具有改变的包膜完整性的基因修饰的细菌及其用途制造技术

本发明专利技术涉及对裂解过度敏感的基因修饰的革兰氏阴性细菌，尤其是大肠杆菌。这些细菌由此可用于提高核酸提取，优选基因组外核酸提取(例如质粒)的产量，和/或多肽，优选由基因组外核酸编码的多肽的产量。在实践中，发明专利技术人已经使用至少2个改变包膜完整性的突变基因的组合对大肠杆菌菌株进行了工程化。更具体地，至少一个突变基因是ompA并且至少一个突变基因是与Lpp功能性有关的基因，例如lpp基因、ybiS基因、ycfS基因和erfK基因。这些组合还包括与ompA基因和/或lpp基因同源的基因中的突变。ompA基因和/或lpp基因同源的基因中的突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改变的包膜完整性的基因修饰的细菌及其用途
专利

[0001]本专利技术涉及基因修饰的微生物的领域，并且尤其涉及具有改变的包膜完整性的基因修饰的细菌。更准确地说，已发现具有在ompA基因和lpp基因或编码与Lpp功能有关的多肽的基因中的突变的组合的工程化大肠杆菌菌株与野生型菌株相比对细菌裂解过度敏感。因此，这些细菌菌株可用在改进核酸和多肽生产和纯化的方法中。
[0002]专利技术背景
[0003]一般而言，基因组外核酸分子，尤其是质粒，是能够独立于细菌染色体在细菌中复制的遗传元件。质粒和质粒编码的蛋白可以有利地通过发酵方法在大肠杆菌菌株中工业化生产，然后进行大规模纯化以用于各种应用，包括治疗应用。事实上，大肠杆菌自其被发现以来已得到很好的表征，并且已经实施了许多工具来提高操纵这种细菌菌株的便利性。因此，大肠杆菌菌株已被转化为生产核酸和多肽的首选生产工厂。
[0004]作为质粒治疗益处的一个示例，可以提到的是免疫疗法和DNA疫苗接种，为此将编码一种或多种抗原的基因工程化的DNA质粒注射到患者体内，以便细胞可以直接产生所述抗原，而所述抗原则本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.基因修饰的大肠杆菌细菌，其包含至少两个编码与包膜完整性有关的蛋白的突变基因，所述细菌与具有未改变的包膜完整性的细菌相比具有改变的包膜完整性并且对细菌裂解过度敏感，其中至少一个突变基因是ompA和/或其同源物，并且至少一个突变基因是与Lpp功能性有关的基因，前提是所述细菌不同时包含ompA基因的完全缺失和lpp基因的完全缺失。2.根据权利要求1所述的细菌，其中所述至少一个与Lpp功能性有关的基因选自包含以下或由以下组成的组：lpp、ybiS、ycfS和erfK基因和/或其同源物以及它们的任何组合。3.根据权利要求1或2所述的细菌，其中所述至少两个突变基因包含以下组合之一：
‑
ompA和lpp，和/或其同源物；
‑
ompA和ybiS，和/或ycfS和/或erfK，和/或其同源物；
‑
ompA、lpp、ybiS和erfK，和/或其同源物；
‑
ompA、lpp、ycfS和erfK，和/或其同源物；或，
‑
ompA、lpp、ybiS和ycfS，和/或其同源物。4.根据权利要求1至3中任一项所述的细菌，其中所述突变的ompA基因包含编码在位置256处的精氨酸(R)的密码子被编码电荷中性或带负电荷的氨基酸，优选谷氨酸(E)或丙氨酸(A)的密码子所取代；和/或编码在位置241处的天冬氨酸(D)的密码子被编码电荷中性或带正电荷的氨基酸，优选天冬酰胺(N)的密码子所取代；和/或从编码在位置241处的天冬氨酸(D)或在位置256处的精氨酸(R)的密码子开始或在其之前的OmpA蛋白C末端部分的缺失；或ompA基因的完全缺失；其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的。5.根据权利要求1至4中任一项所述的细菌，其中所述lpp基因中的突变选自包含以下或由以下组成的组：编码在位置58处的赖氨酸(K)的密码子的缺失；编码位置57处的精氨酸(R)的密码子被编码另一种氨基酸，优选电荷中性的氨基酸，更优选亮氨酸(L)的密码子所取代；编码位置58处的赖氨酸(K)的密码子被编码精氨酸(R)的密码子所取代；lpp基因的完全缺失；及以上的组合，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:6定义的。