氧化酶、编码该酶的多核苷酸、以及它们的应用制造技术

本发明专利技术提供了：编码SEQ ID NO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列的多核苷酸，具有SEQ ID NO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列的蛋白质，包含使本发明专利技术蛋白质与α‑羟基羧酸化合物作用的步骤的α‑氧代羧酸化合物的制备方法，以及包含使本发明专利技术蛋白质与α‑羟基羧酸化合物作用获得对应的α‑氧代羧酸化合物的步骤（1）、以及使具有将α‑氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L‑α‑氨基酸化合物的能力的蛋白质与步骤（1）中得到的α‑氧代羧酸化合物作用得到对应的L‑α‑氨基酸化合物的步骤的L‑α‑氨基酸化合物的制备方法等。

Oxidase, polynucleotides encoding the enzyme, and their use

The present invention provides amino acid sequence encoding SEQ ID either NO:1, 3 or 5 of the polynucleotide encoding amino acid sequence with either SEQ NO:1 or ID, 3 5 in the protein, the preparation method of containing alpha oxo carboxylic acid compounds of the present invention protein and alpha hydroxy carboxylic acid compound action steps, and the protein of the invention comprises the following steps with alpha hydroxy carboxylic acid compounds alpha oxo carboxylic acid compounds corresponding to the (1), and that with protein and alpha step oxocarboxylic acid amide compounds into the ability of L alpha amino acid compounds corresponding to the (1) alpha oxocarboxylic acid compounds obtained in the corresponding L alpha amino acid compounds steps L alpha amino acid compound preparation method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】氧化酶、编码该酶的多核苷酸、以及它们的应用
本专利技术涉及氧化酶、编码该氧化酶的多核苷酸、以及利用它们的α-氨基酸化合物等的制备方法。
技术介绍
以往，作为α-氨基酸化合物之一的甲硫氨酸用作动物用饲料添加剂。在制备该化合物时，使丙烯醛和甲硫醇反应生成3-甲硫基丙醛，再使3-甲硫基丙醛与氢氰酸、氨和二氧化碳反应生成5-（2-甲基-巯基乙基）-乙内酰脲（甲硫氨酸乙内酰脲）。最后，将5-（2-甲基-巯基乙基）-乙内酰脲通过碱水解生成碱金属甲硫氨酸盐，随后通过用酸例如硫酸或碳酸中和使甲硫氨酸游离（例如，参见专利文献1等）。现有技术文献专利文献专利文献1:特开昭55-102557号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的课题上述制备方法使用氢氰酸和丙烯醛作为C1或C3构成要素，但这些原料化合物的处理需要充分的管理和与其相适合的设备等。因此，期望开发例如甲硫氨酸等α-氨基酸化合物的新的制备方法。解决课题的手段本专利技术提供下列：第1项．编码下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的多核苷酸（下文也称为本专利技术多核苷酸(A)）：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列；第2项．前述第1项记载的多核苷酸，其具有SEQIDNO:2、4、6、15、16或17中的任一所示的核苷酸序列；第3项．在宿主细胞内可发挥功能的启动子与前述第1或2项记载的多核苷酸以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸；第4项．含有前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸的重组载体（下文也称为本专利技术重组载体）；第5项．前述第4项记载的重组载体，进一步包含编码具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列的多核苷酸、或该多核苷酸与在宿主细胞内可发挥功能的启动子以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸；第6项．前述第5项记载的重组载体，其中具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列是下述（B1）至（B3）中任一氨基酸序列：（B1）SEQIDNO:7所示的氨基酸序列、（B2）i）与SEQIDNO:7所示的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物氨基化转换成对应的L-甲硫氨酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（B3）i）在SEQIDNO:7所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物氨基化转换成对应的L-甲硫氨酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列；第7项．将前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸或前述第4项记载的重组载体导入宿主细胞而成的转化体；第8项．前述第7项记载的转化体，其中宿主细胞是微生物或大肠杆菌；第9项．将前述第5或6项记载的重组载体导入宿主细胞而成的转化体；第10项．前述第9项记载的转化体，其中宿主细胞是微生物或大肠杆菌；第11项．拥有前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸的转化体；第12项．转化体，其拥有：i）具有编码具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸，或该多核苷酸与在宿主细胞内可发挥功能的启动子以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸；和ii）前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸；第13项．重组载体的制备方法，其包含在可在宿主细胞内复制的载体中整合前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸的步骤；第14项．转化体的制备方法，其包含将前述第1至3项中任一项记载的多核苷酸或前述第4至6项中任一项记载的重组载体导入宿主细胞的步骤；第15项．具有下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的蛋白质（下文也称为本专利技术蛋白质(A)）：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列；第16项．