本发明专利技术涉及抗癌药物力达霉素的强化融合蛋白：I131L、F132L突变后的mIL3-LDM，其编码基因；还涉及所述强化融合蛋白的基因工程构建方法和所述强化融合蛋白的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤学、蛋白组学及生物药学领域，提供了可以产生靶向肿瘤杀伤作用的融合蛋白、制备方法以及在肿瘤的靶向治疗药物中应用。
技术介绍
白血病是造血干细胞的恶性克隆性疾病，它的死亡率在导致儿童及35岁以下成年人死亡的恶性肿瘤中排首位。常规放疗化疗可以去除肿瘤组织中大多数增殖细胞及遗传不稳定性细胞，但不能去除肿瘤干细胞，从而造成了肿瘤复发和转移，同时缺乏针对性的常规放化疗也可能损害体内某些类型的正常细胞，出现较明显的毒副反应。肿瘤干细胞具有类似正常干细胞的自我保护特性，如有效的DNA修复、高表达多药耐药型膜转运蛋白以及处于相对静止状态及拥有特定的微环境，使其能够逃逸现有的肿瘤治疗手段，针对这些保护机制，并利用肿瘤干细胞与正常干细胞的之间的差异进行靶向治疗，才可能实现根治白血病的目的。在肿瘤干细胞靶向治疗中，靶点的选择非常重要，已知CD123在急性髓系白血病干细胞、变异性B细胞慢性淋巴增殖性疾病特别是毛细胞白血病细胞、以及不成熟的急性T淋巴细胞白血病细胞表面均可见表达，尤其在急性髓系白血病干细胞表面呈高表达，而在正常造血干细胞表面几乎不表达此抗原，且⑶123是IL-3受体的α链，依靠细胞因子与细胞因子受体的结合方式，亲和力较抗原抗体结合更高效，因此CD123可作为治疗AML的有效靶点。虽然在靶向治疗中使用最多、最为成熟的是与肿瘤相关抗原相关的单克隆抗体，但免疫原性大，一次注射毒副反应大，患者耐受性差等缺点也限制了其进一步的应用。而细胞因子及其受体结合的靶向治疗导向特异性强、杀伤力高、稳定性好、毒副作用小、不易产生耐药，从理论上讲 ，既可靶向杀伤肿瘤细胞，还不会导致继发性肿瘤，是目前国内外学者的关注热点。IL-3融合蛋白在白血病治疗中的应用已经取得了一定进展，1991年美国Immunex公司研制的GM-CSF/IL-3融合蛋白命名为Pixykine、其后IL-3与TPO的融合蛋白、IL-3与白喉毒素的融合蛋白DT388IL3、IL-3与bax的融合蛋白相继问世，经过体内外试验，DT388IL3以其良好的临床疗效、较小的毒副作用脱颖而出，目前已进入临床II期实验阶段。但是DT388本身分子量较大难内化并具有一定免疫原性，体外实验纯化过程中也显示其稳定性稍差，在实际应用方面还存在很多不足。因此研制以CD123为靶点的高效、小型化且性能稳定的靶向药物成为针对肿瘤干细胞特异性靶向治疗的新焦点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的、由IL3与力达霉素构建的融合蛋白及其制备方法，以及该融合蛋白用于制备治疗白血病的药物组合物的用途。在本专利技术中所提及的术语均按下述定义来理解。“LDP”等同于力达霉素的辅基蛋白，“LDM”等同于“LDP_AE”Sr辅基蛋白上结合有发色团AE”。发色团和辅基蛋白通过非共价键结合，两者结合具有特异性和牢固性，LDM的辅基蛋白和发色团可以拆分和进行分子重新组装。在本文中提到的“AE”是指具有下式I所示化学结构的发色团，LDM发色团的化学名:(2R，7S，9R，I OR) ~ ~ 氨基-7,8- (2*-氯-6*-羟基-1*，4*-亚苯基)-10- (4，-去氧-4’-二甲氨基-5’，5’-二甲基-吡喃核糖基)-4，8-氧杂-5-氧代-1，11，13-三烯-15，18- 二炔-三环-2-十九碳醇-2”，3”- 二氢-7”-甲氧基-2”-亚甲基-3”-氧代-1”，4”-苯并恶嗪-5”-羧酸酯。分子式=C43H42O13N3Cl权利要求1.融合蛋白，其选自下述序列之一: (a)由SEQID NO:1所示的氨基酸序列构成的蛋白； (b)具有SEQID NO:2所示的氨基酸序列的生物学功能、仅在第131位1-L、132位F-L突变的氨基酸序列构成的蛋白。2.权利要求1的融合蛋白，其还功能性地结合有式(I)所示结构的发色团AE。3.核酸分子，其编码权利要求1的融合蛋白的基因，其选自下述序列之一: (a)SEQ ID NO:3所示的编码SEQ ID NO:1的核苷酸序列； (b)SEQID NO:4所示的编码SEQ ID NO:2的核苷酸序列(由于密码子简并性造成的同氨基酸序列也在保护范围内)；4.载体，其可操作地连接有权利要求3所述的核酸分子。5.权利要求4的载体，所述载体是质粒。6.宿主菌，其包含权利要求4所述的载体。7.制备权利要求2 的融合蛋白的方法，包括以下步骤: (a)将IL3和mIL3编码基因与力达霉素辅基蛋白LDP基因可操作地连接到本室改造后的质粒pET28a中，得到重组表达质粒pET28a IL3-LDP和mIL3_LDP ； (b)在大肠杆菌BL21中诱导表达融合蛋白IL3-LDP和mIL3-LDP； (c)纯化步骤(b)中获得的融合蛋白； (d)使步骤(c)中获得的融合蛋白与式(1)的发色团组装； (e)任选地，其还包括测定步骤(d)中组装后的融合蛋白的生物学活性的步骤。8.药物组合物，其中含有药学有效量的权利要求1或者2所述的融合蛋白，任选地，还含有药学上允许的佐剂。9.权利要求1或者2的融合蛋白在制备用于肿瘤靶向治疗的药物中的用途。10.权利要求9的用途，所述药物用于靶向杀伤急性髓系白血病细胞。11.权利要求9的用途，其中的急性髓系白血病是人急性髓系白血病。12.权利要求9的用途，其包括向有此需要的受试者给予有效量的项目I或者2的融合蛋白。13.权利要求9的用途，其中所述疾病是CD123阳性的人急性髓系白血病。全文摘要本专利技术涉及抗癌药物力达霉素的强化融合蛋白I131L、F132L突变后的mIL3-LDM，其编码基因；还涉及所述强化融合蛋白的基因工程构建方法和所述强化融合蛋白的用途。文档编号C12N15/62GK103102416SQ201110139158公开日2013年5月15日 申请日期2011年7月28日 优先权日2011年7月28日专利技术者杨纯正, 甄永苏, 邵荣光, 熊冬生, 张砚君, 苗庆芳, 刘荣, 张秀丽, 彭红薇, 胡蕴惠, 李双静, 林阳, 李真真, 颜次慧, 姜琳琳 申请人:中国医学科学院血液病医院本文档来自技高网...
【技术保护点】
融合蛋白，其选自下述序列之一：(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成的蛋白；(b)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的生物学功能、仅在第131位I‑L、132位F‑L突变的氨基酸序列构成的蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨纯正，甄永苏，邵荣光，熊冬生，张砚君，苗庆芳，刘荣，张秀丽，彭红薇，胡蕴惠，李双静，林阳，李真真，颜次慧，姜琳琳，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院，
类型：发明
国别省市：天津;12
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