6.根据权利要求1至5中任一项所述的细菌，其中所述突变的ybiS基因、ycfS基因和/或erfK基因和/或其同源物分别包含所述ybiS、ycfS和/或erfK基因和/或其同源物的缺失。7.根据权利要求1至6中任一项所述的细菌，其中所述细菌具有在ompA基因中的突变，所述突变由编码在位置256处的精氨酸(R)的密码子被编码谷氨酸(E)的密码子所取代组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的；和在lpp基因中的突变，所述突变由编码在位置58处的赖氨酸(K)的密码子的缺失组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:6定义的。8.根据权利要求1至6中任一项所述的细菌，其中所述细菌具有从编码在位置241处的天冬氨酸(D)或在位置256处的精氨酸(R)的密码子开始或在其之前的OmpA蛋白的C末端部分的缺失，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的；和在lpp基因中的突变，所述突变由编码在位置58处的赖氨酸(K)的密码子的缺失组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:6定义的。9.根据权利要求1至6中任一项所述的细菌，其中所述细菌具有在ompA基因中的突变，所述突变由编码在位置256处的精氨酸(R)的密码子被编码谷氨酸(E)的密码子所取代组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的；ybiS基因的完全缺失；ycfS基因
的完全缺失；和erfK基因的完全缺失。10.根据权利要求1至6中任一项所述的细菌，其中所述细菌具有在ompA基因中的突变，所述突变由编码在位置256处的精氨酸(R)的密码子被编码谷氨酸(E)的密码子所取代组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的；在lpp基因中的突变，所述突变由编码在位置57处的精氨酸(R)的密码子被编码亮氨酸(L)的密码子所取代组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:6定义的；ybiS基因的每一个的缺失；和ycfS基因的完全缺失。11.根据权利要求1至6中任一项所述的细菌，其中所述细菌具有在ompA基因中的突变，所述突变由编码在位置241处的天冬氨酸(D)的密码子被编码天冬酰胺(N)的密码子所取代组成，其中所述位置是根据氨基酸序列SEQ ID NO:3定义的；和lpp基因的完全缺失。12.根据权利要求1至11中任一项所述的细菌，其中所述细菌进一步包含至少一种基因组外核酸分子，其优选编码至少一种多肽。13.根据权利要求1至12中任一项所述的细菌，其中所述基因组外核酸分子选自包含以下或由以下组成的组：质粒、粘粒和细菌人工染色体(BAC)。14.包含至少一种基因组外核酸分子并且包含至少一个编码与包膜完整性有关的蛋白的突变基因的基因修饰的大肠杆菌细菌，用于生产和纯化至少一种基因组外核酸分子的用途，所述细菌与具有未改变的包膜完整性的细菌相比具有改变的包膜完整性，其中所述至少一个突变基因是ompA和/或其同源物，或与Lpp功能性有关的基因。15.根据权利要求14所述的用途，其中所述至少一种基因组外核酸分子选自包含以下或由以下组成的组：质粒、粘粒和细菌人工染色体(BAC)。16.包含至少一种编码至少一种多肽的基因组外核酸分子并包含至少一个编码与包膜完整性有关的蛋白的突变基因的...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书四页说明书四四页序列表一六页附图四页，
申请(专利权)人：鲁汶大学，
类型：发明
国别省市：