调节核酸的甲基化/去甲基化状态的方法和试剂技术

技术编号:8239246 阅读:304 留言:0更新日期:2013-01-24 19:11
本发明专利技术涉及调节核酸的甲基化/去甲基化状态的方法和试剂。本发明专利技术人首次证实,基因组DNA中的5-甲基胞嘧啶(5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)都可以被Tet双加氧酶氧化为5-羧基胞嘧啶(5caC)。胸腺嘧啶DNA糖基化酶(TDG)可以特异性地识别该5caC,并将其从基因组中切除,引起DNA主动去甲基化。因此,可基于此来调节基因组中DNA的甲基化/去甲基化作用,以及制备调节基因组中DNA的甲基化/去甲基化作用的试剂。本发明专利技术确证了细胞中基因组DNA存在5caC修饰,5caC修饰谱式可用来监测细胞状态,并发现ATP及其类似物可以作为Tet酶的调节剂。并且,白血病中Tet突变使5caC活性降低或丧失。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和药学领域;更具体地,本专利技术涉及调节核酸的甲基化/去甲基化状态的方法和试剂
技术介绍
在表观调控中,现在机制了解最清楚的是胞嘧啶第5位的甲基化。胞嘧啶甲基化直接参与到了转录调控和基因组的其他调控过程中。因为胞嘧啶的甲基化会引起染色体的压缩和基因的沉默,所以对于活跃表达的基因来说,它们的启动子和促进子区域的DNA往往处于低甲基化水平状态。因此,DNA的去甲基化对于沉默基因的转录激活也起到了重要作用。·现在,特定基因位点的去甲基化和基因组规模的去甲基化都已有报道。例如,雌激素受体的目标基因PS2的启动子区域在基因的沉默和表达循环过程中是存在主动去甲基化的。对于基因组规模的去甲基化,这种现象在原始生殖细胞中出现,被认为对于擦除父母甲基化模式并在生殖细胞中建立配子特异的甲基化谱式起到重要作用;在受精后,精子基因组的重塑也伴随着父源基因组的大规模去甲基化,这种现象很可能对于早期胚胎的发育是重要的。现在,对于主动的去甲基化机制有多种解释,包括打开C-C键直接将甲基基团从甲基胞嘧啶上切除,酶促反应将甲基基团以甲醛的形式从5hmC上移除,以及通过DNA剪切修复途径(BE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DNA去甲基化的方法,包括:(1)以Tet双加氧酶处理DNA,将DNA中5?甲基胞嘧啶或5?羟甲基胞嘧啶转变为5?羧基胞嘧啶;(2)以胸腺嘧啶DNA糖基化酶处理步骤(1)获得的DNA,将DNA中5?羧基胞嘧啶切除。(3)通过DNA剪切修复途径,在5?羧基胞嘧啶切除位点加上非甲基化的胞嘧啶。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:徐国良
申请(专利权)人:中国科学院上海生命科学研究院
类型:发明
国别省市:

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