CaMV‑B3引物、CaMV‑FIP引物、CaMV‑BIP引物、CaMV‑LF引物、CaMV‑LB引物。本发明专利技术还提供了利用所述LAMP引物组进行CaMV35S启动子检测的方法。本发明专利技术提供的LAMP引物组，可实现对CaMV35S启动子的检测，并且检测仪器简单，无需昂贵的PCR仪投入，结果便于判断，降低了实验室投入，适合推广使用。
LAMP primer set for detecting genetically modified component CaMV35S and method thereof
The invention provides a LAMP primer set for detecting CaMV35S promoter, the LAMP primer group including CaMV F3 primers and B3 primer, CaMV CaMV FIP primer, CaMV BIP, CaMV LF primer primer and CaMV LB primer. The invention also provides a method for detecting the CaMV35S promoter using the LAMP primer set. LAMP primer set provided by the invention can realize the detection of the CaMV35S promoter, and the detection instrument is simple, no need to put PCR on expensive instrument, the result for judgment, reduce the laboratory input, suitable for use.
【技术实现步骤摘要】
用于检测转基因成分CaMV35S的LAMP引物组及其方法
本专利技术属于生物分子检测
，具体涉及一种用于检测转基因成分CaMV35S的LAMP引物组及其方法。
技术介绍
伴随着转基因技术的迅猛发展，全球农业生物技术的产业化速度也随之大大加快，转基因作物的推广种植面积逐年递增，然而，由于目前对转基因产品的安全性尚无定论，各国政府和消费者普遍对此采取谨慎的态度，纷纷出台一系列法规对转基因产品的贸易加以限制，要求对转基因作物及其加工产品进行标识。因此，建立完善的转基因农产品及食品检测体系显得尤其重要。CaMV35S是外源基因在植物中表达的常用调控元件，可作为转基因生物的标记，目前大部分转基因生物都含有CaMV35S启动子。CaMV35S启动子的广泛使用使其成为进行转基因初筛的首要目标，因此可减少分析实验室进行特异性检测的数量。在风险分析和商业化过程中，考虑到转基因生物的大规模筛选，筛选CaMV35S启动子也是一种有效的方法。现有技术中对于CaMV35S启动子的特异性检测主要有普通PCR方法、实时荧光PCR检测方法。由于普通PCR方法、实时荧光PCR检测方法需要经历变温过程及其相应的快速升降温的温度控制，也就需要价格高昂的专用PCR设备，而现场检测要求降低对仪器的依赖，无法满足现场检测需要。不仅如此，PCR方法还存在污染严重、假阳性率高的问题，限制了PCR检测方法的推广。环介导等温扩增技术（英文名称为loop-mediatedisothermalamplification，简称LAMP）能在等温条件下，短时间内进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精确、低价”的基因扩增方法。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。本专利技术将LAMP技术运用于农产品及食品中转基因成分CaMV35S启动子的快速检测，可以免除高昂的仪器投入，便于基层及现场检测使用。目前尚未出现可用于检测CaMV35S启动子且适于大规模应用的LAMP引物组及其方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是提供一种可用于检测CaMV35S启动子且适于大规模应用的LAMP引物组。本专利技术所要解决的第二个技术问题是现有技术中检测CaMV35S启动子的方法存在需要投入高昂的仪器、检测操作繁琐、检测成本较高的问题，进而提供一种操作简单、检测成本低的检测CaMV35S启动子的方法。本专利技术的检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括CaMV-F3引物、CaMV-B3引物、CaMV-FIP引物、CaMV-BIP引物、CaMV-LF引物、CaMV-LB引物；其中，所述CaMV-F3引物具有如SEQIDNo.1所示的序列结构，所述SEQIDNo.1为5`-GGCTCCTACAAATGCCATCA-3`；所述CaMV-B3引物具有如SEQIDNo.2所示的序列结构，所述SEQIDNo.2为5`-GATAGTGGGATTGTGCGTCA-3`；所述CaMV-FIP引物具有如SEQIDNo.3所示的序列结构，所述SEQIDNo.3为5`-GGTGGGGGTCCATCTTTGGGTTTTAGGAAAGGCCATCGTTGAA-3`；所述CaMV-BIP引物具有如SEQIDNo.4所示的序列结构，所述SEQIDNo.4为5`-CACGAGGAGCATCGTGGAAAAATTTTACGTCAGTGGAGATATCACA-3`；所述CaMV-LF引物具有如SEQIDNo.5所示的序列结构，所述SEQIDNo.5为5`-ACCACTGTCGGCAGAGG-3`；所述CaMV-LB引物具有如SEQIDNo.6所示的序列结构，所述SEQIDNo.6为5`-GAAGACGTTCCAACCACGTCTTCA-3`。优选地，所述CaMV-F3引物、CaMV-B3引物、CaMV-FIP引物、CaMV-BIP引物、CaMV-LF引物、CaMV-LB引物的摩尔比为（1-3）:（1-3）：（4-24）:（4-24）：（2-12）：（2-12）。