本发明专利技术公开了一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法。本发明专利技术的试纸条采用免疫捕获法原理测定IgM抗体和IgG抗体，通过一次操作即可联合检测出特异性抗MP的IgM、IgG抗体，简化了操作过程；本发明专利技术的试剂盒检测简便、快速、准确，特别适用于基层筛查和流行病学调查，对肺炎支原体感染的早期和中期起到辅助诊断作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于胶体金免疫层析法快速检测领域，涉及一种利用免疫测定法检测特异性IgM、IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备技术；具体地说，涉及一种借助胶体金标记显色的免疫层析反应对肺炎支原体IgM、IgG抗体进行联合检测的试纸条、试剂盒及其制备方法。
技术介绍
免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)和免疫球蛋白 G(Immunoglobulin G, IgG)是人或动物体内最重要的两种抗体。一种抗原(细菌或病毒等)进入机体后，最早出现的免 疫球蛋白是IgM抗体，之后出现IgG抗体。尽管在某些情况下还可能出现IgA抗体，由于其临床意义同IgG基本相同，并且IgA含量很低，在临床检测中得实际意义不大，因而在临床检测中一般不予以区分。通过检测体内IgM、IgG抗体的存在，可以诊断人或动物对特定抗原的免疫反应状态。若检测出特异性IgM抗体，表明有近期感染的发生，但IgM抗体半衰期较短，IgM的检测阴性并不能证明机体未受到感染，还需要检测半衰期较长，含量最高的IgG抗体，以明确诊断。肺炎支原体是引起原发性非典型性肺炎及其他呼吸道感染性疾病的常见病原微生物，直接借助呼吸道的飞沫传染，全年均可发病，以秋冬季节较多，主要见于儿童和青少年。一般呈散发，也可发生小流行。儿童支原体肺炎有一定的流行规律。除呼吸道外，肺炎支原体还能引起其他系统严重的并发症。肺炎支原体的诊断方法主要依靠分离培养和血清学试验，包括病原体培养、冷凝聚试验、间接血凝抑制试验、补体结合试验、PCR方法等。病原体培养、冷凝聚试验、间接血凝抑制试验、补体结合试验由于灵敏度低且特异性差大大限制了其在临床上的应用。PCR法虽然灵敏度高特异性强，但是由于操作复杂，对操作人员的技术要求较高，也限制其临床的推广使用。目前，肺炎支原体IgM、IgG抗体检测是国内外公认的临床诊断肺炎支原体感染较为可靠的指标之一。目前单独检测肺炎支原体特异性IgM或IgG抗体的方法很多，比如ELISA法、双抗原夹心法、胶体金免疫层析法等，但还未有通过一次操作过程即可联合检测肺炎支原体特异性IgG、IgM抗体的方法。虽然单独检测IgM和IgG抗体后，再综合分析检测结果对疾病的诊断并无影响，但操作过程繁琐，检测不够方便快捷。
技术实现思路
针对现有检测技术的不足，本专利技术的目的在于提供。采用本专利技术的试纸条或试剂盒可实现通过一次操作过程即可快速检测肺炎支原体特异性IgM、IgG抗体，从而简化操作过程，实现快速检测的目的。本专利技术的第一个目的是这样实现的一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，包括底板，在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫上贴有全血滤血膜，所述金标垫为涂覆有重组MP抗原-胶体金复合物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜分别包被有鼠抗人IgM抗体的检测线、鼠抗人IgG抗体的检测线、兔抗MP多克隆抗体的质控线。优选地,所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条,其中重组MP抗原-胶体金复合物以浸泡的方式涂覆在玻璃纤维素膜上干燥而得，浸泡条件为室温浸泡2小时，干燥条件为37°C干燥4小时。优选地，所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，其中所述鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体、兔抗MP多克隆抗体分别以O. 03 O. 05mg/mL的浓度划到硝酸纤维素膜上包被并干燥而得，干燥条件为37°C干燥4小时。 进一步优选地，所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，其中样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按如下方式搭接样品垫一端压住金标垫一端O. 5 Imm,金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端O. 5 1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端 O. 5 Imnin本专利技术的第二个目的是这样实现的一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试剂盒，包括样本处理瓶和检测试纸条，所述样本处理瓶内装有样本处理液，所述的检测试纸条同实现本专利技术第一个目的所述的技术方案。优选地，所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试剂盒，其中所述的样本处理液为pH7. 0±0. 2的磷酸盐缓冲液。本专利技术的第三个目的是这样实现的一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤(I)将鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体、兔抗MP多克隆抗体稀释到包被浓度O. 