本申请公开了获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的方法，所述方法包括：(a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群；(b)从所述混合群中特异地选择表达TIM-3、LAG-3、4-1BB以及PD-1中的任何一种或多种的CD8+ T细胞；和(c)将(b)中选择的细胞与未被选择的细胞分离，以获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群。也公开了向哺乳动物施用富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的相关方法、获得包含富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的药物组合物的方法、以及分离的或纯化的细胞群。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】从肿瘤中产生肿瘤反应性T细胞的富集群的方法 相关申请的交叉引用 本专利申请要求2013年3月1日提交的美国临时专利申请第61/771，247号的权 益，将其W引用的方式整体并入本文。 阳00引专利技术背景 在一些癌症患者中，使用肿瘤反应性T细胞的过继性细胞疗法（ACT)产生了积极 的临床反应。然而，在将ACT成功地用于癌症或其它疾病的治疗中仍然存在一些障碍。例 如，从肿瘤中分离到的T细胞可能表现不出足够的肿瘤特异的反应性。因此，需要从肿瘤中 获得肿瘤反应性T细胞群的改进方法。 阳00引专利技术概述 本专利技术的实施方案提供了获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的方法，所述方法 包括：（a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群化ulkpopulation);化）从混合群中特异地 选择表达1'加-3、1^\6-3、4-188^及口〇-1中的任何一种或多种的〔08叮细胞；和似将化） 中选择的细胞与未被选择的细胞分离，W获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群。 本专利技术另一实施方案提供了向哺乳动物施用富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的 方法，所述方法包括：(a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群；化）从混合群中特异地选择 表达TIM-3、LAG-3、4-lBBW及PD-1中的任何一种或多种的CD8叮细胞；（C)将化）中选择 的细胞与未被选择的细胞分离，W获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群；和（d)向哺乳动物 施用所述富集肿瘤反应性T细胞的细胞群。 本专利技术另一实施方案提供了获得包含富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的药物组 合物的方法，所述方法包括：(a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群；化）从混合群中特异 地选择表达TIM-3、LAG-3、4-lBBW及PD-1中的任何一种或多种的CD8+T细胞；（C)将化） 中选择的细胞与未被选择的细胞分离，W获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群；和（d)将所 述富集肿瘤反应性T细胞的细胞群与药学上可接受的载体组合，W获得包含富集肿瘤反应 性T细胞的细胞群的药物组合物。 本专利技术另一实施方案提供了通过下述方法获得的富集肿瘤反应性T细胞的细胞 群：(a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群；化）从混合群中特异地选择表达TIM-3、LAG-3、 4-1BBW及PD-1中的任何一种或多种的CD8+T细胞；和（C)将化）中选择的细胞与未被选 择的细胞分离W获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群，用于向哺乳动物施用富集肿瘤反应 性T细胞的细胞群。 本专利技术另外的实施方案提供了相关的细胞群W及治疗或预防癌症的方法。 附图中几个视图的简要描述 阳01引图1A是显示从新鲜的黑素瘤样本中分离的CD37CD8+细胞百分比的图，所述细胞 表达PD-1、TIM-3、LAG-3、4-lBB、0X40、CD25、CD28、CD27 或CD70。每个点代表一个肿瘤。 [001引图1B是显示体外扩增触巧14天后，CD8+细胞数目的倍数扩增的图，所述CD8+细 胞是从新鲜的黑素瘤样本中（化化#1913)分离，并被分选为表达CD8、PD-l、LAG-3、TIM-3或 4-1BB，或者不表达PD-1、LAG-3、TIM-3 或 4-1BB。