一个适于毕赤氏酵母高活性表达的外切纤维素酶突变体制造技术

技术编号:7000516 阅读:237 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及生物技术领域,具体涉及利用分子生物学技术手段改造纤维素酶潜在的糖基化位点,获得可以在毕赤氏酵母中高活性表达的纤维素酶突变体。经重组毕赤氏酵母表达后,外切纤维素酶突变体N64S?Cel7A的酶活比rCel7A高近7倍。本发明专利技术为构建可有效地应用于生产,且高活性表达纤维素酶的重组酵母菌,提供一个新的方法和技术材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
,具体涉及对外切纤维素酶Cel7A进行定点突 变,改变其糖基化的潜在位点,以提高毕赤氏酵母表达的外切纤维素酶的酶活。
技术介绍
外切纤维素酶Cel7A在瑞氏木霉(Trichoderma reesei)分泌的纤维素酶中约占 60%左右,对纤维素的水解起着重要作用,它由⑶,CBD和linker区组成。尽管Cel7A⑶区 具有四个潜在的N-糖基化位点05,64,270和384位的氨基酸),但瑞氏木霉分泌的纤维 素酶糖基化程度并不高,糖含量仅占Cel7A分子量的14%。然而当纤维素酶在毕赤氏酵母 (Pichiapastoris)中异源表达时,酶被高度糖基化,且重组酶的活性和表达量大幅度下降。 Godbole等分析认为在两种宿主中糖基化程度不同可能是造成Cel7A在酵母中表达后酶活 低的主要原因。基于上述分析,我们有必要对Cel7A的糖基化位点进行改造,以提高毕赤氏 酵母表达的外切纤维素酶的酶活。
技术实现思路
本专利技术旨在通过分子生物学技术,定点突变外切纤维素酶Cel7A的糖基化位点, 获得可以在毕赤氏酵母中表达并具备高酶活的突变体纤维素酶。本专利技术所述的一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一个适于毕赤氏酵母高活性表达的外切纤维素酶突变体,其特征在于,对纤维素酶潜在的糖基化位点进行改造,以获得可以在毕赤氏酵母中高活性表达的纤维素酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:庄国强刘巍峰魏联果伍国超马安周
申请(专利权)人:中国科学院生态环境研究中心
类型:发明
国别省市:11

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