超灵敏黄曲霉毒素B1酶联免疫检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种超灵敏黄曲霉毒素B1酶联免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括黄曲霉毒素B1标准溶液，固相载体，酶标记物，底物显色液，样品稀释液，终止液及浓缩洗涤液，其中，所述固相载体为微孔板，由黄曲霉毒素B1单克隆抗体包被，所述酶标记物是有辣根过氧化物标记的黄曲霉毒素B1蛋白偶联物，底物显色液为四甲基联苯胺(TMB)。本发明专利技术还公开了一种超灵敏黄曲霉毒素B1酶联免疫检测试剂盒的制备方法及检测黄曲霉B1的方法。使用本发明专利技术制备的试剂盒黄曲霉毒素B1，具有操作简便，灵敏度高，特异性好，线性好等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析检测试剂领域，更具体地说，涉及一种检测黄曲霉毒素B1的酶联免疫分析测定试剂盒及其制备、使用方法。
技术介绍
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是一种极强的剧毒物质，已被世界卫生组织的癌症研究机构划定为I类致癌物。黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食、词料及其制品中。黄曲霉毒素BpByG1及G2是粮食和食品中黄曲霉毒素主要存在形式，其中黄曲霉毒素B1的毒性和致癌性最强。由于自然界黄曲霉产毒菌株产生的毒素以AFB1的为主，而且其毒性和致癌性最大，因此，在检验中通常都以AFB1作为分析指标。黄曲霉毒素B1的分子式为C17H12O6，化学结构如下

【技术保护点】
一种检测黄曲霉毒素B1的酶联免疫检测超灵敏试剂盒，所述试剂盒包括黄曲霉毒素B1标准溶液，固相载体，酶标记物，底物显色液，样品稀释液，终止液及浓缩洗涤液，其特征在于，所述固相载体为微孔板，且所述微孔板由黄曲霉毒素B1单克隆抗体包被，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1完全抗原，所述底物显色液含四甲基联苯胺(TMB)，终止液含硫酸。

【技术特征摘要】
1.一种检测黄曲霉毒素B1的酶联免疫检测超灵敏试剂盒，所述试剂盒包括黄曲霉毒素B1标准溶液，固相载体，酶标记物，底物显色液，样品稀释液，终止液及浓缩洗涤液，其特征在于，所述固相载体为微孔板，且所述微孔板由黄曲霉毒素BI单克隆抗体包被，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素BI完全抗原，所述底物显色液含四甲基联苯胺(TMB)，终止液含硫酸。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体是黄曲霉毒素BI的特异性高亲和力单克隆抗体，间接ELISA效价达1: 32万；所述酶标抗原是黄曲霉毒素BI完全抗原与辣根过氧化物酶偶联物；酶与完全抗原的偶联比是3 I 8 :1。3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述酶标抗原含有 黄曲霉毒素BI完全抗原 辣根过氧化物酶 所述黄曲霉毒素BI完全抗原的黄曲霉毒素BI与蛋白偶联比是8 I 14 :1 所述酶与抗体的偶联比是3 I 8 :14.根据权利要求1 3任一项所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有 NaCL10 25% (重量) Proclin-3000.1 1. 0% (重量) 吐温200. 05 0. 15% (体积) 磷酸缓冲液0. 05 0. 40mol/L PH 7. 2 7. 65.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有 NaCL15%(重量) Proclin-3000. 1% (重量)吐温200. 05% (体积)磷酸缓冲液0.1 mo I/L PH 7. 46.一种检测黄曲霉毒素BI的酶联免疫检测超灵敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤 A、制备固相载体将0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH值为9. 0-9. 6)与曲霉毒素BI的特异性高亲和力单克隆抗体或完全抗原以适当比例混合，将混合液负载于载体上，用含0. 05%吐温20(体积)的磷酸盐缓冲液洗涤后，用保护液封闭保护上述洗涤后的载体； B、制备辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素BI的完全抗原或单克隆抗体采用改进过的高碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素BI的完全抗原或单克隆抗体，采用棋盘滴定法选择最佳的酶标记物的工作浓度。酶标抗原或抗体溶于酶稀释液中以制备抗原或抗体工作溶液； C、制备底物显色液 a)显色A溶液的制备以DMSO为稀释液配制成较低浓度的四甲基联苯胺(TMB)溶液即成。b)显色B溶液的制备以去离子水为稀释液配制成一定浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：时国庆，孙清，杨敬臣，李谷丰，
申请(专利权)人：北京普赞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：