抗GARP蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及在TGF-β存在的情况下与跨膜蛋白“以糖蛋白A为主的重复序列”(GARP)结合的抗体及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制TGF-β信号转导的人抗GARP蛋白。本专利技术还涉及治疗免疫病症以及疾病，例如癌症。专利技术背景自从20世纪90年代早期分子鉴定了第一个人肿瘤抗原，已经完成了多个临床试验来评估治疗性疫苗接种对具有共有肿瘤特异性抗原之癌症患者的作用(Boon，T.等Annu.Rev.Immunol.2006，24：175-208)。在约20％的患者中观察到肿瘤消退的证据，在5-10％中具有客观的临床应答。因此，具有肿瘤特异性抗原的疫苗接种是一种新的有前景的用于治疗癌症的疗法。需要来提高响应于疫苗接种之患者比例的策略。目前治疗性癌症疫苗之临床效力的主要限制性因素似乎不是疫苗本身，而是控制抗肿瘤T细胞不得不在其中工作之肿瘤微环境的局部因子。调节性T细胞(RegulatoryTcell)或Treg，是特化的抑制免疫应答的CD4+T淋巴细胞亚群。Treg功能不足导致自身免疫病理(autoimmunepathology)，而Treg功能过度可以抑制癌症患者中的抗肿瘤免疫应答。Treg抑制免疫应答的精确机制还未被完全理解。由于其免疫抑制功能，Treg代表了自发的或疫苗诱导的抗肿瘤免疫应答的潜在抑制剂。在鼠模型中，Treg的损耗可提高针对实验性肿瘤的免疫应答(Colombo等Nat.Rev.Cancer2007，7：880-887)。因此，靶向人中的Treg可以提高针对癌症之免疫治疗的效力。按照本专利技术人之前所示，由人Treg而非其他类型人T淋巴细胞产生有活性的TGF-β(Stockis，J.等Eur.J.Immunol.2009，39：869-882)，所以TGF-β可以成为目的靶标。然而，未发现针对hTGF-β的抗体是有前景的。在局灶性节段性肾小球硬化(focalsegmentalglomerulosclerosis，FSGS)，特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)和晚期恶性黑素瘤或肾细胞癌(renalcellcarcinoma，RCC)中进行了一期临床试验(LonningS等CurrentPharmaceuticalBiotechnology2011，12：2176-2189)。根据所述试验，在一些患者中观察到了不良事件。报道的主要不良反应包括在黑素瘤患者中形成角化棘皮瘤(keratoacanthoma，KA)和鳞状细胞癌(squamouscellcarcinoma，SCC)。黑素瘤患者中KA或SCC损伤有可能来自其增殖受内源性TGF-β抑制的癌前细胞(LonningS等CurrentPharmaceuticalBiotechnology2011，12：2176-2189)。因此，在癌症情况下使用抗TGF-β抗体的主要顾虑是它们可能促进新赘生物损伤的出现，原因是抑制了由内源性TGF-β对癌前细胞所施加的肿瘤抑制作用。本专利技术的一个目的是提供用于通过靶向经其产生TGF-β的Treg来改进癌症治疗的新策略。之前示出TGF-β的产生受到多步过程的严密调控。在被原蛋白(pro-protein)转变酶FURIN切割之前的前体称作原TGF-β1同源二聚体。所产生的产物被称为潜伏(latent)TGF-β1，其中C末端片段或成熟TGF-β1保持与称作潜伏相关肽(LatencyAssociatedPeptide)或LAP的N末端片段非共价结合。因为LAP阻止成熟TGF-β1与其受体结合，所以这种潜伏复合物是无活性的。在本专利技术中，本专利技术人示出潜伏TGF-β通过跨膜蛋白GARP(glycoproteinArepetitionspredominant，以糖蛋白A为主的重复序列)与Treg的表面结合。因此，本专利技术旨在提供基于抗GARP蛋白抑制TGF-β信号转导来靶向Treg的新策略。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是在TGF-β存在的情况下与以糖蛋白A为主的重复序列(GARP)结合的蛋白质。在一个实施方案中，所述蛋白质仅在TGF-β存在的情况下与GARP结合。在另一个实施方案中，所述蛋白质在GARP与TGF-β复合时与GARP结合。在另一个实施方案中，所述蛋白质与GARP和TGF-β的复合物结合。在一个实施方案中，所述蛋白质是选自以下的抗体分子：全抗体(wholeantibody)、人源化抗体、单链抗体、二聚单链抗体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱岩藻糖基化抗体(defucosylatedantibody)、双特异性抗体、双抗体(diabody)、三抗体(triabody)、四抗体(tetrabody)。在另一个实施方案中，所述蛋白质是选自以下的抗体片段：单片式抗体(unibody)、结构域抗体(domainbody)和纳米抗体(nanobody)。在另一个实施方案，所述蛋白质是选自以下的抗体模拟物(antibodymimetic)：亲合体(affibody)、affilin、affitin、adnectin、atrimer、evasin、DARPin、anticalin、avimer、fynomer、versabody和duocalin。本专利技术的另一个目的是本文以上所述的蛋白质或者结合GARP并抑制TGF-β信号转导的蛋白质。在一个实施方案中，所述蛋白质是与以下表位结合的抗体或其抗原结合片段：包含GARP之一个或更多个氨基酸的构象表位或者由于GARP与潜伏TGF-β复合而被修饰的GARP表位。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还结合潜伏TGF-β的一个或更多个氨基酸。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合包含一个或更多个残基的表位，所述一个或更多个残基来自SEQIDNO：1所示之GARP的101至141残基。本专利技术的另一个目的是蛋白质，所述蛋白质具有包含至少一个以下CDR的重链可变区：VH-CDR1：GFSLTGYGIN(SEQIDNO：2)或GYGIN(SEQIDNO：52)；VH-CDR2：MIWSDGSTDYNSVLTS(SEQIDNO：3)；和VH-CDR3：DRNYYDYDGAMDY(SEQIDNO：4)，或具有与SEQIDNO：2-4或52共有至少60％同一性之氨基酸序列的任意CDR；或者具有包含至少一个以下CDR的轻链可变区：VL-CDR1：KASDHIKNWLA(SEQIDNO：5)；VL-CDR2：GATSLEA(SEQIDNO：6)；和VL-CDR3：QQYWSTPWT本文档来自技高网...

