一种肿瘤细胞增殖显像剂前体的含量分析方法技术

一种肿瘤细胞增殖显像剂前体的含量分析方法，涉及［５’－Ｏ－（４，４’－二甲氧基三苯甲基）－２’－脱氧－３’－Ｏ－（４－硝基苯磺酰基）－β－Ｄ－苏型呋喃戊糖基］胸苷（Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ）的含量分析方法，属于仪器分析技术领域。本发明专利技术提供了一种用高效液相色谱－蒸发光散射检测器检测Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ含量的方法，显示主成分峰与杂质峰分离良好，线性范围为１０～１００μｇ／ｍＬ，最小检出量为５．０ｎｇ（Ｓ／Ｎ≥３）。所得检测结果的相对标准偏差约为１．２５％。本发明专利技术用液相色谱蒸发光散射检测器分析Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ的含量及有关杂质含量，方法简便、可靠。

【技术实现步骤摘要】
技术领，具体涉及[5'-0-(4，4'-二甲氧 基三苯甲基)-2，-脱氧-3，-0-(4-硝基苯磺酰基H3-D-苏型呋喃戊糖萄胸苷的含量 分析方法，属于仪器分析
技术背景[5，-0-(4，《-二甲氧基三苯甲基)-2，-脱氧-3，-0-(4-硝基苯磺酰基)-P-D-苏型呋 喃戊糖基]胸苷(Noso-FLT)是一种肿瘤细胞增殖显像剂3，-脱氧-3，-氟胸腺嘧啶 脱氧核苷(18F-FLT ， 3'-deoxy-3，-fluorothymidine)的标记前体。其化学结构式 如下Noso-FLT 1SF-FLTF-FLT具有化学性质稳定，在体内不会很快分解，能用于检测细胞增殖等 优点。通过正电子断层扫描PET显像反映胸腺苷激酶1(TK-1)的活性而间接反映肿瘤细胞的增殖状况，有助于对肿瘤进行良恶性鉴别、疗效评估和预后判断。 目前多家PET中心应用F-FLT对多种肿瘤进行了广泛深入的细胞株研究、动物 实验和临床应用研究。众多研究表明，F-FLT可能是一种比目前临床常用的 肿瘤PET药物F-FDG (F-脱氧葡萄糖)的肿瘤特异性更高的PET示踪剂，并可能在早期无创评价肿瘤治疗反应及预后评估方面具有重要价值，是具有应用 前景的PET显像剂。为了获得高质量的PET肿瘤细胞增殖显像剂F-FLT，在制备前体Noso-FLT 的过程中，必须严格控制杂质含量。用一般的紫外检测器能够检测Noso-FLT， 但对一些不具有紫外吸收或紫外吸收较弱的杂质，无法检测。紫外检测色谱图 见图l。我们采用蒸发光散射检测器(ELSD)，其特点是洗脱液进入检测器后，首 先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drifttube)，流动相 及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模拟数 字转换成色谱数字信号——色谱图。所有进入到散射池的物质都可被检测，而 且响应值只与物质的量有关，与通用型检测器示差检测器相比它没有折光视差效应，具有不会出现基线漂移的优点。因此，我们用HPLC-ELSD可以检测到 Noso-FLT中所有杂质，包括无紫外吸收的杂质，色谱图见图2。相关方法未见 文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种Noso-FLT含量的分析方法，我们采用高效液相色 谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)对色谱行为进行了一系列的考察后，确定了本专利技术 方法。本专利技术的技术方案采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)对 Noso-FLT进行检测，色谱条件确定为仪器WATERS 600型高效液相色谱仪， WATERS 2420蒸发光散射检测器，色谱柱Lichrospher C8柱，5pm, 4.6x250mm， 流动相甲醇水三氟乙酸(TFA)体积比为90 : 10 : 0.1，使用前经0.45阿 有机滤膜抽滤并脱气，流速0.5mL/min; Noso-FLT样品的进样体积5pL;漂 移管温度45~60°C; N2压力25 35psi;柱温室温。精密称取干燥恒重的 Noso-FLT对照品，用甲醇配制成每lmL中含Noso-FLT 0.5mg的溶液，计为W 对照(W为浓度，单位mg/mL，下同)，精密称取被测样品，用甲醇配制成每lmL 中含被测Noso-FLT样品控制为0.5mg的溶液，计为W样品，测定所得峰面积分 别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中Noso-FLT的含量为 (S样品/S对照)x (W对照/W样品)xl00%。本专利技术的有益效果本专利技术提供了一种用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测Noso-FLT含量的方法，显示主成分峰与杂质峰分离良好，线性范围为10 100^ig/mL，最小检出量为5.0ng (S/N^3)。所得检测结果的相对标准偏差约为 1.25%。本专利技术用液相色谱蒸发光散射检测器分析Noso-FLT的含量及有关杂质 含量，方法简便、可靠。附图说明图lNoso- FLT紫外检测色谱2Noso-FLT蒸发光散射检测色谱3甲醇溶液色谱4Noso-FLT对照样色谱5Noso-FLT样品色谱6Noso-FLT碱破坏色谱7Noso-FLT酸破坏色谱图具体实施例方式实施例1流动相的选择色谱柱采用C8柱，5^m, 4.6x250mm，分别用下列流动相试验(A)甲醇-水(90 ::10)(B)甲醇-水(80 ::20)(C)甲醇-水(60 ::40)(D)甲醇-水(50:50)(E)甲醇-水-TFA(90 :10 ::0.1)(F)甲醇-水-TFA(80 :20 ::0.1)(G)甲醇-水-TFA(60 :40 ::0.1)(H)甲醇-水-TFA(50 :50 ::0.1)以A H为流动相的色谱图，其中E色谱图中主峰与杂质峰之间有合适的分 离度，且主峰的保留时间比较合适，如错误！