一种岩生忍冬总皂苷提取方法技术

本发明专利技术公开了一种岩生忍冬总皂苷提取方法，所述岩生忍冬总皂苷提取方法乙醇回流提取的最优条件为：80％乙醇，料液比为1:14，70℃下回流105min。本发明专利技术缩短单次回流时间，增加回流次数，可能进一步增加提取率，还需要进一步的研究。现在很多人选择乙醇回流提取后样品直接通过大孔树脂纯化与富集中药成分；考虑到药液浓度可能比较高，先进行萃取，除去了部分脂溶性物质和其他一些杂质，有助于提高大孔树脂吸附率。现在大部分试验选择应用于提取植物中皂苷成分的AB‑8大孔树脂。从MIC试验中可看出岩生忍冬中的皂苷成分对14种标准菌株均具有一定的抑菌活性，具有进一步研究的价值。

A method of extracting total saponins of Caprifoliaceae

The invention discloses a method for extracting total saponins of Caprifoliaceae, the optimal condition of the Caprifoliaceae total saponin extracted from refluxing method of ethanol extraction was: 80% ethanol, solid-liquid ratio was 1:14, 70 DEG C under reflux 105min. The invention shortens the single reflux time, increases the times of reflux, and further increases the extraction rate, and further research is needed. Now many people choose ethanol reflux extracting samples directly through the purification and enrichment of traditional Chinese medicine composition of macroporous resin; considering the concentration may be relatively high, advanced line extraction, partial removal of fat soluble substances and other impurities, help to improve the macroporous resin adsorption rate. AB 8 macroporous resin applied to test selection now most saponins components in plants. From the MIC test can be seen in the Caprifoliaceae saponins have certain antibacterial activity of 14 kinds of standard strains, has the value of further study.

