TNFα抑制剂多肽、编码多肽的多核苷酸、表达多肽的细胞和生成多肽的方法技术

提供了一种植物生成的TNFα多肽抑制剂。还提供了生成和使用所述抑制剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TNFα抑制剂多肽、编码多肽的多核苷酸、表达多肽的细胞和生成多肽的方法
和
技术介绍
本专利技术，在其一些实施方案中，涉及TNFα抑制剂多肽、编码多肽的多核苷酸、表达多肽的细胞和生成多肽的方法。肿瘤坏死因子α(TNFα)是介导对不同炎症、感染和免疫相关过程和疾病的调节的重要促炎性细胞因子，TNFα被视为是造成炎症性病理最重要的介质。TNF-α为17kD分子量蛋白质，最初作为呈稳定三聚体排列的跨膜蛋白合成，然后受金属蛋白酶-TNFα转化酶(TACE)裂解形成与其泛表达的同源受体(TNFRI、p55和TNFRII、p75)接合的同型三聚体可溶性TNF(sTNF)。泛在TNF受体为多种多样的TNF-α介导的细胞反应提供了基础。TNF-α诱导了多种多样的细胞反应，其中许多导致有害后果，例如恶病质(脂肪损失及全身蛋白质损耗，导致厌食症，这在癌症和AIDS患者中常见)和败血性休克。TNF-α的分泌提高已经涉及到多种人类疾病包括糖尿病、同种异体移植物排斥、脓毒症、炎症性肠病、骨质疏松症，许多自身免疫性疾病例如多发性硬化、类风湿性关节炎、银屑病、银屑病关节炎、超敏反应、免疫复合物疾病，并且甚至涉及到疟疾、癌症和肺部纤维化。TNFα的生物学效应受两种不同受体介导。TNF-α受体，从单核细胞中流出时，通过“擦洗”并用作天然抑制剂降低TNF-α水平。通过特异性抗体和诱捕受体中和TNFα已经成为调节TNFα介导的毒性的常见策略。迄今为止，USFDA已经批准了5种蛋白基TNFα拮抗剂供临床使用：Cimzia(聚乙二醇结合赛妥珠单抗(Certolizumabpegol))，TNFmAbFab片段-PEG偶联物；Remicade(英利昔单抗(Infliximab))，TNFrmAB；Humira(阿达木单抗(Adalimumab))，TNFrmAB；SimponiTM(戈利木单抗(Golimumab))，抗TNF和依那西普(etanercept)，与人IgG的Fc片段融合的可溶性75kDaTNFα受体的融合蛋白(登记为EnbrelTM)。依那西普适用于类风湿性关节炎(RA)和其它关节炎适应症例如幼年特发性关节炎(JIA)、银屑病和强直性脊柱炎(AS)。类风湿性关节炎(RA)是影响全世界约五百万人的一种慢性疾病。全世界有适应症的近500,000名患者用Enbrel治疗。2010年Enbrel销售额为78亿美元并且抗TNF市场总额达240.4亿美元。当前或完成的Enbrel疗法的临床试验包括诸如成人呼吸窘迫综合征、天疱疮、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease)、白塞氏综合征(Behcet’ssyndrome)、HIV、心肌梗塞、膝关节滑膜炎、狼疮性肾炎、扁平苔癣、全身性淀粉样变性病、坐骨神经痛、白癫风、慢性疲劳综合征、厌食、TMJ、哮喘、支气管炎、糖尿病、骨髓增生异常疾病等不同适应症。当前在哺乳动物细胞中生成Enbrel。由于新兴病原体，最为显著的是HIV、HCV、库贾氏症(Cruezfeld-Jacob’sDisease)、西尼罗病毒(WestNileVirus)和SARS在世界多个地区的爆发，加强了在生物药品的生产中通过使用人或动物源性原材料，例如血源性产品(血清、浆细胞基质组分等)传播病原体的风险，最近生物药品的安全性对于患者和医疗服务人员而言已成为热门话题。例如，在病毒鉴定和筛选变得普遍之前约一半(！)的血友病人群感染了HIV。筛选和试验最近有所改善，减少了病原体传播的威胁，但是在重组生产过程中仍有风险来自于血浆源性添加剂。具体而言，来自于未知病原体的风险显著，因为这些试剂将来可能出现在血液供给中并且可对基于哺乳动物细胞的生物药品的安全性有显著影响。特别关注的是需要重复、定期施用，特别是经由注射施用的生物药品，为患者增加了累积风险。然而，从培养基中除去动物源性组分可显著改变培养性能以及翻译后蛋白质修饰。抗体分子的糖基化模式可以影响其结构完整性，从而影响其生物学功能、物理化学性质和药代动力学，改变功效和安全性，特别是免疫原性。虽然近几年内尚未发生大规模爆发，但是减少生物药品生产中对血液和血浆组分的依赖仍至关重要。相反，在哺乳动物细胞培养中重组蛋白生成由于异源污染而不安全。2009年Genzyme由于病毒污染而被迫临时关闭其主要工厂。2011年前其未恢复全部药物供应。在美国由于唯一批准用于法布里病(Fabry)患者的药物的缺乏，一些患法布里病的人遭受了心脏或肾脏问题并且一个或多个患者甚至可能由于所述缺乏而死亡。非哺乳动物细胞，例如植物细胞培养物是项有希望的研发。生物药品，包括经修饰的人类蛋白，可在转基因植物中生成以便解决安全性、病毒感染、免疫反应、生产产量和成本的问题。美国专利第6,391,638号和PCTWO2008/135991讲授了用于由植物细胞培养商业规模生产重组多肽的生物反应器装置。美国专利第7,951,557号、美国专利申请第10/554,387和11/790,991号讲授了用于在植物细胞中重组表达人类蛋白的核酸载体的构建和表达。PCTWO2007/010533讲授了供肠内施用的重组人多肽在植物细胞中的表达。另外的
