一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒。本发明专利技术提供了一种用于提取脱氧核糖核酸的漂洗液I，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水。并提供了利用该漂洗液I提取食用油中脱氧核糖核酸方法，包括以下步骤：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，与漂洗液I混合后，经第二磁性分离弃除上清液，经漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。本发明专利技术提供的方法操作简单、缩短了操作时间，且不需要使用正己烷、苯酚和氯仿等高毒性的有机溶剂，操作更加安全。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒。本专利技术提供了一种用于提取脱氧核糖核酸的漂洗液I，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS、Tween20和水。并提供了利用该漂洗液I提取食用油中脱氧核糖核酸方法，包括以下步骤：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，与漂洗液I混合后，经第二磁性分离弃除上清液，经漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。本专利技术提供的方法操作简单、缩短了操作时间，且不需要使用正己烷、苯酚和氯仿等高毒性的有机溶剂，操作更加安全。【专利说明】一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法及其试剂盒
本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种食用油中脱氧核糖核酸的提取方法 及其试剂盒。
技术介绍
从古至今，植物源食用油一直是人类得以健康生活的保障，因此对其的安全性检 测越发重要。影响食用油安全性主要有两个方面，分别为：转基因食用油和地沟油。虽然 目前还缺乏科学依据证明转基因食用油对人类健康和环境安全性的危害，但近几年的调查 研究显示消费者对转基因作物制备食用油高度关注；另外，已经证实严重危害人体健康的 地沟油在加工过程中油脂发生了水解、氧化、缩合等一系列复杂的化学反应，产生了大量的 苯、萘、蒽、硝酸盐和亚硝酸盐等有害物质，其中有一些物质为强致癌物质，因此，食用地沟 油对人体健康危害极大。 2011年9月卫生部曾发布消息，全力组织科研攻关研究鉴别地沟油检验方法。卫 生部征集到7家技术机构研制的5种地沟油检测方法，分别从多环芳烃、胆固醇、电导率等 指标对地沟油进行检测，但采用这些方法特异性都不强。而对转基因食用油的检测更是无 法通过上述指标完成。因此，目前对转基因食用油和地沟油的检测多采用PCR方法，以检测 食品中是否含有特定的外源基因。然而，外源基因的检测很大程度上受限于对食用油中脱 氧核糖核酸提取的方法，而食用油生产加工过程通常需经过高温和高压处理，产品中的DNA 遭到严重破坏，DNA的质量大大降低，加大了食用油核酸提取及检测的难度。因此，开发有 效的从食用油中提取DNA的方法非常重要。 现有的提取食用油中DNA的方法通常需经乳化、萃取、抽提、沉淀、洗涤、溶解方可 得到DNA溶液，这些方法步骤繁多、操作复杂，且操作时间长，DNA提取过程中，每增加一个 步骤都会造成DNA的大量损失，且操作过程过长容易导致DNA的降解，因此，这些方法都不 易得到足够用于检测的DNA。另外，乳化过程需采用乳化剂，而乳化剂通常为正己烷、乙醇、 石油醚等有机溶剂；抽提通常采用苯酚或氯仿等有机溶剂；乳化和抽提中采用的这些有机 溶剂具有较大的毒性，操作过程中，安全性较低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种食用油中脱氧核糖核酸的提取 方法及其试剂盒。本专利技术提供的食用油中脱氧核糖核酸的提取方法采用磁珠直接结合食用 油中脱氧核糖核酸，结合了脱氧核糖核酸的磁珠经第一次漂洗、第二次漂洗、干燥、洗脱然 后得到脱氧核糖核酸的技术路线。食用油在磁珠结合脱氧核糖核酸之前没有进行乳化、消 解及萃取等步骤，从而减少了操作步骤，缩短了提取时间，避免了有机溶剂的使用。 本专利技术提供了一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤： 步骤1 :取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结 合有脱氧核糖核酸的磁珠； 步骤2 :取结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液， 第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液； 第一漂洗采用漂洗液I。 漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和Tween20,溶剂为水。 本专利技术提供的方法在提取油脂中的DNA时无需进行乳化、消解及萃取等步骤，克 服了传统方法中认为对油脂中DNA的提取必须先进行乳化的技术偏见，操作简单并缩短了 操作时间，因此，一方面减少了提取过程中因操作繁琐而导致的核酸损失，另一方面提高了 提取速度，使提取和检测工作可在2小时以内完成。 作为优选，磁珠表面由任何能够与脱氧核糖核酸非特异或者特异结合的材料制 成。 优选地，漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L?6mol/L。 优选地，漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L?50mmol/L。 优选地，漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L? 200mmol/L〇 优选地，漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0. 5%?4%。 作为优选，磁珠采用硅醇基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠； 优选地，磁珠采用硅醇基磁珠。 作为优选，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II 及漂洗液III。 优选地，漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。 更优选地，漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1?4) :1。 更优选地，漂洗液III为乙醇水溶液。 最优选地，漂洗液III中乙醇的体积分数为75% 优选地，洗脱采用ddH20。 本专利技术还提供了一种采用硅醇基磁珠提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，包括以 下步骤： 步骤1 :取硅醇基磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油， 获得结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠； 步骤2 :取结合有脱氧核糖核酸的硅醇基磁珠，经第一洗脱，第二磁性分离弃除上 清液，漂洗、干燥、溶解，即得脱氧核糖核酸溶液； 第一漂洗采用漂洗液I。 漂洗液I包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRIS和TWeen20溶剂为水。 由于硅醇基磁珠可直接进入PCR扩增体系，因此在提取过程中可省略洗脱步骤， 缩短了提取时间。 优选地，漂洗液I中异硫氰酸胍的含量以摩尔体积浓度计为4mol/L?6mol/L。 优选地，漂洗液I中柠檬酸钠的含量以摩尔体积浓度计为10mmol/L?50mmol/L。 优选地，漂洗液I中HEPES-TRIS的含量以摩尔体积浓度计为20mmol/L? 200mmol/L〇 优选地，漂洗液I中Tween20的含量以体积分数计为0. 5%?4%。 作为优选，提取食用油中脱氧核糖核酸的方法中的第二漂洗依次采用漂洗液II 及漂洗液III。 优选地，漂洗液II为采用漂洗液I与乙醇的混合物。 更优选地，漂洗液II中漂洗液I与乙醇的体积比为（1?4) :1。 更优选地，漂洗液III为乙醇水溶液。 最优选地，漂洗液III中乙醇的体积分数为75%。 作为优选，溶解采用ddH20。 本专利技术采用的磁珠可直接从油脂中抓捕吸附带有负电荷的核酸或含核酸类物质， 从而无需乳化步骤在油中就能够完成对核酸的结合，减少了乳化或者萃取造成的损失。 本专利技术还提供了一种用于本专利技术提供的食用油中脱氧核糖核酸提取方法的试剂 盒，包括磁珠悬液、漂洗液I、漂洗液II、漂洗液III和洗脱液； 其中，漂洗液I包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、HEPES-TRI本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取食用油中脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：取磁珠与食用油混合，结合脱氧核糖核酸后经第一磁性分离弃油，获得结合有脱氧核糖核酸的磁珠；步骤2：取所述结合有脱氧核糖核酸的磁珠，经第一漂洗，第二磁性分离弃除上清液，第二漂洗、干燥、洗脱、第三磁性分离，即得脱氧核糖核酸溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周裕程，尹珊珊，杨彩兰，杨文秀，万强，
申请(专利权)人：思洛生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51