一站式ＰＣＲ方法技术

本发明专利技术属于生物化学与分子生物学领域，涉及一种新型ＰＣＲ反应方法，依次包括如下步骤：１）兼容染料混合物的配制，所述兼容染料混合物由聚蔗糖４００、甲酚红、柠檬黄和Ｇｅｌｒｅｄ组成；２）ＰＣＲ主体混合物的配制，所述主体混合物由兼容染料混合物、ｄＮＴＰ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶和反应缓冲液组成；３）ＰＣＲ反应体系的配置；４）ＰＣＲ反应条件的设定与运行；５）ＰＣＲ产物的检测。本发明专利技术方法实现了ＰＣＲ反应后的直接点样电泳和即时染色。此外，本发明专利技术使用了无毒的核酸染料，是一种低成本、高效率、无毒性的ＰＣＲ反应新方法。使用本发明专利技术得到的ＰＣＲ产物，可以直接进行多种下游操作如乙醇沉淀、硅胶膜产物纯化等。本发明专利技术方法适用于与ＰＣＲ有关的基因表达检测、基因克隆等方面的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种核酸扩增和检测的新方法，属于分子生物学

技术介绍
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自1990年由美国科学家、 诺贝尔化学奖得主 Karry Bank Mullis 博士专利技术以来(Mullis，K. B. 1990. The unusual origin of thepolymerase chain reaction. Sci Am 262,56-61.), Η^ηΤ^^ Β fe] ^ ! , 目的基因片段的指数级复制，现在已经成为体外核酸扩增的最主要手段，广泛应用于生物 学研究的各个领域。在Mullis博士提出的“PCR”概念的基础上，科学家们探索、发展出了几十种PCR的 衍生技术，比如重组PCR，不对称PCR，原位PCR等，极大地方便了生物学科研工作者开展各胃 舌云力(Wei, K. ,Wei, S. ,Morale jo, D. H. , Yamada, Τ. , 0gino,T. ,and Matsumoto,K. An efficient multiplex PCR suitable f本文档来自技高网...

【技术保护点】
一站式ＰＣＲ方法，其特征在于依次包括如下步骤：　　（１）兼容染料混合物的配制，所述兼容染料混合物由聚蔗糖４００、甲酚红、柠檬黄和Ｇｅｌｒｅｄ组成；　　（２）ＰＣＲ主体混合物的配制，所述主体混合物由兼容染料混合物、ｄＮＴＰ、Ｔａｑ　ＤＮＡ　聚合酶和反应缓冲液组成；　　（３）ＰＣＲ反应体系的配置；　　（４）ＰＣＲ反应条件的设定与运行；　　（５）ＰＣＲ产物的检测。

【技术特征摘要】
一站式PCR方法，其特征在于依次包括如下步骤(1)兼容染料混合物的配制，所述兼容染料混合物由聚蔗糖400、甲酚红、柠檬黄和Gelred组成；(2)PCR主体混合物的配制，所述主体混合物由兼容染料混合物、dNTP、Taq DNA 聚合酶和反应缓冲液组成；(3)PCR反应体系的配置；(4)PCR反应条件的设定与运行；(5)PCR产物的检测。2.根据权利要求1所述的一站式PCR方法，其特征在于所述PCR反应的运行方法包 括常规PCR、多重PCR、半定量PCR、长...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕延震，张嘉农，马钧，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]