一种卵泡抑素样蛋白1的单克隆抗体及其应用制造技术

本发现涉及卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)在体内促进肺纤维化疾病进程的功能，以及抗FSTL1抗体用于治疗、缓解或改善肺纤维化疾病或症状中的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种卵泡抑素样蛋白1的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及一种单克隆抗体及其应用，特别涉及一种中和卵泡抑素样蛋白1的单 克隆抗体及其在调节组织纤维化中的用途。
技术介绍
脏器纤维化的本质是组织遭受损伤后的修复反应，以保护组织器官的相对完整 性。纤维化可发生于多种器官，主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减 少，增生的纤维结缔组织虽然修复了缺损，但却不具备原来器官实质细胞的结构和功能。纤 维化持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命。据美国 政府相关机构统计，发达国家各类因病死亡的病人中，45%?55%是死于某种类型的脏器 纤维化疾病。脏器纤维化疾病是目前国际医学领域研究的重大难点和热点问题。 肺纤维化是最重要的脏器纤维化，它是因慢性、反复性、多灶性肺实质损伤而触 发，以肌纤维母细胞积累和胶原等细胞外基质过度沉积为特征，从而导致肺泡和肺间质出 现不同程度的炎症和纤维化，进而导致肺结构破坏和呼吸衰竭。肺纤维化严重威胁人类健 康，发病机制未明确，尚无有效的药物治疗措施。肺移植是现在唯一有效的治疗手段。不幸 的是，肺移植后的IPF病人5年生存率低于50 %。因此，以肺纤维化发生发展的分子生理病 理机制为基础，探讨新的潜在药物靶点，对于开发有效抗纤维化治疗具有重要的社会意义 和科学意义。 肺纤维化成因复杂，TGF-β是目前已知最重要的一类促纤维化因子，具有诱导纤 维母细胞增殖分化成肌纤维母细胞，促进胶原等ECM的合成等作用，是肺纤维化疾病发生 发展的总开关（master switch) oTGF-β及其下游信号在IPF的发病机制中的关键作用，使 之成为一个有吸引力的治疗目标。然而，由于TGF-β在正常组织稳态中的多效性，使得在 治疗中完全抑制TGF-β将会产生严重的副作用。确定和靶向TGF-β信号的组织或疾病特 异性的调控机制是近年来肺纤维药物研发重点。例如整合素 ανβ 6在肺纤维化发病时表 达上调，可在肺局部微环境中结合并激活TGF-β前体。低剂量的整合素 ανβ 6抗体并不 影响肺泡炎症细胞数以及巨噬细胞活化标志物，但可显著抑制胶原沉积，肺纤维化。目前， 人源化的抗整合素 β 6单克隆抗体已进入治疗IPF患者的临床试验阶段。尽管近年来在肺 纤维化的治疗领域已经取得了诸多进展，但是许多治疗方案和药物仍然无法获得令人满意 的疗效。在世界范围，尤其是中国，肺纤维化的治疗仍然是临床上亟待解决的课题之一。因 此，本领域非常需要发现更多的可干扰TGF-β信号的分子，为治疗IPF等肺纤维化疾病提 供潜在的分子靶点和治疗手段。 卵泡抑素样蛋白1 (Follistatin-likel，FSTL1)是最早由Shibanuma Μ等从小鼠 成骨细胞MC3T3-E1中克隆得到一个可被TGF-β 1诱导的基因。该基因编码一种可分泌的 小分子糖蛋白（38kD)，已有的研究表明FSTL1作为ΒΜΡ4的抑制因子在肺的发育过程中起重 要作用。此外，FSTL1在肺癌和卵巢癌细胞中被认为是一个可能的肿瘤抑制基因，在类风湿 关节炎中是一个免疫调节因子。研究表明FSTL1在心脏中是一个受Akt调控的心脏保护因 子，可以通过介导心肌AMP激活的蛋白激酶活化来拮抗心肌肥厚。最近有报道关于FSTL1 促进TGF-β在肺纤维化疾病中起作用，但没有人公开抗FSTL1抗体能够抑制肺纤维化。 滤泡素抑制素样蛋白l(FSTLl)是一种多功能的分泌性糖蛋白，是一个具有促进 组织纤维化的调节因子。本专利技术涉及可阻断FSTL1生物活性的单克隆抗体及其制备方法， 和该单克隆抗体在调节各种纤维化肺疾病（例如特发性肺纤维化疾病（IPF))中的用途，包 括可以用来治疗、缓解或改善纤维化肺疾病或症状。
技术实现思路