【技术实现步骤摘要】
一种岩生忍冬总皂苷提取方法
本专利技术属于总皂苷提取
，尤其涉及一种岩生忍冬总皂苷提取方法。
技术介绍
岩生忍冬(LonicerarupicolaHook.f.etThomson.)为忍冬科忍冬属常绿藤木植物。主要分布于甘肃(临潭)、宁夏南部、四川西部、云南西北部、西藏(林芝、错那)。生于高山灌丛草甸、流石滩边缘、林缘河滩草地或山坡灌丛中，。味淡，微甘，性寒。清热解毒，疏风通络。用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛。以其茎、叶、花入药，具有清热解毒、抗菌消炎、保肝利胆等功效。皂苷是一类由糖体和苷元缩合而成的结构复杂的化合物。传统定义皂苷基于它们的表面活性，许多皂苷具有洗涤作用，其水溶液振摇能产生大量持久性肥皂样泡沫。皂苷化合物通常分子量较大，极性也大。总皂苷为结构极为相似的类似物，如糖的种类、苷元均相同，只是糖连接的位置和次序不同。近十年来从天然资源中发现的皂苷中约有310余种显示出多种生物活性，如抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、免疫调节、保肝活性等。综上所述，皂苷化合物通常分子量较大，极性也大，难以提取。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种岩生忍冬总皂苷提取方法，旨在解决皂苷化合物通常分子量较大，极性也大，难以提取的问题。本专利技术是这样实现的，一种岩生忍冬总皂苷提取方法，所述岩生忍冬总皂苷提取方法乙醇回流提取的最优条件为：80％乙醇，料液比为1:14，70℃下回流105min。进一步，所述岩生忍冬总皂苷对维氏气单胞菌CGMCC3700株抑菌活性最高，MIC值为0.48mg/mL；对其余肠沙门氏菌肠亚种CGMCC1.10754和大肠杆菌ATCC25922等13种标准菌株的MIC值分布在7.6875mg/mL-61.5mg/mL之间。本专利技术提供的岩生忍冬总皂苷提取方法，由MIC试验结果可知岩生忍冬总皂苷对本次试验中的致病菌都具有一定程度的抑制能力。其中，对总皂苷最为敏感的菌株为维氏气单胞菌CGMCC3700株，浓度为0.246g/mL的总皂苷浸膏溶液在稀释倍数为512倍时，即浓度为0.48mg/mL的时候仍对其具有抑制生长的能力。除了维氏气单胞菌CGMCC3700株，总皂苷对其余几种菌株的MIC值都在稀释倍数为4-32倍之间，即药物浓度在7.6875mg/mL-61.5mg/mL之间。试验得出最佳提取条件中提取时间为105min，本试验设计并没有涉及到时间低于105min时的提取率。可能当温度低于105min时存在更优的条件。本试验正交设计法设计影响总皂苷提取率的实验因素时没有设置回流次数这一因素。缩短单次回流时间，增加回流次数，可能进一步增加提取率，还需要进一步的研究。现在很多人选择乙醇回流提取后样品直接通过大孔树脂纯化与富集中药成分。本试验考虑到药液浓度可能比较高，先进行萃取，除去了部分脂溶性物质和其他一些杂质，有助于提高大孔树脂吸附率。现在大部分试验选择应用于提取植物中皂苷成分的AB-8大孔树脂。随着抗生素的应用不断增多，兽医临床中耐抗生素药物的致病菌株不断增加。传统中兽医中，忍冬历来就被用于清热解毒，民间更是有夏季直接将忍冬藤泡水饮用的习惯。从MIC试验中可看出岩生忍冬中的皂苷成分对14种标准菌株均具有一定的抑菌活性，对岩生忍冬在川西北畜禽疾病防控具有进一步研究的价值。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术通过正交试验设计考察乙醇浓度(％)、温度(℃)、时间(min)、料液比(W/V)对岩生忍冬中总皂苷的提取的影响。以总皂苷的浸膏率为评判标准，得出乙醇回流的最优条件为：80％乙醇，料液比(W/V)为1:14，70℃下回流105min。该条件下浸膏率可达9.84％。用微量稀释法检测总皂苷抑菌活性，结果表明岩生忍冬总皂苷提取物对14种病原菌均有一定程度的抑制作用。其中，对维氏气单胞菌CGMCC3700株抑菌活性最高，MIC值为0.48mg/mL。对其余13种菌株的MIC值分布在7.6875-61.5mg/mL。下面结合试验对本专利技术的应用原理作进一步的描述。1试验材料1.1试验药材：岩生忍冬，采自四川省阿坝州红原县，经西南民族大学兽医学药理实验室陈朝喜副教授鉴定为忍冬属岩生忍冬。取其茎叶，样品经自然风干后粉碎备用。1.2试验菌株：供试菌株为14种标准菌株，由西南民族大学兽医药理实验室保存并提供。1.3仪器及试剂：试验仪器：SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、DLSB-10L/20低温冷却液循环泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、旋转蒸发仪RE-3000(上海亚荣生化仪器厂)、DHP-9162电热恒温培养箱(上海齐欣科学仪器有限公司)、立式高压蒸汽灭菌器、索式提取器、DZF-6030A真空干燥箱、电子分析天平、超净工作台、分液漏斗、移液枪(200L、1000L)。试验试剂：MH肉汤培养基、石油醚、正丁醇(分析纯)、乙醇(10％、20％、30％...90％)、浓硫酸(分析纯)、甲醇(分析纯)、去离子水。2方法与步骤2.1试验步骤：采药乙醇回流浸提石油醚萃取正丁醇萃取大孔树脂精制总皂苷微量肉汤稀释法测定MIC。2.2试验方法2.2.1正交设计法正交设计是利用一套规格化的表格来科学合理的安排多因素多水平试验的设计方法。依据正交性从全面试验中挑选出具有代表性的点进行试验，这些代表性的点具有“均匀分散，齐整可比”的特点。这样可以节省人、财、物和时间，是一种高效、快速、便捷、经济的试验方法，也是现代提取中药成分时常用的设计方法之一。本次试验为四因素三水平试验，故选用表L9(43)设计正交试验。因素水平的设计见表1。表1乙醇回流提取总皂苷因素水平的设计注：A乙醇浓度(％)B温度(℃)C时间(min)D料液比(W/V)2.2.2乙醇回流提取乙醇回流提取是指用乙醇溶液浸提药材成分，浸提液被加热，溶剂馏出后又被冷凝回浸出器中浸提药材。这样周而复始，直至药材中的有效成分被浸提完全。温度、时间、料液比、乙醇浓度是乙醇回流的重要影响因素，故在此四个因素各设置三个水平，优选提取条件。以总皂苷的浸膏率为提取率评判标准：浸膏率(％)＝浸膏质量/岩生忍冬干重×100％。2.2.3液液萃取萃取是利用各种组分(包括目的产物)在两个不相混溶的液相中的溶解系数差异很大，萃取剂有较高的溶解能力，而萃余项溶解度较低。使溶质部分从萃取剂内转移到以原溶剂为主的萃余项内，从而达到分离目的。本试验先后经两步萃取，第一步是石油醚-水相萃取，取水层，弃去溶解有酯类的石油醚层，起到脱脂的作用；第二步是正丁醇-水相萃取，取溶解有皂苷的水饱和正丁醇层。萃取后将水饱和正丁醇层减压旋蒸、烘干。以浸膏率作为评判标准，选出乙醇回流的最佳条件。再分别称取3组重5g药物做平行试验，检测提取工艺的可靠性和重复性，收集这三组平行试验的浸膏产物(共2.22g)，备用。同时在此最优条件下提取10g岩生忍冬，得浸膏(1.38g)备用。2.2.4大孔树脂法大孔树脂(macroporousresin)又称全多孔树脂，树脂表面有大大小小、形状各异、互相贯通的孔穴，通过其巨大的比表面积产生较大的范德本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种岩生忍冬总皂苷提取方法，其特征在于，所述岩生忍冬总皂苷提取方法乙醇回流提取的条件为：80％乙醇，料液比为1:14，70℃下回流105min。

【技术特征摘要】
1.一种岩生忍冬总皂苷提取方法，其特征在于，所述岩生忍冬总皂苷提取方法乙醇回流提取的条件为：80％乙醇，料液比为1:14，70℃下回流105min。2.如权利要求1所述的岩生忍冬总皂苷提取方法，其特征在于，所述岩生...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈朝喜，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川,51