α-氧代羧酸化合物的制备方法（下文也称为本专利技术制备方法1），其包含使具有下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的蛋白质与α-羟基羧酸化合物作用的步骤：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列；第17项．前述第16项记载的制备方法，其中α-羟基羧酸化合物是含硫α-羟基羧酸化合物，对应的α-氧代羧酸化合物是含硫α-氧代羧酸化合物；第18项．前述第17项记载的制备方法，其中：含硫α-羟基羧酸化合物是式（1）所示化合物：式中，R1表示氢或任选取代的碳原子数为1-8的烷基；含硫α-氧代羧酸化合物是式（2）所示化合物：式中，R1表示与前述相同的含义；第19项．前述第16至18项中任一项记载的制备方法，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的多核苷酸：（A1）SEQ ID NO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQ ID NO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2‑羟基‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2‑氧代‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQ ID NO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2‑羟基‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2‑氧代‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQ ID NO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2‑羟基‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2‑氧代‑4‑（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.11 JP 2014-1430211.编码下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的多核苷酸：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列。2.权利要求1记载的多核苷酸，其具有SEQIDNO:2、4、6、15、16或17中的任一所示的核苷酸序列。3.在宿主细胞内可发挥功能的启动子与权利要求1或2记载的多核苷酸以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸。4.含有权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸的重组载体。5.权利要求4记载的重组载体，进一步包含编码具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列的多核苷酸、或该多核苷酸与在宿主细胞内可发挥功能的启动子以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸。6.权利要求5记载的重组载体，其中具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列是下述（B1）至（B3）中任一氨基酸序列：（B1）SEQIDNO:7所示的氨基酸序列、（B2）i）与SEQIDNO:7所示的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物氨基化转换成对应的L-甲硫氨酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（B3）i）在SEQIDNO:7所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物氨基化转换成对应的L-甲硫氨酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列。7.将权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸或权利要求4记载的重组载体导入宿主细胞而成的转化体。8.权利要求7记载的转化体，其中宿主细胞是微生物或大肠杆菌。9.将权利要求5或6记载的重组载体导入宿主细胞而成的转化体。10.权利要求9记载的转化体，其中宿主细胞是微生物或大肠杆菌。11.拥有权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸的转化体。12.转化体，其拥有：i）具有编码具有将α-氧代羧酸化合物氨基化转换成对应的L-α-氨基酸化合物的能力的蛋白质的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸，或该多核苷酸与在宿主细胞内可发挥功能的启动子以可发挥功能的形式连接而成的多核苷酸；和ii）权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸。13.重组载体的制备方法，其包含在可在宿主细胞内复制的载体中整合权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸的步骤。14.转化体的制备方法，其包含将权利要求1至3中任一项记载的多核苷酸或权利要求4至6中任一项记载的重组载体导入宿主细胞的步骤。15.具有下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的蛋白质：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列。16.α-氧代羧酸化合物的制备方法，其包含使具有下述（A1）至（A4）中的任一氨基酸序列的蛋白质与α-羟基羧酸化合物作用的步骤：（A1）SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列、（A2）i）与SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列具有45％以上的序列同一性的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、（A3）i）与由SEQIDNO:2、4或6中的任一所示的核苷酸序列的互补序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列、或（A4）i）在SEQIDNO:1、3或5中的任一所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加1个或多个氨基酸的氨基酸序列，并且ii）具有将2-羟基-4-（甲硫基）丁酸衍生物氧化转换成对应的2-氧代-4-（甲硫基）丁酸衍生物的能力的蛋白质的氨基酸序列。17.权利要求16记载的制备方法，其中α-羟基羧酸化合物是含硫α-羟基羧酸化合物，对应的α-氧代羧酸化合物是含硫α-氧代羧酸化合物。18.权利要求17记载的制备方法，其中：含硫α-羟基羧酸化合物是式（1）所示化合物：式中，R1表示...

【专利技术属性】
技术研发人员：朝子弘之，
申请(专利权)人：住友化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP