一种提高PCR特异性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高PCR特异性的方法，在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。本发明专利技术的方法在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯，可以显著增强PCR反应的特异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种提高PCR特异性的方法。
技术介绍
PCR是一种体外选择性扩增DNA的技术，每次扩增都以上一次扩增的产物作模板，目标产物在几小时内增加数百万倍。虽然PCR非常敏感，但是很多因素会影响PCR的扩增效率，如引物序列、模板DNA的GC含量、Mg2+浓度、退火温度等。为了克服PCR容易产生非特异性产物的局限性，纳米材料被用作添加剂来改善PCR。2005年首次发现金纳米粒子能提高PCR的产量及特异性(AngewandteChemieInternationalEdition,2005,44:5100-5103)。此后发现量子点(Biochimie,2009.91:969-973)、碳纳米材料(Nanotechnology,2004,15:154-157)、聚合物纳米粒子(ACSappliedmaterials&interfaces,2015,7:13142-13153)等对PCR都有一定的改善。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高PCR特异性的方法。本专利技术的具体技术方案如下：一种提高PCR特异性的方法，在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚丙烯酸，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～2.4μg/mL。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚丙烯酰胺，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为2.4～9.6μg/mL。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚乙二醇，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～19.2μg/mL。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚磺基甜菜碱，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～38.4μg/mL。进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酸单体混合均匀，通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸铵，同时加热到68～72℃反应2.5～3.5h,反应结束后冷却到室温，加入180～220mL水进行稀释，超声1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸，离心收集固体，真空干燥后，即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酰胺单体混合均匀，通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸铵，同时加热到68～72℃反应2.5～3.5h,反应结束后冷却到室温，加入180～220mL水进行稀释，超声1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酰胺，离心收集固体，真空干燥后，即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取10mL3M的NaOH加入45～55mL0.8～1.2mg/mL的氧化石墨烯中，超声反应2.5～3.5h，然后加入一定量的HCl中和过量的NaOH至中性，继而过滤水洗，并重新分散到水中，加入1.8～2.2mg/mL氨基修饰的PEG超声反应4～5min后加入4.5～5.5mM的EDC继续超声25～40min，最后再加入足量EDC至20mM搅拌过夜，离心取上清即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯，上述氨基修饰的PEG的结构式为且分子量为4000～6000。进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL，0.8～1.2g磺基甜菜碱单体，通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸钾，同时加热到63～67℃反应13～17h,反应结束后冷却到室温，透析至除去未接上氧化石墨烯的聚磺基甜菜碱，离心取上清即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。本专利技术的有益效果是：本专利技术的方法在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯，可以显著增强PCR反应的特异性。附图说明图1为本专利技术实施例1制备的各种聚合物修饰的氧化石墨烯的原子力显微镜照片。图2为本专利技术实施例2的实验结果对比图。图3为本专利技术实施例3的实验结果对比图。具体实施方式以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例1聚合物修饰的氧化石墨烯的制备：(1)聚丙烯酸修饰的氧化石墨烯(GO-PAA)的制备：取1.0mg/mLGO50mL，1g丙烯酸单体，通氮气30min以除去溶液中的残留的氧，继而加入80mg过硫酸铵，同时加热到70℃反应3h,反应结束后冷却到室温，加入200mL水进行稀释，超声1h，透析一周，除去未接上石墨烯的聚丙烯酸，离心收集固体，即得PAA修饰的GO(GO-PAA)，真空干燥箱干燥一夜备用。(2)聚丙烯酰胺修饰的氧化石墨烯(GO-PAM)制备方法同上,只是用丙烯酰胺单体替代了丙烯酸单体。(3)聚乙二醇修饰的氧化石墨烯(GO-PEG)的制备：取10mL3M的NaOH加入50mLGO溶液，超声反应3h，然后加入一定量的HCl中和过量的NaOH使溶液呈中性，继而过滤水洗，并重新分散到水溶液中，加入2mg/mL氨基修饰的PEG超声反应5min，加入5mM的EDC继续超声30min，最后再加入足量EDC至20mM搅拌过夜，低速离心取上清即得GO-PEG，上述氨基修饰的PEG的结构式为且分子量为4000～6000。(4)聚磺基甜菜碱修饰的石墨烯(GO-pSB)的制备：取1.0mg/mLGO50mL，1g磺基甜菜碱单体，通氮气30min以除去溶液中的残留的氧，继而加入80mg过硫酸钾，同时加热到65℃反应15h,反应结束后冷却到室温，透析一周，除去未接上石墨烯的聚磺基甜菜碱，低速离心取上清即得GO-pSB。上述GO-PAA、GO-PAM、GO-PEG和GO-pSB分别如图1的a、b、c和d所示，从图中可以看出，聚合物修饰的氧化石墨烯的尺寸不均一，其中GO-PAA的片层大小为300±23.5nm，厚度在1nm左右；GO-PAM片层大小为200±15.8nm，厚度在3nm左右；GO-PEG片层大小为150±10.2nm，厚度在1nm左右；GO-pSB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高PCR特异性的方法，其特征在于：在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。

【技术特征摘要】
1.一种提高PCR特异性的方法，其特征在于：在PCR反应体系中添加聚合物修饰
的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合
物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙
烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物为聚丙烯酸，所述聚合物修
饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～2.4μg/mL。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物为聚丙烯酰胺，所述聚合物
修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为2.4～9.6μg/mL。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物为聚乙二醇，所述聚合物修
饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～19.2μg/mL。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物为聚磺基甜菜碱，所述聚合
物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～38.4μg/mL。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制
备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酸单体混合均匀，
通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸铵，同时加热到68～72℃反
应2.5～3.5h,反应结束后冷却到室温，加入180～220mL水进行稀释，超声1～1.3h，透
析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸，离心收集固体，真空干燥后，即得所述聚合物修
饰的氧化石墨烯。
7.如权利要求1或3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙莉萍，钟勇，熊云景，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35