未找到引用源。所示。 实施例2漂移管温度的设定将漂移管温度分别设为4(TC 10(TC进行试验，结果显示漂移管温度为 45 °C 60 °C时色谱分离较好。实施例3载气(N2)压力设置载气(N2)压力选择15、 25、 35、 45psi试验，压力为25~35psi时色谱效 果较好。因此，色谱条件确定为仪器WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS 2420蒸发光散射检测器。色谱柱Lichrospher C8柱，5nm, 4.6x250mm，流动 相甲醇-水-TFA(90 : 10 : 0.1)，使用前经0.45pm有机滤膜抽滤并脱气。流速 0.5ml/min;进样体积10|il;柱温室温；ELSD漂移管温度45°C 60°C、载气 (N2)压力为25 35psi。实施例4空白试验本品用甲醇溶解，因此考査了甲醇对色谱行为的影响，错误！未找到引用 源。显示为甲醇空白HPLC色谱图，表明甲醇无溶剂峰，对色谱行为无干扰。 实施例5线性范围和检测限试验精确称取一定量的对照品Noso-FLT适量，用甲醇溶解成5mg/mL,分别进 样2、 5、 10、 15、 20nL，用积分面积对样品量作图。所得回归方程为y- 10352x -11879, R2 = 0.9958。线性范围为10 100pg/mL。取对照品适量，用甲醇配成每 lml中含0.5x10—Smg的溶液作为供试品溶液。最小检出量为5.0ng (S/N^3)。实施例6精密度试验供试品在确定的色谱条件下于同一天内连续进样6次测定，根据峰面积计 算所得相对标准偏差约为1.25%。 实施例7样品含量测定 取干燥恒重的Noso-FLT对照品(由本所制备)适量，精密称定，用甲醇制 成每lmL中含Noso-FLT 50吗(W #照)的溶液，作为对照溶液。另称取样品 适量，配成每lmL中含被测Noso-FLT样品约50iig (W縣)的溶液作为供试品 溶液。按上述色谱条件下分别取5pl注入色谱仪，进行测定，所得峰面积分别为 S对照、S附。，按外标法计算样品中Noso-FLT含量为 (S样品/S对照)x (W对照AV样品)xl00%。样品测定结果<table>table see original document page 6</column></row><t本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种［５’－Ｏ－（４，４’－二甲氧基三苯甲基）－２’－脱氧－３’－Ｏ－（４－硝基苯磺酰基）－β－Ｄ－苏型呋喃戊糖基］胸苷含量的分析方法，其特征是采用高效液相色谱－蒸发光散射对其进行检测，该化合物简称Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ，色谱条件确定为：仪器：ＷＡＴＥＲＳ６００型高效液相色谱仪，ＷＡＴＥＲＳ２４２０蒸发光散射检测器，色谱柱ＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒＣ８柱，５μｍ，４．６×２５０ｍｍ，流动相：甲醇∶水∶三氟乙酸体积比为９０∶１０∶０．１，使用前经０．４５μｍ有机滤膜抽滤并脱气，流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ；Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ样品的进样体积：５μＬ；漂移管温度：４５～６０℃；Ｎ↓［２］压力２５～３５ｐｓｉ；柱温：室温，精密称取干燥恒重的Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ对照品，用甲醇配制成每１ｍＬ中含Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ０．５ｍｇ的溶液，计为Ｗ↓［对照］，精密称取被测样品，用甲醇配制成每１ｍＬ中含被测Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ样品控制为０．５ｍｇ的溶液，计为Ｗ↓［样品］，测定所得峰面积分别为Ｓ↓［对照］、Ｓ↓［样品］，按外标法计算被测样品中Ｎｏｓｏ－ＦＬＴ的含量为：（Ｓ↓［样品］／Ｓ↓［对照］）×（Ｗ↓［对照］／Ｗ↓［样品］）×１００％。...

【技术特征摘要】
1、一种[5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧-3’-O-(4-硝基苯磺酰基)-β-D-苏型呋喃戊糖基]胸苷含量的分析方法，其特征是采用高效液相色谱-蒸发光散射对其进行检测，该化合物简称Noso-FLT，色谱条件确定为仪器WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS 2420蒸发光散射检测器，色谱柱Lichrospher C8柱，5μm，4.6×250mm，流动相甲醇∶水∶三氟乙酸体积比为90∶10∶0.1，使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆春雄，周杏琴，蒋泉福，王正武，曹国宪，俞惠新，罗世能，
申请(专利权)人：江苏省原子医学研究所，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]