本专利技术公开一种中和性抗体，其中所述抗体包含至少1个抗体重链可变区和至少 1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体重链可变区具有⑶R序列⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3， 其中 CDRL1 由 SEQ ID N0 :1 组成、CDRL2 由 SEQ ID N0 :2 组成和 CDRL3 由 SEQ ID N0 :3 组 成；和其中所述抗体轻链可变区具有选自CDRHUCDRH2和CDRH3，CDRH1由SEQ ID N0 :4组 成、CDRH2 由 SEQ ID N0 :5 组成和 CDRH3 由 SEQ ID N0 :6 组成。 本专利技术公开一种分离的核酸，所述核酸编码本专利技术抗体的至少一个重链可变区 SEQ IDN0:7 和轻链可变区 SEQ IDN0:8。 本专利技术公开一种包括上述核酸的表达载体，其中在用所述载体转染宿主细胞时所 述核酸与宿主细胞识别的控制序列有效连接。 本专利技术公开一种包括上述表达载体的宿主细胞。 本专利技术公开一种治疗、缓解或改善组织纤维化疾病的药物组合物，包含本专利技术的 中和性抗体。 含有本专利技术的中和卵泡抑素样蛋白1的单克隆抗体重链和/或轻链可变区编码基 因的表达载体，转基因细胞系和菌种均属于本专利技术的保护范围。 含有本专利技术的中和卵泡抑素样蛋白1的单克隆抗体重链和/或轻链可变区编码基 因中的任一片段的引物对也在本专利技术的保护范围之内。 本专利技术公开一种生产多肽的方法，包括在表达核酸序列的条件下在培养基中培养 宿主细胞，由此产生含有所述轻链和重链可变区的多肽；和由宿主细胞或培养基回收所述 多肽。 本专利技术公开的中和性抗体在制备治疗或调节组织纤维化的药物中的应用，特别是 对治疗、缓解或改善纤维化肺疾病的药物中的应用，优选针对特发性肺纤维化的应用，所述 纤维化肺疾病症状选自：特发性肺纤维化、尘肺、放射线诱导肺纤维化。 本专利技术公开的中和性抗体通过抑制肌纤维母细胞的积累以及随后的胶原等胞外 基质的合成和沉积达到治疗或调节组织纤维化的作用，具体地讲抗体具有在体外抑制原 代肺纤维母细胞中TGF-bl/Smad2/3信号的作用。还可以通过抑制肌纤维母细胞特征蛋白 (如a-SMA)表达上调来抑制肌纤维母细胞的积累，或通过抑制I型胶原（Coll)、纤粘连蛋 白（fibronectin)等胞外基质蛋白表达上调来抑制胶原等胞外基质的合成和沉积。 专利技术人在研究中发现FSTL1通过促进肺肌纤维母细胞的积累以及随后的胶原等 胞外基质的合成和沉积，参与纤维化肺疾病的进行性发展。本专利技术涉及可结合并阻断FSTL1 生物活性的抗体及其在降低肺肌纤维母细胞的积累以及随后的胶原等胞外基质的合成和 沉积从而治疗、缓解或改善纤维化肺疾病和症状中的用途。 进一步，专利技术人在研究中还发现FSTL1可促进TGF-0/Smad2/3信号，促进TGF-β 诱导的肺纤维母细胞向肌纤维母细胞分化，进而促进肌纤维母细胞的大量积累以及随后的 胶原等胞外基质的合成和沉积。本专利技术涉及可结合并阻断FSTL1生物活性的抗体及其在抑 制TGF-β /Smad2/3信号从而治疗、缓解或改善纤维化肺疾病和症状中的用途。 本专利技术筛选出高亲和力及中和活性的单克隆抗体，从中克隆出可变区基因，在治 疗、缓解或改善纤维化肺疾病或症状中具有巨大的应用前景。 本专利技术中名词术语的定义与解释 根据本专利技术，术语主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株，其CGMCC保藏号为No.7557。

【技术特征摘要】
1. 一种杂交瘤细胞株，其CGMCC保藏号为No. 7557。2. -种中和卵泡抑素样蛋白1的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体由权利要求1 的杂交瘤细胞株产生。3. 如权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体包含至少1个抗体重链可变 区和至少1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体重链可变区具有⑶R序列⑶RL1、⑶RL2 和 CDRL3,其中 CDRL1 由 SEQ ID NO :1 组成、CDRL2 由 SEQ ID NO :2 组成和 CDRL3 由 SEQ ID NO :3组成；和其中所述抗体轻链可变区具有选自CDRH1、CDRH2和CDRH3, CDRH1由SEQ ID NO :4 组成、CDRH2 由 S...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁文，董莺莺，李霄鹤，李莲，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12