本发明专利技术提供了一种水稻DNA的提取方法，包括：在水稻幼苗或叶片中加入氢氧化钠水溶液，沸水中煮20s～40s后加入盐酸水溶液和缓冲溶液，继续在沸水中煮1～3min，得到水稻DNA样品；所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液。本发明专利技术还提供了一种水稻DNA提取试剂盒，包括：氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液，所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液。本发明专利技术提供的方法提取的水稻DNA可用于PCR，简单、准确、快速、经济。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于DNA提取
，尤其设及一种用于提取水稻DNA的试剂盒和水稻 DNA的提取方法。
技术介绍
随着生物技术的不断发展，基于PCR技术为基础的分子标记已广泛应用用于杂交 种子纯度鉴定、亲缘关系的分析、分子标记辅助育种、基因定位W及转基因植株检测等。为 了应用PCR检测技术，人们需要从组织样品中提取DNA。然而，DNA提取是一项耗费人力、物 力的繁琐工作。尽管人们一直致力于改进DNA抽提方法的技术探讨，但目前应用的主要方 法仍然烦琐费时。因此，建立高效、快速、简便的用于PCR的基因型检测的模板DNA制备显 得非常重要。目前较为常用的提取水稻DNA方法为CTAB法，但其仍存在着如下缺陷：1 :需 要娠磨破碎组织样品；2 :需要离屯、、沉淀、抽提等过程；3 :需要使用氯仿、异戊醇等有毒化 学试剂。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于提取水稻DNA的试剂盒和水稻DNA的 提取方法，本专利技术提供的方法提取的水稻DNA可用于PCR，简单、准确、快速、经济。 本专利技术提供了一种水稻DNA的提取方法，包括： 阳0化]在水稻幼苗或叶片中加入氨氧化钢水溶液，沸水中煮20s~40s后加入盐酸水溶 液和缓冲溶液，继续在沸水中煮1~3min，得到水稻DNA样品；所述缓冲溶液包括Tris溶 液和IGEPAk630溶液。 本专利技术W水稻幼苗或叶片作为原料，所述水稻幼苗或叶片按照W下方法获得： 将水稻种子浸种1~2天，30~32°C发芽3~7天，优选32°C发芽3~7天。 发芽后，剪取1cm长的幼苗或叶片放入96孔PCR板中，每孔1根苗，可立即用于 DNA提取或胆存于-20°C冰箱中保存备用。 提取DNA时，向每孔加入氨氧化钢水溶液，在沸水中煮20~40s，优选煮30s，然后 加入盐酸水溶液和缓冲溶液，沸水中煮1~3min，优选2min，即可得到水稻DNA样品。 其中，所述氨氧化钢水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液的体积比为1~3:1~3:1~ 3,优选为2:2:1。所述氨氧化钢水溶液的浓度为250mmol/L ;所述盐酸水溶液的浓度为 250mmol/L ;所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAk630溶液，所述Tris溶液的浓度为 SOOmmol/l，所述IGEPAk630溶液的体积浓度为0. 25%。 使用96孔PCR板进行水稻DNA提取时，根据水浴锅的大小，依次可提1~4块PCR 板样品，即1X96~4X96个样品。提取时，每孔加入40微升浓度为250mmol/L的氨氧化 钢水溶液，沸水中煮30s，然后加入40微升浓度为250mmol/L的盐酸水溶液和20微升缓 冲溶液，其中，缓冲溶液包括500mmol/L、抑值为8. 0的化is溶液和体积浓度为0. 25%的 IGEPAk630溶液，在沸水中煮2min，获得水稻DNA样品。 按照本专利技术获得的水稻DM样品可用于PCR反应，其中，1微升DM样品溶液可 用于10微升PCR反应体积进行PCR反应。该DNA样品在-4°C冰箱中可保持1星期左右， 在-20°C冰箱中可保持1个月左右。本专利技术使用的提取试剂可在常溫下保存。 本专利技术还提供了一种水稻DNA提取试剂盒，包括：氨氧化钢水溶液、盐酸水溶液和 缓冲溶液，所述缓冲溶液包括化is溶液和IGEPAk630溶液。 其中，所述氨氧化钢水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液的体积比为1~3:1~3:1~ 3,优选为2:2:1。所述氨氧化钢水溶液的浓度为250mmol/L;所述盐酸水溶液的浓度为 250mmol/L ;所述缓冲溶液中，所述Tris溶液的浓度为500mmol/l，所述IGEPAk630溶液的 体积浓度为0.25%。 与现有技术相比，本专利技术提供的DNA提取方法具有如下优点： 1、简单：本专利技术提供的DNA提取方法简单，不需要使用高速冷冻离屯、机等贵重仪 器，不需要使用氯仿、异戊醇等有毒化学试剂，也不需要离屯、、沉淀、抽提等过程。整个DNA 提取只有2个简单的加样过程，一般的技术工人便可W进行操作。 2、准确：实验结果表明，采用本专利技术提供的提取水稻DNA方法与通用的CTAB提取 的DNA，PCR结果比较没有差别。 3、快速：本专利技术提供的提取水稻DNA用于PCR的方法快速简单，提取一批样品只需 2. 5分钟，一个训练工作人员在1小时内可完成10000份水稻幼苗的DNA提取，简便快捷，经 济实用。 4、经济：本专利技术提供的提取水稻DNA用于PCR的方法与通用的CTAB方法提取DNA 相比，每个样品的试提取成本降低1000倍（劳动力成本除外），详细比较见表1。 表1 CTAB法与本专利技术提供的DNA提取方法比较阳〇2引|5、本专利技术提供的提取水|稻DNA用于PCR的方1!去除可用于水稻幼苗和叶>^"外，可适 用于所有禾本科作物幼苗和叶片用于PCR的DNA的提取，同时可用于西瓜、油菜、辣椒等作 物幼苗和叶片用于PCR的DNA的提取。【附图说明】[002引图1为本专利技术实施例4提供的方法获得的水稻DNA PCR扩增结果图；图2为本专利技术实施例提供的水稻DNAPCR扩增结果图。【具体实施方式】下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例 仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范 围。 W下各实施例中，DNA提取试剂1为250mM NaoH。DNA提取试剂2为250mM肥1。 DNA 提取试剂 3 为 500mM his (P册.0)和 0. 25% (V/V) IGEPAk630。 阳〇27] 实施例1 W袁隆平院±为组长的专家组用威20A、威优46、密阳46,培矮64S、两优培九、 R9311等6个材料，分别取上述种子浸泡2天后，32当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于提取水稻DNA的试剂盒，包括：氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液，所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAL‑630溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：詹庆才，周小毛，彭伟正，陈静萍，
申请(专利权)人：湖南省农业生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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