酿酒酵母致突变菌株RDKY3615（ΔCTT）及RDKY3615（ΔSOD）制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及利用基因敲除手段敲除酿酒酵母氧化损伤清除基因，构建突变率可控的酿酒酵母致突变菌株。利用基因敲除技术敲除酿酒酵母RDKY3615氧化氢酶CTT基因ctt1得到酿酒酵母致突变菌株RDKY3615(ΔCTT)，敲除掉超氧化物歧化酶SOD的基因sod1得到酿酒酵母致突变菌株RDKY3615(ΔSOD)。通过控制外加氧化性物质双氧水的浓度和处理的时间，可以使RDKY3615(ΔCTT)、RDKY3615(ΔSOD)致突变菌株的突变率相对野生型菌株提高50～20000倍范围内，实现可控突变。本发明专利技术构建的酿酒酵母致突变菌株RDKY3615(ΔCTT)及RDKY3615(ΔSOD)为广泛的蛋白质体内定向进化提供了一个可控的操作平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及利用分子生物学技术敲除酿酒酵母氧 化损伤清除基因，构建突变率可控的酿酒酵母致突变菌株。
技术介绍
目前致突变菌株的研究已经越来越受到关注和重视，其主要应用就是在蛋白质的 体内定向进化上。原核生物的致突变菌株研究得已经较为成熟和深入，在蛋白质的体内定 向进化上也得到广泛的应用。商品化致突变菌株XLl Red Competent cell (stratagene公 司)的突变率大约为野生型菌株自发突变率的5000倍，作为原核表达系统其缺陷在于无法 有效的表达一些源于真核生物的蛋白质，该致突变菌株的另一不足是突变率不可控制。出 于上述原因，需要构建真核生物的致突变菌株，以应用在突变率可控的真核蛋白质的体内 定向进化上。酿酒酵母(Saccharomyce scerevisiae)含有过氧化氢酶CTT、超氧化物歧化酶 S0D，这两个酶的作用是可以清除体内的氧化性物质，从而减少DNA的氧化损伤。当敲除过 氧化氢酶CTT基因cttl，超氧化物歧化酶SOD基因sodl后，在培养过程中，缺失了基因的致 突变菌株无法有效清除氧化性物质，其遗传物质将受到相对野生本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．酿酒酵母致突变菌株ＲＤＫＹ３６１５（ΔＣＴＴ）及ＲＤＫＹ３６１５（ΔＳＯＤ），其特征在于，敲除酿酒酵母清除体内氧化性物质相关的关键性酶的基因，并利用氧化性物质控制致突变菌株的突变率。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：庄国强，刘巍峰，魏联果，伍国超，马安周，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：11