一种快速检测ＤＮＡ甲基化的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测ＤＮＡ甲基化的试剂盒及方法。本发明专利技术与传统方法相比做了以下四个方面的改进：１．ＤＮＡ提取和ＤＮＡ修饰同步完成；２．修饰液中添加硫化促进剂ＭＢＴ和异硫氰酸胍，快速完成ＤＮＡ提取和修饰过程；３．修饰反应采用短时间高温处理方法，使ＤＮＡ呈解链状态，以充分暴露碱基，将未甲基化修饰的胞嘧啶转化为磺化尿嘧啶；４．对修饰后繁琐的透析脱盐步骤进行简化处理：将修饰处理后的产物转到核酸纯化柱中，再用清理液处理后洗脱，得到检测基因的甲基化ＰＣＲ的ＤＮＡ模板。本发明专利技术方法成本低廉、省时、重复性好，可直接用于检测各种组织细胞基因的甲基化水平，在早临床诊断等生物医学检测技术方面具有重要的使用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学检测
，具体是一种快速检测DNA甲基化的试剂盒及 方法。
技术介绍
DNA甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，是在DNA甲基化转移酶 (DNMTs)的作用下使CpG 二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’甲基胞嘧啶。哺乳动物中，CpG 序列在基因组中出现的频率仅有1 %，但在基因组的某些区域中，通常位于基因的启动子区 或是第一个外显子区，CpG序列密度很高，可以达均值的5倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的 富集区，形成所谓的CpG岛。DNA甲基化在人的正常发育、X染色体失活、衰老以及许多人类 疾病(如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等)发生过程中发挥重要作 用。甲基化的研究热点之一是甲基化与肿瘤的关系。甲基化状态的改变是引起肿瘤 的一个重要因素，这种变化包括基因组整体甲基化水平降低和CpG岛局部甲基化水平的异 常升高，从而导致基因组的不稳定(如染色体的不稳定、可移动遗传因子的激活、原癌基因 的表达)和抑癌基因的不表达。目前肿瘤甲基化的研究主要集中在抑癌基因。这是因为人 们发现肿瘤的发生可能与抑癌基因启动子区的CpG岛甲基化造成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测ＤＮＡ甲基化的试剂盒，包括修饰液、清理液和洗涤液。

【技术特征摘要】
一种检测DNA甲基化的试剂盒，包括修饰液、清理液和洗涤液。2.如权利要求1所述检测DNA甲基化的试剂盒，其特征在于，所述修饰液包括如下 组分亚硫酸氢钠4-6M，亚硫酸氢铵3-7M，氢醌3-7mM，硫化促进剂l_5mM，异硫氰酸胍 2. 5-5. 5M和缓冲液。3.如权利要求2所述检测DNA甲基化的试剂盒，其特征在于，所述硫化促进剂为MBT， 所述缓冲液为PH 5-6的40-60mM Tris-HCl。4.如权利要求1所述检测DNA甲基化的试剂盒，其特征在于，所述清理液包括如下组 分乙醇30-50%、氢氧化钠300-500mM和氯化钠200_400mM。5.如权利要求1所述检测DNA甲基化的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括如下组 分pH 6. 8 的 5-15mM Tris,乙醇 65-85%。6.如权利要求1-5任一权利要求所述检测DNA甲基化的试剂盒用于从样本细胞中提取 DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉武，李瑞峰，吴俊生，
申请(专利权)人：生工生物工程上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]