一种重组抗菌肽及其基因工程制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种重组抗菌肽工程菌的制备方法及其应用，属于生物基因工程技术领域，包括抗菌肽基因的扩增，基因克隆，啤酒酵母转化，重组蛋白的高效表达和纯化。本发明专利技术的重组抗菌肽为猪源抗菌肽Cathelicidins家族PAMP-36，其蛋白含有如序列工D?No.2所示的短肽。本发明专利技术制得的重组抗菌肽可用于生产饲料添加剂、兽药、防腐剂，以及用于制备革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，真菌或病毒感染引发的疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种重组抗菌肽及其基因工程制备方法和应用
本专利技术属于生物基因工程
，具体地说涉及一种重组抗菌肽，其基因工程菌制备方法及应用。
技术介绍
目前，抗菌肽(antimicrobial/antibacterial peptides,AMP/ABP)已成为免疫学和分子生物学研究的热点。抗菌肽是一类具有抗菌活性的阳离子短肽的总称，是生物先天性免疫的重要组成部分，广泛存在于各种细菌，植物，动物以及人体中。抗菌肽具有高效，广谱抗微生物的活性特点，使其对革兰氏阳性，阴性细菌存在较强的杀伤作用，此外还具有杀真菌，原虫，抗病毒活性，杀伤肿瘤细胞等特点。近年来，由于人类对抗生素的过度滥用，药物残留和细菌耐药性等问题日益严重， 不断困扰着畜牧养殖业并引发食品安全问题。抗菌肽这一非专一性免疫应答产物，对于外界各种病原体均可产生免疫应答，而不存在某一特定的抗原物质，也不易导致病原菌产生耐药性。因此抗菌肽的问世推动了新型抗菌药物的开发研制。目前已经从猪体内发现了 12种以上不同的抗菌肽，这些抗菌肽具有不同的螺旋结构，分子量相对较小(小于IOkDa)，但对多种微生物有广谱杀灭作用。根据抗菌肽前体的基因结构、本文档来自技高网...

【技术保护点】
将工程菌扩大培养，纯化蛋白：：分别用限制性内切酶ＸｂａＩ和ＨｉｎｄＩＩＩ双酶切重组质粒和酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α。回收酶切产物，用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，构建重组表达质粒ＰＶＴ－ＰＭＡＰ３６，用电转的方法转入酿酒酵母Ｓ７８，获得阳性转化子Ｓ７８－ＰＭＡＰ３６。Ｄ．得编码ＰＭＡＰ－３６的基因片段。Ｂ．基因克隆和转化大肠杆菌：回收ＰＣＲ产物，用Ｔ４连接酶与ＰＭＤ１８－Ｔ载体连接。转化大肠杆菌ＴＯＰ１０感受态细胞，经抗性培养基筛选后，获得具有正确编码序列的ＰＭＡＰ－３６基因。Ｃ．酿酒酵母表达载体构建和转化１．重组抗菌肽ＰＭＡＰ－３６的工程菌以及产物的制备方法，其特征在于其操作步骤为：Ａ．ＰＭＡＰ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭永鹤，李永新，林美娟，
申请(专利权)人：深圳市圣西马生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：94