The invention relates to a method of loading with drugs or nanoparticles into specific target cell aptamers and cell penetrating peptide based model, including liposomes and liposome preparation two stearoyl phosphatidyl ethanolamine PEG modified cell penetrating peptide, preparation of encapsulated drug or nanoparticles and cell penetrating peptides the TAT is connected to the aptamer. The method by using liposome carrying drugs or nanoparticles, and the liposomes modified for the aptamer and cell die peptides, improve drug delivery and targeting therapy, provides an effective means for the diagnosis and treatment of disease, and has broad application prospects. The biocompatibility of the drug or nanoparticles was enhanced by liposome carrying drugs or nanoparticles, and the uptake rate of tumor cells by drugs or nanoparticles was enhanced. The method is simple and easy to modify. The materials are easy to obtain, easy to degrade in vivo and have good biocompatibility.
【技术实现步骤摘要】
基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法
本专利技术涉及一种利用脂质体载带药物,并利用核酸适体和细胞穿模肽提高对肿瘤细胞靶向性及药物摄取率的方法。本专利技术属于纳米生物医药材料领域。
技术介绍
生物体进化的细胞膜可有效阻止外源物质进入细胞,保证细胞内各种生物大分子有效行使功能。然而外源药物很难通过细胞膜直达病灶,在一定程度上,细胞膜成为对肿瘤细胞治疗的一道天然屏障。为了增强药物的治疗效果,一系列方法被用于增强细胞膜的通透性,如细胞穿模肽、脂肪酸、脂质体、聚合物或表面活性剂等。其中细胞穿模肽能够载带小分子药物、核酸、多肽进入细胞,具有很高的应用价值。然而细胞穿模肽稳定性不佳、缺乏细胞特异性,因而在一定程度上限制了其潜在的应用价值。尽管人们通过对细胞穿模肽进行各种修饰增加其对于肿瘤细胞的靶向性,但进一步增强其针对特定肿瘤细胞的靶向性,降低不良反应,可扩展其在肿瘤治疗的应用前景。核酸适体是一类可折叠成特定三维结构,并且对某些小分子具有很高亲和性并可与之结合的单链DNA或RNA短链。由于对某些靶标的特异性很高,核酸适体常常被用于作为诊断工具,具有广泛的应用价值及很高的应用前景。将核酸适体与细胞穿模肽共同应用于载药可以进一步增加药物作用的靶向性,增加其在临床应用的可能性。
技术实现思路
本专利技术针对现有问题的不足,提出一种基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法,利用脂质体载带药物或纳米颗粒,增强所载带物的生物相容性,同时利用核酸适体和细胞穿模肽提高载带物的靶向递送及细胞摄取率,加强对肿瘤细胞的杀伤能力。在本专利技术 ...
【技术保护点】
一种基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇修饰的细胞穿膜肽:聚乙二醇修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE‑PEG 2000‑Mal)与半胱氨酸修饰的细胞穿膜肽以一定比例溶解于含有三乙基胺的氯仿/甲醇溶液中,其v/v=2:1,黑暗条件下于25℃孵育24 hr;随后真空干燥除去多余的有机溶剂,沉淀物重新溶于氯仿中;采用孔径0.02 μm滤膜过滤溶液后,将溶液重新真空干燥除去有机溶剂,所得沉淀物于‑20℃保存待用;(2)制备包裹药物或纳米颗粒及细胞穿膜肽TAT的脂质体:称取一定质量的磷脂、胆固醇、DSPE‑PEG 2000修饰的细胞穿膜肽,将以上材料溶解于氯仿中,待搅拌均匀后,加入流通的氮气吹干,并于真空干燥除去残余的有机溶剂;待完全干燥后,加入含有药物等物质的磷酸盐缓冲溶液(PBS)使单层磷脂水化,磷酸盐缓冲溶液pH=7.4;采用带有一定孔径滤膜的挤压器挤压多次,即可得到包裹有待载带物的脂质体;(3)脂质体上连接核酸适体:PBS溶解的核酸适体DNA 在95℃孵育10 min,置于冰盒上孵育 ...
【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶标细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰的细胞穿膜肽:聚乙二醇修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Mal)与半胱氨酸修饰的细胞穿膜肽以一定比例溶解于含有三乙基胺的氯仿/甲醇溶液中,其v/v=2:1,黑暗条件下于25℃孵育24hr;随后真空干燥除去多余的有机溶剂,沉淀物重新溶于氯仿中;采用孔径0.02μm滤膜过滤溶液后,将溶液重新真空干燥除去有机溶剂,所得沉淀物于-20℃保存待用;(2)制备包裹药物或纳米颗粒及细胞穿膜肽TAT的脂质体:称取一定质量的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000修饰的细胞穿膜肽,将以上材料溶解于氯仿中,待搅拌均匀后,加入流通的氮气吹干,并于真空干燥除去残余的有机溶剂;待完全干燥后,加入含有药物等物质的磷酸盐缓冲溶液(PBS)使单层磷脂水化,磷酸盐缓冲溶液pH=7.4;采用带有一定孔径滤膜的挤压器挤压多次,即可得到包裹有待载带物的脂质体;(3)脂质体上连接核酸适体:PBS溶解的核酸适体DNA在95℃孵育10min,置于冰盒上孵育15min,使核酸适体形成三维结构,将已形成好结构的核酸适体与脂质体以一定比例混合,通过某种化学等作用将核酸适体连接到脂质体上,随后除去多余的核酸适体。2.根据权利要求1所述基于核酸适体和细胞穿模肽的载带药物或纳米颗粒进入特定靶...
【专利技术属性】
技术研发人员:何丹农,徐艳,王萍,金彩虹,
申请(专利权)人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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