图2A-沈显示了从五个不同的黑素瘤样本（化化#1913 (A)、化化#3550度）、 化化#3289 (C)、化化#2448值）或化化#3713巧)）中的一个分离的CD8+细胞中干扰素 (IFN) - 丫的分泌（pg/ml)(黑色柱）或者表达CD3、CD8和4-1BB的效应T细胞灯eff)的 百分数（灰色柱）。分选表达〔08、？0-1、1^\6-3、1'加-3或4-188，或者不表达？0-1、1^\6-3、 TIM-3或4-1BB的细胞，并且将其在体外扩增14天。当与自体肿瘤细胞系共培养时，对干扰 素（IFN)-丫的分泌W及4-1BB的表达进行分析。 图3A-3C显示了在标明的效应细胞：祀细胞比率下，效应CD8叮细胞对目标肿瘤 细胞系TC1913(自体的）（A)、TC3289(同种异体的）度）或TC2448(匹配HLA-A0201的） (C)特异性溶解的百分比，所述效应CD8+T细胞是从黑素瘤样本化化#1913中分离，并被分 选为表达CD8 (空屯、圆圈）、PD-1 (黑色圆圈）、TIM-3 (黑色菱形）、LAG-3 (黑色S角形）或 4-1BB(黑色正方形），或者不表达PD-1 (灰色圆圈）、TIM-3 (灰色菱形）、LAG-3 (灰色S角 形）或4-1BB(灰色正方形）。 图3D-3F显示了在标明的效应细胞：祀细胞比率下，效应CD8叮细胞对目标肿瘤细 胞系TC3713 (自体的）值)、TC3550 (同种异体的）（巧或TC1379 (同种异体的）（巧特异性 溶解的百分比值-F)，所述效应CD8+T细胞是从黑素瘤样本化化#3713中分离的，并被分选 为表达CD8 (空屯、圆圈）、PD-1 (黑色圆圈）、TIM-3 (黑色菱形）或4-1BB(黑色正方形），或 者不表达PD-1 (灰色圆圈）、TIM-3 (灰色菱形）或4-1BB(灰色正方形）。 图4A显示了从黑素瘤脚化#37蝴中分离的细胞对自体肿瘤的识别，所述细胞 被分选为CD8\PD-rPD-1、4-lBB\4-lBB、4-1BB7PD-1、4-lBB7PD-r、4-lBB/PD-r或 4-lBB/PD-1的细胞，并在体外扩增14天。显示了与自体肿瘤细胞系共培养时，表达4-lBB的CD3+CD8+细胞的百分比。[001引图4B是显示从黑素瘤（化化#3612)中分离后，表达4-1BB(灰白柱）或分泌IFN-丫（黑色柱）的CD3+CD8+细胞的百分比的图。细胞被分选为CD8\PD-r、PD-l、4-1BB7 PD-1、4-1BB7PD-1\4-1BB/PD-r或4-lBB/PD-1细胞群，在体外被扩增14天，并且在与 自体肿瘤细胞系共培养时，显示了IFN-丫的分泌W及4-1BB的上调。 图5A-5C显示了在标明的效应细胞与祀细胞比率下，通过M化释放分析所测 定的效应CD8+细胞对目标肿瘤细胞系TC3713(自体的）（A)、TC3550(同种异体的） 度）和TC1379(同种异体的）（C)特异性溶解的百分比，所述效应CD8+细胞是从黑素瘤 (化化#3713)中分离的，并被分选为4-1BB7PD-1 (圆圈）、4-lBB7PD-r(正方形）、4-lBB/ PD-r(菱形）或4-1BB/PD-1 (木）细胞群。 图6为显示表达4-1BB(灰白柱）或分泌IFN-丫（黑色柱）的CD8+细胞的百分比的 图，所述CD8+细胞是从胃肠道肿瘤脚l\i#3446b)中分离的，并被分选为CD8\PD-r、PD-l、 TIM-3\TIM-3、4-lBB+或4-1BB-细胞群，并且培养扩增了 21天。显示了与自体肿瘤细胞系 共培养时，IFN-丫和4-1BB的上调。 阳02U 图7A和7B显示体外扩增14天后，分选的PD-1细胞（2985TCR克隆型）（A)或分 选的PD-r细胞（805TCR克隆型）度）独特的TCRP链CDR3区氨基酸序列的频率（％ )。 阳0巧图7C显示分选的PD-1细胞（黑色圆圈）或分选的PD-r细胞（灰色圆圈）的独 特的TCRP链CDR3区氨基酸序列的频率（％ )。 阳0本文档来自技高网...
【技术保护点】
获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群的方法，所述方法包括：(a)从肿瘤样本中获得T细胞的混合群；(b)从所述混合群中特异地选择表达TIM‑3、LAG‑3、4‑1BB以及PD‑1中的任何一种或多种的CD8+T细胞；和(c)将(b)中选择的细胞与未被选择的细胞分离，以获得富集肿瘤反应性T细胞的细胞群。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿莱娜·格罗斯，史蒂文·A·罗森伯格，
申请(专利权)人：美国卫生和人力服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US
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