检测氯霉素的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种检测氯霉素的试剂盒，试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中。反应膜上具有包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“|”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“|”。本实用新型专利技术试剂盒具有便携性好、灵敏度高、检测时间短等特点，可以在氯霉素残留检测中发挥重要作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种检测氯霉素的试剂盒，特别是检测动物源性食品中氯霉素的试剂盒。
技术介绍
氯霉素(Chloramphenicol, CAP)是一种高效广谱抗生素,能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，广泛应用于各类家禽、家畜、水产品生产过程中的传染性疾病控制。但氯霉素在食品中的残留会对人体健康构成潜在危害，能引起人的骨髓造血机能紊乱，造成再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症及新生儿、早产儿灰色综合症等疾病。动物源性食品中氯霉素残留对人类健康构成潜在的危害已越来越被人们所认识，美国仅允许氯霉素用于非食用动物，规定在动物源性食品中不得检出氯霉素；欧盟不允许氯霉素用于产奶母牛和产蛋鸡，在其他动物的使用上也有限制，并严格规定肉中的氯霉素残留量不得超过10μ g/kg ；我国农业部公告第235号文件也规定，氯霉素及其盐、酯(包括琥珀氯霉素)在所有食品动物的所有可食组织中不得检出。但由于氯霉素的抑菌效果好、价格低，仍有人将其用于家禽、畜类、水产品中。为了保障人民的身体健康以及扩大食品的贸易往来，建立灵敏度高、特异性强、快速、经济的氯霉素残留检测方法是很有必要的。目前，用来检测氯霉素的最常用方法主要有微生物法、理化分析法及免疫分析法三大类。微生物法操作简便、样品用量少、检测成本低，但易受组织中其它抗生素的影响，特异性低，灵敏度也不高；理化分析法包括液相色谱法、色谱/质谱联用技术、气相色谱法等，是目前检测氯霉素的主要方法，具有灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少等优点，但其存在检测成本高、所需设备复杂、对检测人员的要求较高、检测耗时长等缺点；目前常用的免疫分析法主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法，但需要的检测费用还是较高，不适合企业低成本的检测需要。因此，在实践中有必要建立一种敏感度高、操作简单、成本低、检测药物种类多、适合大规模推广的检测方法。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的检测氯霉素的试剂盒。本技术的试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶包括微孔试剂条和8个试纸条，微孔试剂条有8个反应孔，反应孔上具有微孔塞，其中冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物。试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“ I ”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“ I ”。检测线和质控线平行，检测线位于距离样品吸收垫一侧5-8mm处，质控线位于距离检测线4-7mm处，试纸条上贴有保护膜，保护膜覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX标记线。本技术试剂盒中的试纸条底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体为硬纸盒；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料。本技术试剂盒具有如下有益效果I、灵敏度闻。氣霉素检测试剂盒以I父体金标记闻未和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。其中的氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂条中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。本试剂盒对氯霉素的检测灵敏度为O. I μ g/L。2、操作简便快速。使用试剂盒检测时无需任何其它试剂，只要将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后，室温(20-250C )孵育5min，将试纸标有MAX标记线的一端向下，插入鮮育后的微孔试剂后计时，IOmin后观察结果。3、显示检测结果形象、直观、准确。检测试纸条以显示红色线“ I ”及“ Il ”印迹作为阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线“ I ”印迹表示被检测样本液中氯霉素的含量高于等于试剂盒对氯霉素的最低检测限，两条红线“ Il ”印迹表示被检测样本中氯霉素的含量低于试剂盒对氯霉素的最低检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。4、成本低，投资少。使用本技术试剂盒，不需另配仪器设备及其它试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。5、易于大范围推广应用。试剂盒操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、食品企业等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图I为本技术试纸条结构示意图；图2为本技术试纸条俯视图；图3为本技术微孔试剂图；图4为本技术试纸条检测结果判定图；图5为本技术试剂桶结构示意图；图6为本技术固定用具的俯视图；图7为本技术盒体与固定用具的侧视图。具体实施方式一、氯霉素检测试剂盒的组装制备(I)试纸条样品吸收垫I、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX标记线，检测线4包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控线5包被有羊抗鼠抗抗体。底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。(2)微孔试剂条微孔试剂条8具有胶塞9，板孔中冻干有氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物。(3)将(I)试纸条和(2)微孔试剂条装入具有密封盖的塑料试剂桶10，将塑料试剂桶放置于试剂盒盒体12内的固定用具11中。二、试剂盒的使用(I)样品前处理动物组织(猪肉、鸡肉、鱼、虾)样本称取5g±0. 05g均质过的组织样本至50ml聚苯乙烯离心管中，加入8ml乙酸乙酯，用振荡器振荡5min，3000g以上室温(20_25°C )离心5min ;移取全部上层有机相至IOml干净的玻璃试管中，于5(T60°C水浴氮气流下吹干；加入Iml正己烷，用涡旋仪涡动lmin，再加Iml O. 02mol/L PBS缓冲液，用涡旋仪涡动30s，3000g以上室温(20-25°C)离心5min ;除去上层有机相，取下层无机相用于分析。牛奶样本称取4. Oml ±0. 05ml牛奶至50ml离心管中，加入6ml乙酸乙酯，2ml乙腈，上下振荡5min，3000g以上室温(20-25°C)离心5min ;移取6ml上层有机相至IOml干燥玻璃试管中，于5(T60°C水浴氮气流下吹干，加入O. 5ml O. 02mol/L PBS缓冲液，涡动Imin溶解干燥的残留物，待检。蜂蜜样本称取4. 0g±0. 05g蜂蜜至50ml离心管中，加入4ml去离子水，用振荡器振荡至蜂蜜全部溶解；加入4ml乙酸乙酯，4ml乙腈，上下振荡5min，3000g以上室温(20-25°C)离心5min ;移取6ml上层有机相至IOml干燥玻璃试管中，于5(T60°C水浴氮气流下吹干，加入0.5ml O. 02mol/L PBS缓冲液，涡动Imin溶解干燥的残本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测氯霉素的试剂盒，其特征在于试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。

【技术特征摘要】
1.一种检测氯霉素的试剂盒，其特征在于试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述反应膜上具有包被有氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“ I ”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“ I ”。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述检测线和质控线平行，均呈与试纸条的长相垂直的条带状。4.如权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于所述检测线位于距离样品吸收垫一侧5-8mm处，所述质控线位于距离检测线...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，罗晓琴，陶光灿，吴鹏，冯静，赵正苗，汪善良，崔廷婷，陈炜玲，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：