测定富集于肿瘤反兴性细胞中的淋巴结的方法技术

本发明专利技术涉及测定富集于肿瘤反应性细胞中的淋巴结的方法。该方法包括给患者施用有效量的放射性标记的定位剂，该定位剂特异性地与由瘤组织产生的或与之相关的一个标志相结合。然后，通过用放射检测探针检测淋巴结位点处提高的辐射水平而确定显示有合生了放射性标记定位剂的淋巴结位点，从而用该探针接近病人（优选用外科手术），取出显示有辐射水平提高的淋巴结位点并进行肉眼观察分析或组织学分析。然后选择出肉眼观察无肿瘤组织或可转移疾病的淋巴结进行培养，目的是激增肿瘤反应性细胞，使其成为治疗癌症的有效治疗剂。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定富集于肿瘤反应性细胞中的淋巴结的方法，和这些淋巴结的增殖及其在适于采用的细胞治疗中的应用。本专利技术中将使用下列缩写LNL 淋巴结淋巴细胞PBL 外周血淋巴细胞TIL 肿瘤侵润性淋巴细胞LAK 淋巴因子激活的杀伤细胞IL-2 白细胞介素-2抗-CD3抗-CD3单克隆抗体CC49 CC49单克隆抗体TAG 肿瘤相关性糖蛋白Auto 自体的Allo 异源的Glio 人工培养的人神经胶质瘤细胞系CAR1 人类癌瘤肿瘤CEA 癌胚抗原MoAB 单克隆抗体BSM 牛下颌粘液PBMC 外周血单核细胞WD124 人工培养的人结肠癌细胞系大约有50%的确诊为结肠直肠癌的患者将发展为结肠或直肠外的转移性疾病。这些患者中大多数人在进行辅助外科手术后不能痊愈，因为疾病不仅是肝内的也是肝外的。需要其它的治疗方法以提高患有这种疾病的病人的存活性。适于采用的免疫治疗法为癌症治疗提供了一种吸引人的治疗模式。Rosenberg等人利用淋巴因子如白细胞介素2(IL-2)以及来源于患者外周血的淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)证明，占少量但却是重要的百分比的患有黑素瘤和肾细胞癌的患者获得了长期持久的反应。Rosenberg等人，“Adoptive Cellular TherapyClinical Applications”，Biologic Therapy of Cancer，Devita，etal.(Eds.)，J.B.Lippincott Company，Philadelphia，Pa.，1991。第二种适于采用的免疫治疗的途径是从人工培养肿瘤扩展淋巴细胞。Rosenberg，“Adoptive Cellular TherapyClinical Applications”，Biologic Therapy of Cancer，Devita，et al.，(Eds)，J.B.Lippincott Compary，Philadelphia，Pa.，P.241(1991);Topalian，et al.“Tumor Infiltrating LymphocytesEvidence of Specific Immune Reactions Against Growing Cancers in Mice and Human”，Important Advances in Oncology 1990，DeVita，et al，(Eds)，J.B.Lippincott Company，Philadelphia，Pa.，P.19(1990)，and Rosenberg;et al.，“Use of Tumor-Infiltrating Lymphocytes and Interleukin-2 in the Immuno-therapy of Patients with Metastatic Melanoma”，N.Engl.J.Med.，251671，1988。利用这些肿瘤侵润性淋巴细胞(TIL)，几个研究者已提供文件证明这些TIL细胞比LAK细胞具更优越的肿瘤细胞裂解活性以及更好地运输到肿瘤。Rosenberg et al.，N.Engl.J.Med.，id.;Dillman，et al.，“Continuous Interleukin-2 and Tumor-Infiltrating Lymphocytes as Treatment of Advanced Melanoma”，Cancer，68∶1，1991;Kradin，et al.，“Tumor-Infiltrating Lymphocytes in Interleukin-2 in Treatment of Advanced Cancer”，Lancet，33∶577，1989;and Bukowski，et al.，“Clinical Results and Characterization of Tumor-Infiltrating Lymphocytes with or without Recombinant Interleu-kin-2 in Human Metastatic Renal Cell Carcinoma”，Cancer Res.51∶4199，1991。总之，这些TIL细胞对患有黑素瘤的病人显示有治疗效果。已从许多固态肿瘤，包括结肠和乳腺癌中繁殖出肿瘤侵润性淋巴细胞;但是，在体外这些细胞并不显示出传递肿瘤特异性细胞裂解活性，并且这些细胞是否在适于采用的免疫治疗模型中有效还有待测定。Rosenberg，“Gene Therapy of Cancer”，Important Advances in Oncology，1992，DeVita，et al.(Eds)，J.B.Lippincott Co.，New York，NY，pp 17-18，1992。另一条用肿瘤特异性淋巴细胞进行肿瘤治疗的令人振奋的途径是替代能够定点地将细胞因子释放到肿瘤上的细胞中的细胞因子基因。Kasid，et al.，“Human Gene TransferCharacterizationof Human Tumor Infiltrating Lymphocytes as Vehicles for Retroviral-Mediated Gene Transfer in Man”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87∶473-477，1990;and Rosenberg，et al.，“Gene Transfer into HumansImmunotherapy of Patients with Advanced Melanoma Using Tumor Infiltrating Lymphocytes Modified by Retroviral Gene Transduction”，New Engl.J.Med.，323∶570-578，1990。已在几个模型系统中证实，已感染了各种细胞因子基因包括IL-2、γ-干扰素以及肿瘤坏死因子(TNF)的肿瘤细胞比没有产生细胞因子的亲本细胞更具免疫原性以及更小的致瘤性。Gansbacher，et al.，“Retroviral Vector-Mediated Gamma Interferon Gene Transfer into Tumor Cells Generates Potent and Long Lasting Antitumor Immunity”，Cancer Res.50∶7820-7825，1990;Gansbacher，et al.，“Interleukin 2 Gene Transfer into Tumor Cells Abrogates Tumorigenecity and Induces Protective Immunity”，J，Exp.Med.，172∶1217-1224，1990;and Blankenstein，et al.，“Tumor Suppression after Tumor Cell-Targeted Tumor Necrosis本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测淋巴结的方法，该淋巴结富集于包括ＣＤ４＋肿瘤特异性淋巴细胞的肿瘤特异性淋巴细胞中，包括下列步骤：ａ）给患者施用有效量的放射性标记的定位剂，该定位剂特异性地结合一种由瘤组织产生的或与之相关的一种标志；ｂ）在步骤ａ）之后间隔一段 时间，目的使所说的放射性标记的定位剂优先富集于瘤组织中，并且清除掉未结合的放射性标记的定位剂，以便提高患者瘤组织的光发射与背景光发射的比例；ｃ）在步骤ｂ）中所述的时间间隔之后，通过用放射性检测探针检测所述淋巴结位点处提高的发射含量的方法 ，用所述探针确定显示有合生了放射性标记的定位剂的淋巴结位点来接近所述患者；ｄ）取出在步骤ｃ）中测出的淋巴结；ｅ）从那些取出的淋巴结中选择肉眼观察不含有肿瘤迹象的淋巴结；并且ｆ）培养从步骤ｅ）中选出的所说的淋巴结以激增本文中所述的 肿瘤特异性淋巴细胞。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：小爱德华W马丁，布雷恩J查尔内基，皮尔L特里兹，朱利安A金，
申请(专利权)人：俄亥俄州立大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]