本专利技术的检测CaMV35S启动子的方法，利用本专利技术所述的检测CaMV35S启动子的LAMP引物组进行检测。优选地，所述的检测CaMV35S启动子的方法，包括以下步骤：将权利要求1或2中所述的检测CaMV35S启动子的LAMP引物组与待测溶液混合，将混合液置于55-65℃下培育10min以上，观察或检测所述混合液的变化情况。优选地，所述混合液中还包括BstDNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸。进一步优选地，所述混合液中还包括BstDNA聚合酶缓冲液、甜菜碱、MgSO4、去离子水中的一种或多种。优选地，所述混合液中还包括金属指示剂；所述金属指示剂为4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚钠盐。进一步优选地，所述混合液中还包括Mncl2；所述Mncl2与所述金属指示剂的用量摩尔比为1:1。本专利技术还提供了包括本专利技术所述的LAMP引物组的检测试剂盒。本专利技术的上述技术方案，相比现有技术具有以下优点：（1）本专利技术的检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，可实现对CaMV35S启动子的检测，并且具有简单、快速、特异性强、灵敏度高的优点；更为重要的是，采用本专利技术的LAMP引物组对CaMV35S启动子进行检测，可实现现场高通量快速检测，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，所需的检测仪器简单，无需昂贵的PCR仪投入，结果可以通过常规的电泳判断，也可以通过颜色变化直接判断，降低了实验室投入，检测成本远低于荧光定量PCR，适合基层实验室推广使用；（2）本专利技术的检测CaMV35S启动子的方法，采用4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚钠盐作为金属指示剂，由于环介导等温扩增反应的灵敏度高，极易造成污染，这也是环介导等温扩增容易产生假阳性的原因，本专利技术采用的所述金属指示剂能够在反应液配制时加入，反应结束后，不需开盖，直接通过反应液颜色变化即可判断结果，减少了气溶胶污染的可能性，避免了假阳性的产生；（3）本专利技术的检测CaMV35S启动子的方法，除将LAMP引物组与待测溶液混合外，还在混合液中加入了BstDNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸，保证了环介导等温扩增的顺利进行，并且还加入了BstDNA聚合酶缓冲液、MgSO4、甜菜碱、去离子水，多重试剂协同作用，使得其检测的灵敏度提高、特异性增强、检测率提高、检测速度加快，具有良好的应用前景。具体实施方式实施例1检测CaMV35S启动子的LAMP引物组的设计本实施例中，检测CaMV35S启动子的LAMP引物组包括所述LAMP引物组包括CaMV-F3引物、CaMV-B3引物、CaMV-FIP引物、CaMV-BIP引物、CaMV-LF引物、CaMV-LB引物；其中，所述CaMV-F3引物具有如SEQIDNo.1所示的序列结构；所述CaMV-B3引物具有如SEQIDNo.2所示的序列结构；所述CaMV-FIP引物具有如SEQIDNo.3所示的序列结构；所述CaMV-BIP引物具有如SEQIDNo.4所示的序列结构；所述CaMV-LF引物具有如SEQIDNo.5所示的序列结构；所述CaMV-LB引物具有如SEQIDNo.6所示的序列结构。所述SEQIDNo.1：5`-GGCTCCTACAAATGCCATCA-3`本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括CaMV‑F3引物、CaMV‑B3引物、CaMV‑FIP引物、CaMV‑BIP引物、CaMV‑LF引物、CaMV‑LB引物；其中，所述CaMV‑F3引物具有如SEQ ID No.1所示的序列结构；所述CaMV‑B3引物具有如SEQ ID No.2所示的序列结构；所述CaMV‑FIP引物具有如SEQ ID No.3所示的序列结构；所述CaMV‑BIP引物具有如SEQ ID No.4所示的序列结构；所述CaMV‑LF引物具有如SEQ ID No.5所示的序列结构；所述CaMV‑LB引物具有如SEQ ID No.6所示的序列结构。
【技术特征摘要】
1.检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括CaMV-F3引物、CaMV-B3引物、CaMV-FIP引物、CaMV-BIP引物、CaMV-LF引物、CaMV-LB引物；其中，所述CaMV-F3引物具有如SEQIDNo.1所示的序列结构；所述CaMV-B3引物具有如SEQIDNo.2所示的序列结构；所述CaMV-FIP引物具有如SEQIDNo.3所示的序列结构；所述CaMV-BIP引物具有如SEQIDNo.4所示的序列结构；所述CaMV-LF引物具有如SEQIDNo.5所示的序列结构；所述CaMV-LB引物具有如SEQIDNo.6所示的序列结构。2.根据权利要求1所述的检测CaMV35S启动子的LAMP引物组，其特征在于，所述CaMV-F3引物、CaMV-B3引物、CaMV-FIP引物、CaMV-BIP引物、CaMV-LF引物、CaMV-LB引物的摩尔比为（1-3）:（1-3）：（4-24）:（4-24）：（2-12）：（2-12）。3.检测CaMV35S启动子的方法，其特征在于，利用权利要求1或2中...
【专利技术属性】
技术研发人员：王德国，王永真，郭孝辉，肖付刚，张永清，郭卫芸，
申请(专利权)人：许昌学院，
类型：发明
国别省市：河南,41
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