重组人Prx‑6蛋白在治疗烧烫伤方面的用途制造技术

本发明专利技术提供了重组人Prx‑6蛋白在治疗烧烫伤方面的用途。具体地，本发明专利技术提供了人Prx‑6蛋白在制备治疗烧烫伤的药物中的用途。本发明专利技术的实验表明，Prx‑6蛋白在治疗烧烫伤过程中有重要的促进伤口愈合作用。

The use of recombinant human Prx protein 6 in treatment of burn area

The present invention provides the use of recombinant human Prx protein 6 in treatment of burn area. Specifically, the present invention provides the use of Prx 6 protein in drug preparation in the treatment of burns. The experiment of the invention indicates that Prx 6 protein in the burn treatment process is important in promoting wound healing.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术和医学领域，具体地说，涉及重组人Prx-6蛋白在治疗烧烫伤方面的用途。
技术介绍
烧烫伤是常见病，多发病，也是致残率较高的创伤性疾病。轻者也给伤者带来很大痛苦，重者常常损害器官功能，给患者的工作和生活造成很大的不便，同时因为烧烫伤较多发生在人的暴露部位，愈合后的疤痕毁坏伤者的容貌，还会给患者的心理造成不良影响，因此，对中轻度的烧/烫伤则要尽量缩短愈合期，减少病人痛苦，并尽量减少疤痕形成。对严重烧烫伤者应尽量减少再灌注引起的各种脏器损伤及继发感染等并发症。目前临床治疗烧伤常采用的方法，一般是在进行创面早期处理后，采用包扎疗法或采用暴露疗法进行治疗。无论采用哪种方法，在早期清创时，都要进行创面抗感染处理，清创所选用的抗感染药物主要有三类：一是中草药制剂，如四季青、毛冬青、黄连、黄柏等；二是化学药物制剂，如双氧水、新洁尔灭、甲磺灭脓；三是抗生素制剂如青霉素、庆大霉素。由于大多数药物均可从创面吸收，大面积使用这些药物，尤其浓度过大或使用粉剂时常常可引起中毒或内脏损害。再者这些药物一般都有一定的刺激性，在使用时常常会给患者增加痛苦。Peroxiredoxins(Prxs)是新近发现的一类非硒依赖过氧化物酶家族蛋白，广泛存在于各种生物体内。根据Prxs蛋白保守cys个数的不同(1个或2个)，可分为1-Cys或2-Cys亚类。迄今，已在哺乳动物组织中发现了6种Prxs蛋白。其中Prx1-5为2-Cys酶，以硫氧还蛋白作为电子供体；Prx-6蛋白是哺乳动物中唯一的1-Cys酶，以谷胱苷肽(GSH)为电子供体(还原剂)。Prx-6蛋白首先是在牛眼睫状体中被分离获得的，又名LTW4、抗氧化蛋白2、Clara细胞蛋白26、p67吞噬细胞氧化酶(phox)结合蛋白、角质化细胞生长因子(KGF)调节基因1等，由224个氨基酸组成，分子量为25.1KDa。分析该蛋白的晶体结构，发现了一个由80个氨基酸组成的硫氧还蛋白折叠，其中包含四个β折叠和两个α螺旋。大量研究表明，硫氧还蛋白折叠结构在一些参与氧化还原反应的蛋白(如硫氧还蛋白、谷氧还蛋白、GPx1蛋白、谷胱甘肽S-转移酶等)中普遍存在。另外，尽管Prx-6和GPx1蛋白的一级结构只有17％的同源性，但是它们的三级结构具有极高的同源性。这种结构上的相似性，预示着这两种蛋白在功能上的相关。从初期细胞实验到近年来动物体内实验，越来越多的研究证明了Prx-6蛋白具有抗氧化损伤功能。细胞水平的研究表明，过表达Prx-6蛋白能明显减少脂质过氧化作用，降低细胞质膜损伤；抑制Prx-6蛋白的表达，可观察到明显的脂质过氧化、脂膜损伤及细胞凋亡。活体水平研究表明，Prx-6转基因小鼠对高氧损伤有显著的保护作用；Prx-6敲除小鼠的抗氧化损伤能力明显降低。但是，这些研究主要是关于Prx-6蛋白在心脏、肺或皮肤组织中的抗氧化损伤作用，并未涉及到Prx-6蛋白在治疗烧烫伤方面的用途。综上所述，目前尚缺乏令人满意的治疗烧烫伤的药物，因此本领域迫切需要开发新的能够用于治疗烧烫伤的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供重组人Prx-6蛋白在治疗烧伤和烫伤方面的应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种Prx-6蛋白在制备治疗烧烫伤的药物中的用途。在另一优选例中，所述的Prx-6蛋白是人Prx-6蛋白。在另一优选例中，所述的Prx-6蛋白是重组蛋白。在另一优选例中，所述的Prx-6蛋白包括氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的蛋白或其与表达标签(如6-His)形成的融合蛋白。