一种T载体及其构建方法与其前T载体技术

本发明专利技术提供了一种T载体及其构建方法与其前T载体。本发明专利技术的T载体为两个末端均带有3’-dT突出的线性载体，两个3’-dT突出末端的旁侧序列满足当所述T载体与两端带3’-dA的PCR产物相连后，在插入片段两端能形成两个限制性内切酶酶切位点；所述两个限制性内切酶酶切位点为同一种酶的酶切位点。本发明专利技术还进一步提供了可产生所述T载体的前T载体。本发明专利技术构建的T载体可用于TA克隆，具有很高的克隆效率，且可以用单酶切的方法对阳性转化子进行鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学及生物工程
，涉及一种基因工程操作中的DNA片段克隆方法。具体地，本专利技术涉及一种T载体及其构建方法与其前T载体。
技术介绍
DNA的重组技术，也就是基因克隆技术，是现代分子生物学发展中最重要的成就之一，也是基因工程的核心技术。广义来说，DNA的重组技术是指利用供体生物的遗传物质， 或人工合成的DNA分子，经过体外的分离纯化、PCR扩增、限制酶切割等处理后与适当的载体连接起来形成新的重组DNA分子，然后将重组DNA分子导入受体生物中，从而实现对目标 DNA分子的保存、扩增和分析等操作。可以作为DNA载体的有质粒、粘粒、噬菌体、人工染色体等，其中质粒载体是应用最为广泛的分子克隆载体。一个完整的基因工程质粒载体包括复制子(用于控制质粒分子在宿主体内的复制与扩增)、筛选基因(如抗性基因、报告基因，或两者都有，用于确认、跟踪或分离带目标质粒的宿主)、多克隆位点(便于DNA分子的切割与连接)以及用于控制质粒行为(如拷贝数)或用于分析的一些特别的DNA序列(如用于质粒测序的一些引物互补序列等)。DNA分子的切割与连接可以通过限制性内切酶和连接酶来完成，即分别用相本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种Ｔ载体，为两个末端均带有３’－ｄＴ突出的线性载体，所述两个３’－ｄＴ突出末端的旁侧序列满足当所述Ｔ载体与两端带３’－ｄＡ的ＰＣＲ产物相连后，在插入片段两端能形成两个限制性内切酶酶切位点；所述两个限制性内切酶酶切位点为同一种限制性内切酶的酶切位点。

【技术特征摘要】
1.一种τ载体，为两个末端均带有3’ -dT突出的线性载体，所述两个3’ -dT突出末端的旁侧序列满足当所述τ载体与两端带3’ -dA的PCR产物相连后，在插入片段两端能形成两个限制性内切酶酶切位点；所述两个限制性内切酶酶切位点为同一种限制性内切酶的酶切位点。2.如权利要求1所述T载体，其特征在于，所述限制性内切酶酶切位点为HindIII酶切位点。3.如权利要求1所述T载体，其特征在于，所述T载体与两端带3’-dA的PCR产物相连后，除PCR产物自带的限制性内切酶酶切位点外，仅含有两个限制性内切酶酶切位点。4.如权利要求1所述T载体的制备方法，为用产生平末端的酶酶切前T载体后，产生带有平末端的线性分子，随后在所述线性分子的末端添T后获得。5.如权利要求4所述T载体的制备方法，其特征在于，所述产生平末端的酶为EcoRV。6.如权利要求4所述T载体的制备方法，其特征在于，所述线性分子末端添T时所用的 81 Taq DNA polymerase 7.如权利要求1所述T载体的制备方法，为用产生3’-dT突出末端的酶酶切前T载体后获得。8.如权利要求7所述T载体的制备方法，其特征在于，所述产生3’-dT突出的酶为XcmI。9.一种前T载体，为环状的质粒载体，包括多克隆位点，其中所述多克隆位点包含一段共有下列五个酶切位点的DNA片段，两个产生3’ -dT突出末端的酶切位点，两个鉴定用酶切位点和一个产生平末端的酶切位点；所述产生平末端的酶切位点位于两个...

【专利技术属性】
技术研发人员：李威，
申请(专利权)人：生工生物工程上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31