【技术保护点】
蛋白质，其在TGF‑β存在的情况下与以糖蛋白A为主的重复序列(GARP)结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.08.01 EP 13178958.8;2014.05.07 EP 14167425.9;1.蛋白质，其在TGF-β存在的情况下与以糖蛋白A为主的重复序
列(GARP)结合。
2.根据权利要求1所述的蛋白质，其仅在TGF-β存在的情况下与
GARP结合。
3.根据权利要求1或2所述的蛋白质，其在GARP与TGF-β复合时
与GARP结合。
4.根据权利要求1至2中任一项所述的蛋白质，其与GARP和TGF-β
的复合物结合。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的蛋白质，其抑制TGF-β信号
转导。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的蛋白质，其为选自以下的抗
体分子：全抗体、人源化抗体、单链抗体、二聚单链抗体、Fv、Fab、F(ab)’2、
脱岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双抗体、三抗体、四抗体；或者为选
自以下的抗体片段：单片式抗体、结构域抗体和纳米抗体；或者为选自以
下的抗体模拟物：亲合体、affilin、affitin、adnectin、atrimer、evasin、
DARPin、anticalin、avimer、fynomer、versabody和duocalin。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质是
与以下表位结合的抗体或其抗原结合片段：包含GARP之一个或更多个
氨基酸的构象表位或者由于GARP与潜伏TGF-β复合而被修饰的GARP
表位。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的蛋白质，其中重链可变区包
含至少一个以下CDR：
VH-CDR1：GFSLTGYGIN(SEQIDNO：2)或GYGIN(SEQIDNO：52)；
VH-CDR2：MIWSDGSTDYNSVLTS(SEQIDNO：3)；和
VH-CDR3：DRNYYDYDGAMDY(SEQIDNO：4)，
或具有与SEQIDNO：2-4或52共有至少60％同一性之氨基酸序列
的任意CDR；
或者其中轻链可变区包含至少一个以下CDR：
VL-CDR1：KASDHIKNWLA(SEQIDNO：5)；
VL-CDR2：GATSLEA(SEQIDNO：6)；和
VL-CDR3：QQYWSTPWT(SEQIDNO：7)，
或具有与SEQIDNO：5-7共有至少60％同一性之氨基酸序列的任意
CDR；
或者重链可变区包含至少一个以下CDR：
VH-CDR1：SYYID(SEQIDNO：13)；
VH-CDR2：RIDPEDGGTKYAQKFQG(SEQIDNO：14)；
VH-CDR3：NEWETVVVGDLMYEYEY(SEQIDNO：15)，
或具有与SEQIDNO：13-15共有至少60％同一性之氨基酸序列的任
意CDR；
或者其中轻链可变区包含至少一个以下CDR：
VL-CDR1：QASQX1IX2SX3LA(SEQIDNO：16)，其中X1为S或T，X2为S或V，X3为Y或F；
VL-CDR2：X1X2SX3X4X5T(SEQIDNO：17)，其中X1为G或R，X2为A
或T，X3为R或I，X4为L或P，X5为Q或K；
VL-CDR3：QQYX1SX2PX3T，其中X1为D、A、Y或V，X2为A、L或
V，X3为V或P(SEQIDNO：18)；
或者具有与SEQIDNO：16-18共有至少60％同一性之氨基酸序列的
任意CDR。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的蛋白质，其中重链可变区包
含至少一个以下CDR：
VH-CDR1：GFSLTGYGIN(SEQIDNO：2)或GYGIN(SEQIDNO：52)；
VH-CDR2：MIWSDGSTDYNSVLTS(SEQIDNO：3)；和
VH-CDR3：DRNYYDYDGAMDY(SEQIDNO：4)，
或具有与SEQIDNO：2-4或52共有至少60％同一性之氨基酸序列
的任意CDR；
并且轻链可变区包含至少一个以下CDR：
VL-CDR1：KASDHIKNWLA(SEQIDNO：5)；
VL-CDR2：GATSLEA(SEQIDNO：6)；和
VL-CDR3：QQYWSTPWT(SEQIDNO：7)，
或具有与SEQIDNO：5-7共有至少60％同一性之氨基酸序列的任意
CDR；
或者重链可变区包含至少一个以下CDR：
VH-CDR1：SYYID(SEQIDNO：13)；
VH-CDR2：RIDPEDGGTKYAQKFQG(SEQIDNO：14)；
VH-CDR3：NEWETVVV...

【专利技术属性】
技术研发人员：索菲·卢卡斯，皮埃尔·库利耶，茱莉亚·昆德比利亚苏尔，劳尔·杜穆蒂尔，琼克里斯托弗·雷诺尔德，塞巴斯蒂安·万德沃宁，迈克尔·桑德斯，汉斯·德哈德，吉特·德伯克，
申请(专利权)人：鲁汶大学，路德维格癌症研究有限公司，阿尔金X有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE