一种磷酸修饰荧光团的核苷酸分子测序方法技术

本发明专利技术涉及一种多核苷酸测序方法，更具体的说，是一种磷酸修饰有荧光团的混合核苷酸分子进行测序的方法。更进一步，本发明专利技术公开了将荧光切换测序和混合核苷酸分子测序联合使用的方法。其特殊的信号获得方式和获得效率，使得其在基因测序方向有很大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种磷酸修饰荧光团的核苷酸分子测序方法
本专利技术涉及一种高通量测序方法，属于基因测序领域。背景介绍高通量测序仪是近几年高速发展的技术。高通量测序，相较于传统桑格测序，最大的优势是可以同时读出海量的序列信息。虽然准确度不如传统测序方法，但由于海量数据分析，便可得出超出序列本身的信息，如基因表达量、拷贝数变异。当今主流测序仪均使用SBS(sequencingbysynthesis边合成边测序)方法，如solexa/illumina、454、iontorrent等。这些测序仪的结构相似，都包括流体系统，光学系统，和芯片系统。测序反应在芯片内发生。测序过程也很相似，都包括：将反应液通入芯片，发生SBS反应，采集信号，冲洗，进行下一轮。这样的周期性过程。随着周期的增多，测出连续的单碱基非兼并序列信息(如ACTGACTG)。然而，高通量测序仪无法彻底消除测序错误。测序错误可能来源于：反应偶然错误或累积错误，信号采集错误，信号矫正带来的误差等等。现有测序仪中，这些化学或光学、软件上带来的错误，或成为噪声，在单个读出位点无法被识别。只能通过深度测序，利用同一序列在不同位点的多次读取进行消除。更本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用核苷酸底物分子进行测序的方法，其特征在于：利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有荧光团的核苷酸底物分子进行测序；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组包括两个反应液，每个反应液包含两种包含不同碱基的核苷酸；其中一个反应液中的核苷酸可以和待测核苷酸序列上的两种碱基互补，另一个反应液中的核苷酸可以和待测核酸序列上的另外两种碱基互补；首先，将待测的核苷酸序列片段固定，通入一套反应液组中的第一个反应液；检测、记录荧光信息；然后通入同一套反应液组中的第二个反应液；检测、记录荧光信息；两个反应液循环加入，通过荧光信息获得待测核苷酸底物的编码信息。

【技术特征摘要】
1.一种利用核苷酸底物分子进行测序的方法，其特征在于：利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有荧光团的核苷酸底物分子进行测序；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组包括两个反应液，每个反应液包含两种包含不同碱基的核苷酸；其中一个反应液中的核苷酸可以和待测核苷酸序列上的两种碱基互补，另一个反应液中的核苷酸可以和待测核酸序列上的另外两种碱基互补；首先，将待测的核苷酸序列片段固定，通入一套反应液组中的第一个反应液；检测、记录荧光信息；然后通入同一套反应液组中的第二个反应液；检测、记录荧光信息；两个反应液循环加入，通过荧光信息获得待测核苷酸底物的编码信息。2.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于，所述的每个反应液包含两种不同碱基的核苷酸，可以用两种不同的荧光团标记，也可以用相同的的荧光团标记。3.根据前面任一项权利要求所述的方法，其特征在于，利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序；所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号相比测序反应前有明显改变。4.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号相比测序反应前有明显增强(或者说上升)。5.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，其特征在于，利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序；所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号强度相比测序反应前有明显上升；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组包括两个反应液，每个反应液包含两种不同碱基的核苷酸底物分子；其中一个反应液中的核苷酸底物分子可以和待测核苷酸序列上的两种碱基互补，另一个反应液中的核苷酸底物分子可以和待测核酸序列上的另外两种碱基互补；首先，将待测的核苷酸序列片段固定在反应室中，然后通入一套反应液组中的一个反应液；使用酶将具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物上面的荧光团释放，从而导致荧光切换；然后通入同一套反应液组中的第二个反应液；使用酶将具有荧光切换性质的荧光团的核苷酸底物上面的荧光团释放，从而导致荧光切换；两个反应液循环加入，通过荧光信息获得待测核苷酸底物的编码信息。6.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，其特征在于，利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序；所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号强度相比测序反应前有明显上升；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组至少包括两个反应液，每个反应液包含A、G、C、T核苷酸分子中的至少一种，或者每个反应液包含A、G、C、U核苷酸分子中的至少一种；首先，将待测的核苷酸序列片段固定在反应室中，通入一套反应液组中的一个反应液；检测、记录荧光信息；每次通入一个反应液，将同一反应液组中的其它反应液依次通入，并且每次检测、记录荧光信息；其中，所述反应液组中，至少有一个反应液包含两种或者三种不同的核苷酸分子。7.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，其特征在于，利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序；所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号强度相比测序反应前有明显上升；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组至少包括两个反应液，每个反应液包含A、G、C、T核苷酸分子中的任意一种，或者每个反应液包含A、G、C、U核苷酸分子中的任意一种；首先，将待测的核苷酸序列片段固定在反应室中，通入一套反应液组中的一个反应液；检测、记录荧光信息；每次通入一个反应液，将同一反应液组中的其它反应液依次通入，并且每次检测、记录荧光信息。8.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，其特征在于，利用5’多磷酸末端或中间磷酸修饰有具有荧光切换...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄岩谊，陈子天，段海峰，
申请(专利权)人：北京大学，赛纳生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11