在本专利技术的第二方面，提供了一种用于治疗烧烫伤的药物组合物，所述的药物组合物含有Prx-6蛋白以及药学上可接受的载体，并且所述的药物组合物为外用制剂。在另一优选例中，所述的Prx-6蛋白是人Prx-6蛋白。在另一优选例中，所述的Prx-6蛋白是重组蛋白。在另一优选例中，所述的外用制剂是膏剂、喷雾剂、或滴剂。在另一优选例中，所述的药物组合物还含有其他治疗烧烫伤的药物。在本专利技术的第三方面，提供了一种治疗烧烫伤的方法，包括步骤：对需要治疗的对象，在烧烫伤的创面上施用Prx-6蛋白蛋白或本专利技术第二方面中所述的药物组合物。在另一优选例中，所述的治疗包括：促进伤口愈合和减少创面的炎症反应。在另一优选例中，所述的对象是哺乳动物(包括人)。在另一优选例中，所述的施用包括施涂或喷涂。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了Prx-6基因PCR扩增结果。泳道1：空白对照；泳道2：Prx-6；M：分子量标准品。图2显示了Prx-6蛋白亲和纯化色谱图。峰1：杂蛋白；峰2：Prx-6目的蛋白。图3显示了Prx-6蛋白纯化电泳图(12％SDS-PAGE)。泳道1：蛋白分子量标准品(Fermentas)；泳道2：亲和层析纯化并脱盐后的Prx-6蛋白；泳道3：峰1；泳道4：上样穿出蛋白；泳道5：破菌上清(上样的样品)。图4显示了重组Prx-6蛋白对HEF细胞的抗氧化保护作用(P<0.05)。图5显示了重组Prx-6蛋白对H9C2细胞的抗氧化保护作用(P<0.05)。图6显示了重组Prx-6蛋白治疗小鼠烫伤的结果。图中，各图片(2-9d)从左至右依次为：对照组(2只)；Prx-6组(2只)；Prx-6+美宝组(2只)；美宝组(2只)。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，除了发现Prx-6蛋白具有抗氧化作用可保护HEF等细胞之外，还首次发现Prx-6蛋白居然具有促进烧伤和烫伤愈合的作用，因此可用于治疗烧烫伤。在此基础上完成了本专利技术。具体地，本专利技术的重组人Prx-6蛋白可直接涂覆于伤口表面，对于烧/烫伤创面可立即收敛，抑制渗出。涂后即刻成膜，杜绝内外感染，能加快新生肉芽组织生长，促进烧烫伤组织愈合，同时具有刺激性小、可有效控制感染、疗程短等优点。Prx-6蛋白如本文所用，术语“本专利技术蛋白”、“Peroxiredoxins蛋白”“prdx6蛋白”、“Prx-6蛋白”“过氧化氧化还原蛋白”等可互换使用，都指具有人Prx-6氨基酸序列的蛋白或多肽。它们可含有或不含起始的甲硫氨酸。应理解，这些术语既包括人(源)的蛋白，也包括在其他哺乳动物(如狗、牛、羊、猴、啮齿动物(如小鼠))中的具有同种功能的同系物或同源蛋白。此外，该术语包括野生型和突变型Prx-6蛋白。人prx-6基因的cDNA序列GenBank登录号：NM_004905.2，如SEQIDNO:1所示。人Prx-6的氨基酸序列的登录号为NP_004896，如SEQIDNO:2所示。应理解，由于人等哺乳动物的prdx6蛋白的核酸序列和氨基酸序列都是已知的，可以用本领域常规的DNA重组技术而获得其蛋白。一类特别优选的蛋白是prx-6类似物，即在其他哺乳动物(如牛、羊、兔、狗、猴、鼠等)中prx-6的同源蛋白。这些其他物种的同源蛋白的编码序列，可根据prdx6的序列，通过杂交或扩增的方法而获得，进而通过常规重组方法获得这些同源蛋白。药物组合物和施用方法本专利技术还提供了药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术prx-6蛋白和药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Prx‑6蛋白在制备治疗烧烫伤的药物中的用途，其中所述的治疗烧烫伤药物为外用制剂，并且所述外用制剂为膏剂、喷雾剂、或滴剂；且所述的Prx‑6蛋白是人Prx‑6蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种Prx-6蛋白在制备治疗烧烫伤的药物中的用途，其中所述的治疗烧烫伤药物为外用制剂，并且所述外用制剂为膏剂、喷雾剂、或滴剂；且所述的Prx-6蛋白是人Prx-6蛋白。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Prx-6蛋白是氨基酸序列如SEQIDNO：2所示的蛋白或其与表达标签形成的融合蛋白。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的外用制剂的用量为0.1-0.5mg/cm2创面。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的治疗烧烫伤药物用于使烧烫伤创面立即收...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建远，
申请(专利权)人：李建远，
类型：发明
国别省市：山东;37