一种全血DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术提供了一种全血DNA提取试剂盒及提取方法，其中全血DNA提取试剂盒包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液，以及本发明专利技术的提取方法具有提取纯化步骤简单、操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高的特点。通过简单的操作步骤得到高纯度、完整的基因组DNA，方便研究人员进行后续的实验。

【技术实现步骤摘要】
一种全血DNA提取试剂盒及提取方法
本专利技术涉及DNA提取
，具体涉及全血DNA提取试剂盒及其提取方法。
技术介绍
随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析(GWAS)、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA。由于血液样本取材方便，所含基因组DNA丰富可靠，因此上述许多研究均以血液作为样本提取完整的基因组DNA。提取纯化得到的基因组DNA浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的基因组DNA提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法和磁珠法。这些方法各有优缺点，但都应考虑以下原则：防止和抑制DNase对DNA的降解；尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏，保持DNA分子的完整；排除其他核酸分子的污染；排除有机溶剂和金属离子的污染；将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净。基于纳米磁珠的DNA提取技术是利用亲水性纳米磁珠特异性地吸附样品溶液的DNA分子，在外加磁场的作用将吸附的DNA-磁珠复合物从样品溶液中分离，通过洗涤液洗涤去除溶液中的蛋白和盐离子，最后在仅留有特异吸附DNA的磁珠中加入洗脱液，将DNA释放于洗脱液中。磁珠法提取基因组DNA与上述其它方法相比，不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。
技术实现思路
为了解决上述不足的缺陷，本专利技术提供了一种全血DNA提取试剂盒及提取方法，提取纯化步骤少，操作简便，整个过程不涉及有毒试剂，安全便捷，所得基因组DNA含量高，完整度好，纯度高，可直接用于后续检测。本专利技术提供了一种全血DNA提取试剂盒，包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。上述的试剂盒，其中，所述裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。上述的试剂盒，其中，所述裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度1-5M的碘化锂、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。上述的试剂盒，其中，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。上述的试剂盒，其中，所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。上述的试剂盒，其中，所述洗涤液B包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。上述的试剂盒，其中，所述洗脱液包含pH为7.0-9.0浓度5-20mM的Tris-HCL和pH8.0-9.0浓度0.5-3mM的EDTA二钠。本专利技术的另一面，本专利技术还提供了一种全血DNA提取试剂盒的提取方法，包括以下步骤：步骤S1：取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向该离心管中加入100-500ul裂解液和50-200mg/ml的纳米磁珠10-30ul，震荡混匀1min，室温静置10min；步骤S2：将步骤S1中的离心管置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；步骤S3：使用无菌移液枪头向步骤S2离心管中加入500-800ul洗涤液A，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液；步骤S4：使用无菌移液枪头向步骤S3离心管中加入500-800ul洗涤液B，将该离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸弃上清溶液，室温开盖干燥10-20min直至管内无液体残留；步骤S5：使用无菌移液枪头向步骤S4离心管中加入100-200ul洗脱液，65℃水浴5-10min；步骤S6：将步骤S5离心管震荡混匀1min，置于磁力架上30s，待纳米磁珠完全吸至管壁之后，使用无菌移液枪头吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。本专利技术具有以下优点：提取纯化步骤简单、操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高。通过简单的操作步骤得到高纯度、完整的基因组DNA，方便研究人员进行后续的实验。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术及其特征、外形和优点将会变得更明显。在全部附图中相同的标记指示相同的部分。并未刻意按照比例绘制附图，重点在于示出本专利技术的主旨。图1为本专利技术的全血DNA提取方法与QIAampDNAMiniKit和上海生工磁珠法基因组DNA抽提试剂盒(血液)提取方法的基因组DNA完整度比较示意图。图2是本专利技术的全血DNA提取方法与QIAampDNAMiniKit和上海生工磁珠法基因组DNA抽提试剂盒(血液)提取方法的基因组DNA中β-actin荧光PCRCt值比较示意图。具体实施方式在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本专利技术更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本专利技术可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本专利技术发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。为了彻底理解本专利技术，将在下列的描述中提出详细的步骤以及详细的结构，以便阐释本专利技术的技术方案。本专利技术的较佳实施例详细描述如下，然而除了这些详细描述外，本专利技术还可以具有其他实施方式。本专利技术提供了一种全血DNA提取试剂盒，包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，裂解液包括异硫氰酸胍、柠檬酸三钠、Tween20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，洗涤液B包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。在本专利技术一优选但非限制的实施例中，洗脱液包含pH为7.0-9.0浓度5-20mM的Tris-HCL和pH8.0-9.0浓度0.5-3mM的EDTA二钠。本专利技术的另一面一种基因组DNA提取试剂盒的提取方法，包括以下步骤：步骤S1：取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液枪头向该离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。

【技术特征摘要】
1.一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。2.如权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇，所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇，所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。3.如权利要求1-2所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液pH值为4.0-7.0，包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度1-5M的碘化锂、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1％-5％Tween20。4.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4，直径为200-2000nm，浓度为50-200mg/ml。5.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20％-50％的无水乙醇。6.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液B包含pH7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mMNaCL和50％-80％的无水乙醇。7.如权利要求3所述的一种全血DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈春峰，郜恒骏，沈维祥，张小燕，牟晓庆，
申请(专利权)人：上海芯超生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31