一种有效扩增CIK且提高其特异性杀瘤能力的方法技术

本发明专利技术提供了一种扩增CIK细胞且提高其特异性杀瘤的培养方法，所述的方法包括分离获得单个核细胞，将其转至培养瓶中，加入终浓度为400-600ng/ml CD3mAb、1400-1600 ng/ml CD28mAb、4000-4800IU/ml IFN-γ、4000-4800IU/ml IL-2、140-160ng/ml IL-15，第4天补加600-1000IU/ml IL-2、20-30ng/ml IL-15的新鲜培养液，第6天分瓶培养，第8、9天分别将瓶中的细胞转至1.8L细胞培养袋内，补加600-1000IU/ml IL-2、20-30ng/ml IL-15的新鲜培养液，第11天将细胞分袋培养补加600-1000IU/ml IL-2、20-30ng/ml IL-15的新鲜培养液，继续诱导扩增，第15-21天内收获细胞；将收获的细胞用抗EGFR×抗CD3双功能抗体常温下孵育30-40分钟后，用生理盐水洗涤后收集细胞，即制成特异性杀瘤的CIK细胞制剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种有效扩增CIK细胞且提高其特异性杀瘤的方法。
技术介绍
恶性肿瘤是继心血管疾病之后的危害人类健康的第二号杀手，近年来，肿瘤的发生率和死亡率呈逐年上升的趋势，且肿瘤发病成年轻化趋势。随着分子生物学和免疫学等学科的快速发展，肿瘤的生物免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗之后的第四种疗法。其中，肿瘤过继性免疫细胞治疗成为当前研究的热点，其是指将人体外扩增的具有抗肿瘤活性的免疫细胞回输至患者体内，从而直接或间接激发机体免疫应答以杀伤肿瘤细胞的一种细胞疗法。它具有个体性、安全性、靶向性和高效性等优势。细胞因子诱导的杀伤性细胞(Cytokine-InducedKillercells，CIK)属于肿瘤过继性免疫细胞治疗中的一种，由美国斯坦福大学的SchmidtWolf于1991年首次报道，他们发现人外周血单个核细胞于多种细胞因子(如IFN-γ、抗CD3McAb、IL-1α和IL-2)作用一段时间后，被定向诱导并大量增殖成为可同时表达CD3和CD56两种膜蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种扩增CIK细胞且提高其特异性杀瘤的培养方法，其特征在于：所述的方法包括分离获得单个核细胞，将其转至培养瓶中，加入CD3mAb、CD28mAb、IFN‑γ、IL‑2、IL‑15，第4天补加IL‑2和IL‑15，第6天分瓶培养，第8、9天分别将瓶中的细胞转至1.8L细胞培养袋内，补加IL‑2和IL‑15，第11天将细胞分袋培养补加IL‑2和IL‑15，继续诱导扩增，第15‑21天内收获细胞；将收获的细胞用双特异性抗体常温下孵育30‑40分钟后，用生理盐水洗涤后收集细胞，即制成特异性杀瘤的CIK细胞制剂。

【技术特征摘要】
1.一种扩增CIK细胞且提高其特异性杀瘤的培养方法，其特征在于：所述的方法包括分
离获得单个核细胞，将其转至培养瓶中，加入CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ、IL-2、IL-15，第4天
补加IL-2和IL-15，第6天分瓶培养，第8、9天分别将瓶中的细胞转至1.8L细胞培养袋内，补
加IL-2和IL-15，第11天将细胞分袋培养补加IL-2和IL-15，继续诱导扩增，第15-21天内收
获细胞；将收获的细胞用双特异性抗体常温下孵育30-40分钟后，用生理盐水洗涤后收集细
胞，即制成特异性杀瘤的CIK细胞制剂。
2.根据权利要求1所述的一种扩增CIK细胞且提高其特异性杀瘤的培养方法，其特征在
于：所述方法具体包括如下：
（1）单核细胞分离：
（a）取500ul外周血用血细胞分析仪计数、活性检测：将外周血与生理盐水等体积混
合，之后加入40mlFicoll淋巴细胞分离液离心分离单核细胞；离心参数：1600rpm、20摄
氏度、20分钟；
（b）取白膜，加入生理盐水至总体积80ml，离心洗涤两次；离心参数：2000rpm、20摄氏
度、8分钟；
（c）细胞用无血清基础培养基重悬细胞沉淀，利用细胞计数仪进行细胞计数；
（2）CIK诱导培养：
（a）分离的单核细胞计数后，按8-10×105个/ml密度接种于培养瓶中，补加终浓度为
400-600ng/mlCD3mAb、1400-1600ng/mlCD28mAb、4000-4800IU/mlIFN-γ、4000-
4800IU/mlIL-2、140-160ng/mlIL-15，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖桂清，苏爱盟，
申请(专利权)人：福建省银丰干细胞工程有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35