03 O. 05mg/mL,将三种包被液分别划到硝酸纤维素膜上的指定位置，将已包被的硝酸纤维素膜37 °C干燥4小时备用；(2)采用朽1檬酸三钠还原法制备胶体金,在金溶胶中按照20 μ g/mL 40 μ g/mL比例缓慢加入重组MP抗原，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，稀释至原体积的1/3,然后用混合液室温浸泡金标垫2小时,37°C干燥4小时备用；(3)将全血滤血膜贴在样品垫上；(4)在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，确保样品垫一端压住金标垫一端O. 5 Imm,金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端O. 5 1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端O. 5 1mm，得试纸条；(5)将试纸条放入塑料板卡内，压实，装入铝箔袋中封口 ；(6)配制pH7. 0 + 0.2的磷酸盐缓冲液，作为样本处理液装入样品处理瓶，ImL/瓶；(7)将试纸条和样品处理瓶按照I: I的配比组装制成试剂盒。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和显著的进步肺炎支原体IgM、IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)采用免疫捕获法原理测定IgM抗体和IgG抗体，通过一次操作即可联合检测出特异性抗MP的IgM、IgG抗体，简化了操作过程；所用MP抗原为多表位的重组抗原，特异性好，灵敏度高；本专利技术所述试剂盒检测简便、快速、准确、易于普及，特别适用于基层筛查和流行病学调查，对肺炎支原体感染的早期和中期起到辅助诊断作用。附图说明图I为本专利技术试纸条的正面示意图；图2为本专利技术试纸条的横切面示意图；I :样品垫(贴附有全血过滤膜)；2 :金标垫(包被有重组MP抗原-胶体金复合物)；3 :硝酸纤维素膜(Tl线包被鼠抗人IgG抗体、T2线包被鼠抗人IgM抗体，C线包被兔抗MP多克隆抗体);4 :吸水垫；5 :底板。 图3检测结果示意图；I :T2、C线显色，表示IgM阳性；2 :T1、C线显色，表示IgG阳性；3 :只有C线显色，表示IgM和IgG都是阴性；4 :T1、T2、C线均显色，表示IgM和IgG都是阳性；5 :C线无显色，表不试纸条失效。具体实施例方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步作描述，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本专利技术构思的改变或等同替代均包括在本专利技术的保护范围之内。 实施例I :肺炎支原体IgM、IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)的构成I.样品处理瓶样品处理瓶(购自杭州北域)装有ImL样品处理液(磷酸缓冲液，主要原料购自国药集团)。2.试纸条60*5mm底板(购自上海杰一公司)；吸水垫为15*5mm的粗纤维滤纸(购自上海杰一公司);25*5mm硝酸纤维素膜(购自Millipore公司)依次包被鼠抗人IgG抗体(购自ABD公司)、鼠抗人IgM抗体(购自ABD公司)、兔抗MP多克本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，包括底板，在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述样品垫上贴有全血滤血膜，所述金标垫为涂覆有重组MP抗原？胶体金复合物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜分别包被有鼠抗人IgM抗体的检测线、鼠抗人IgG抗体的检测线、兔抗MP多克隆抗体的质控线。
【技术特征摘要】
1.一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，包括底板，在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于所述样品垫上贴有全血滤血膜，所述金标垫为涂覆有重组MP抗原-胶体金复合物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜分别包被有鼠抗人IgM抗体的检测线、鼠抗人IgG抗体的检测线、兔抗MP多克隆抗体的质控线。2.根据权利要求I所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，其特征在于重组MP抗原-胶体金复合物以浸泡的方式涂覆在玻璃纤维素膜上干燥而得，浸泡条件为室温浸泡2小时,干燥条件为37°C干燥4小时。3.根据权利要求I所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，其特征在于所述鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体、兔抗MP多克隆抗体分别以O. 03 O. 05mg/mL的浓度划到硝酸纤维素膜上包被并干燥而得，干燥条件为37°C干燥4小时。4.根据权利要求1-3任一项所述肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条，其特征在于样品垫一端压住金标垫一端O. 5 Imm,金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端O.5 Imm,吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端O. 5 1mm。5.一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试剂盒，其特征在于包括样本处理瓶和权利要求I所述的检测试纸条，所述样本处理瓶内装有样本处理液...
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：南京凯基生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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