技术介绍
包括：Finck等的美国专利第7,915,225号，Finck等的美国专利申请第13/021,545和10/853,479号，Li等的美国专利申请第11/906,600号，Warren等的美国专利申请第10/115,625号和Gombotz等的美国专利申请第11/784,538号。
技术实现思路
根据本专利技术一些实施方案的一个方面，提供了一种植物生成的TNFα多肽抑制剂。根据本专利技术的一些实施方案，所述TNFα多肽抑制剂为抗TNFα抗体。根据本专利技术的一些实施方案，所述抗TNFα抗体选自英夫利昔单抗、阿达木单抗、聚乙二醇结合赛妥珠单抗和戈利木单抗。根据本专利技术的一些实施方案，所述TNFα多肽抑制剂为特异性结合TNFα的可溶性TNFR片段。根据本专利技术的一些实施方案，所述可溶性TNFR片段为嵌合多肽的一部分。根据本专利技术的一些实施方案，所述TNFα多肽抑制剂，其中所述嵌合多肽包含：(i)包含TNF受体的TNFα结合结构域的第一结构域，和(ii)包含免疫球蛋白的Fc结构域的第二结构域；其中所述第一结构域和所述第二结构域N端与C端分别依次翻译性融合并且其中所述嵌合多肽特异性结合TNFα。根据本专利技术的一些实施方案，所述嵌合多肽还包含含内质网滞留信号的第三结构域，其中所述第一结构域、第二结构域和第三结构域N端与C端分别依次翻译性融合。根据本专利技术的一些实施方案，TNFα多肽抑制剂包含编码内质网信号肽，N端与所述第一结构域翻译性融合的附加结构域。根据本专利技术的一些实施方案，所述信号肽为植物信号肽。根据本专利技术的一些实施方案，所述植物信号肽如SEQIDNO:4中所示。根据本专利技术的一些实施方案，所述第一结构域为200-250个氨基酸长。根据本专利技术的一些实施方案，所述第一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物生成的TNFα多肽抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.06 US 61/773,431;2013.03.06 US 61/773,4011.一种药物组合物，其包含作为活性成分的冻干的植物细胞，该冻干的植物细胞包含编码包含嵌合多肽的TNFα多肽抑制剂的核酸构建体；所述嵌合多肽如SEQIDNO:6中所示；其中所述冻干的植物细胞为来自于悬浮培养物的亮黄色-2(BY-2)烟草细胞，且其中所述嵌合多肽特异性结合TNFα并抑制TNFα活性。


2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述嵌合多肽能够抑制TNFα诱导的凋亡。


3.根据权利要求1或2中任一项所述的药物组合物，其中所述TNFα多肽抑制剂包含植物特有的聚糖。


4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述植物特有的聚糖选自由核木糖和核α-(1,3)岩藻糖组成的组。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中所述TNFα多肽抑制剂抑制TNFα诱导的凋亡。


6.一种药物组合物的用途，用于制造在受试者中治疗TNFα相关医疗状况的药物，所述药物组合物包含作为活性成分的冻干的植物细胞，该冻干的植物细胞包含编码包含嵌合多肽的TNFα多肽抑制剂的核酸构建体；所述嵌合多肽如SEQIDNO:6中所示；其中所述冻干的植物细胞为来自于悬浮培养物的亮黄色-2(BY-2)烟草细胞，且其中所述嵌合多肽特异性结合TNFα并抑制TNFα活性。


7.根据权利要求6所述的用途，其中所述医疗状况为炎...

【专利技术属性】
技术研发人员：约瑟夫·沙尔迪尔，尤里·阿纳尼亚，塔利·基日涅尔，塔米·阿里埃勒，韦斯特兰娜·金吉斯韦利茨基，
申请(专利权)人：波塔力克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL