一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即氯霉素与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：辣根过氧化物酶标记的氯霉素单克隆抗体、氯霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明专利技术的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；可用作检测动物组织(猪肉、鸡肉、猪肝、鸡肝)、水产品(鱼肉、虾肉)和牛奶中氯霉素残留检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测氯霉素的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物组织(猪肉、鸡肉、猪肝、鸡肝)、水产品(鱼、虾)、蜂蜜和牛奶中的氯霉素含量或残留量。属于免疫学检测领域。
技术介绍
氯霉素((Chloramphenicol, CAP)是一种廉价高效的广谱抗生素,对革兰氏阳性和阴性细菌都有很好的抑制作用，因此一度被广泛应用于农牧业中。但是动物源性食品随着食物链被人体长期摄入，可引发多种疾病。轻者破坏人体内正常菌群的平衡状态，菌群失调，使人体产生耐药菌珠，给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响；抗生素过敏体质的人会出现过敏反应，危及健康。严重时可干扰骨髓细胞蛋白质的合成，并抑制幼稚细胞DNA合成，导致粒细胞减少，弓I发再生障碍性贫血、溶血、紫瘫等恶性疾病。鉴于氯霉素的毒副作用，国际食品学界将其列为禁药，欧盟、美国等均在法规中规定氯霉素残留限量标准为“零容许量” (Zerotolerance)，即不得检出，根据欧盟“2002/657/EC”标准规定，动物源性食物中氯霉素的最大要求检出极限是O. 3 μ g/kg。不久美国FDA也做出相应的规定。我国农业部规定了 CAP在所有食品动物的可食用组织中不得检出，并将其从《中国兽药典》中删除，列为禁药。并相应制定了 SN0219-93和SCT3018-2004行业标准，与国际接轨。为适应更高的检测标准，检测技术水平必须相应的提高，近十年氯霉素检测技术一直是国际专家学者研究的热门项目之一。氯霉素的检测方法分为物理化学法和免疫化学法，前者有液相色谱法(LC)、高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)等，后者主要是酶免法(ELISA)，检测的灵敏度均达到ppb (μ g/kg)级别。当前主流的检测方法是LC-我国行业标准所使用的方法，以及ELISA。近几年，国内外学者又研发出液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、液相色谱电喷雾电离质谱法(LC-EITMS)、微生物分析等物理检测新方法，对ELISA方法的应用也有了进一步研究。化学发光免疫检测方法具有特异性强、稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高、试剂稳定且有效期长(6 18个月)等优点，其检测限比酶联免疫法和理化检测方法高几个数量级。化学发光进口仪器与试剂性能较好，而国外的技术垄断导致化学发光仪、发光底物液和试剂盒价格居高不下，而且试剂或试剂盒与仪器相匹配，进口试剂常常不能在国产仪器中使用，造成化学发光免疫方法无法在基层普及。化学发光底物液是化学发光酶免疫检测方法的关键试剂，配制出低成本且性能良好，适合国产仪器使用的的发光底物液，可降低化学发光方法的使用成本，有利于在基层的普及。建立稳定的化学发光酶免疫分析方法，也是进行商品化学发光试剂盒的研制的基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。本专利技术所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的酶标氯霉素单克隆抗体、氯霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；其特征在于所述酶标板的各孔包被有以氯霉素与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；其中所述包被抗原浓度优选10 μ g/mL。所述酶标板优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板。所述氯霉素系列标准溶液从氯霉素纯品中稀释得到，稀释液为含有10%甲醇的O. 05mmol/L,pH = 7. 4 的 PBS,氯霉素标准品浓度分别是 Opg/mL, 20pg/mL, 60pg/mL, 180pg/mL, 540pg/mL和1620pg/mL,所述百分比为体积百分比。所述酶标氯霉素单克隆抗体是由氯霉素与牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的单克隆抗体，其工作浓度优选为1: 16000。所述化学发光液A液为鲁米诺含量为O. 01M、对甲苯酚含量为O. OOlM pH = 8. 8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为IOOmL溶液含柠檬酸2. lg，无水Na2HP042. 82g,0. 75%的过氧化氢脲O. 64mL的溶液。所述鲁米诺为化学发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。所述浓缩磷酸盐缓冲液是每升含NaH2PO4 · 2H20 5. 74g、Na2HPO4 · 12H20 32. 6g的水溶液。所述浓缩洗涤溶液是含有体积分数O. 05 %吐温-20的pH = 7. 4,0. lmol/L磷酸盐缓冲液。所述包被溶液是每升水中含1. 59g碳酸钠和2. 53g碳酸氢钠的溶液(CB)，pH =9.5。所述封闭溶液是每升洗漆溶液中含IOg卵清蛋白(OVA, ovalbumin,也称鸡卵清白蛋白或鸡卵白蛋白，由385个氨基酸残基组成，分子量约45kDa)且加入质量为5%0 NaN3的溶液，所述百分比为质量百分比。本专利技术溶液的配制本专利技术试剂盒中涉及的氯霉素标准溶液、酶标氯霉素单克隆抗体溶液、化学发光溶液及洗涤溶液及其配方对本专利技术试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是1、氯霉素标准溶液以常规方法将氯霉素纯品用含有10 %甲醇的O. 05m mol/L, pH = 7. 4 的 PBS 配制成浓度分别为 0pg/mL, 20pg/mL, 60pg/mL, 180pg/mL,540pg/mL 和1620pg/mL的氯霉素标准溶液，所述百分比为体积百分比。2、酶标氯霉素单克隆抗体溶液氯霉素单克隆抗体是用人工免疫抗原免疫动物制得的单克隆抗体，将所得氯霉素单克隆抗体用辣根过氧化物酶标记标记后用洗涤溶液稀释成1: 16000的工作浓度。3、化学发光溶液A液为鲁米诺含量为0. 01M、对甲苯酚含量为0. 001M pH = 8. 8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为IOOmL溶液含柠檬酸2. lg，无水Na2HP042. 82g,0. 75%的过氧化氢脲0. 64mL的溶液。 4、浓缩磷酸盐缓冲液=NaH2PO4 · 2H20 6. 52g,Na2HPO4 · 12H20 38. 7g 溶于 IL 去离子水中。5、浓缩洗涤溶液按体积分数O. 05%将吐温-20的添加至pH = 7. 5,0. lmol/L磷酸盐缓冲液中。6、包被溶液1. 59g碳酸钠和2. 53g碳酸氢钠溶于IL水中，调节pH = 9. 5。7、封闭溶液配制10g OVA溶于IL洗涤溶液中，再加入重量比为5%。的NaN3。本专利技术酶标板的包被本专利技术中包被酶标板采用将CAP-OVA偶联物置于设定的包被溶液中，以设定的浓度，在37°C恒温箱中反应包被。本专利技术采用的是pH = 9. 5的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。本专利技术中微孔板中所包被的CAP-OVA在碱性环境下可以很好的结合在微孔板塑料表面上，可以经受多次洗板，采用的包被抗原浓度为10 μ g/mL。 包被好的微孔板可以用封闭溶液封闭，封闭液中惰性蛋白优选0VA，需加入NaN3防止变质。酶标氯霉素单克隆抗体溶液的制备 本专利技术中酶标氯霉素单克隆抗体溶液是决定本专利技术中氯霉素酶联免疫测试试剂盒测定范围及灵敏度的重要因素。本专利技术中涉及的酶标氯霉素单克隆抗体溶液可以用洗涤溶液稀释成1: 16000的工作浓度。按照上述酶标氯霉素单克隆抗体溶液浓度制备的试剂盒可以达到很好的线性范围(标准线范围可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有以氯霉素与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；所述试剂包括：辣根过氧化物酶标记的氯霉素单克隆抗体、氯霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液。

【技术特征摘要】
1.一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有以氯霉素与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；所述试剂包括辣根过氧化物酶标记的氯霉素单克隆抗体、氯霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液。2.根据权利要求1所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述酶标板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板。3 根据权利要求1所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述包被抗原浓度为10 μ g/mL。4.根据权利要求1所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述氯霉素单克隆抗体的工作浓度为1: 16000。5.根据权利要求1所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述氯霉素的单克隆抗体是由氯霉素与牛血清蛋白偶合制成的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得。6.根据权利要求1所述氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，吴鹏，杨昌松，王鑫，冯静，杜亚菲，蒲小容，韩京朋，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：