本发明专利技术提供由选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物的1种以上的化合物构成的由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂以及由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法，该筛选方法包含：在待测物质的存在下及非存在下将HMGB蛋白与标记核酸进行混合的混合步骤；对与标记核酸结合的HMGB蛋白进行定量的定量步骤；当在待测物质的存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量少于在待测物质的非存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量时，判定该待测物质为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂、当在待测物质的存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量多于在待测物质的非存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量时、判定该待测物质为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的促进剂的判定步骤。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂及由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法。
技术介绍
在免疫应答及其控制中，识别自己和非己是其根本。固有免疫体系及获得性免疫(适应性免疫)体系在根据其各自特有的机制而承担该识别的同时，确立并维持不会对自己进行应答的结构、即所谓的免疫耐受。已知固有免疫应答的激活与获得性免疫应答的诱导也有关系，因此可以认为固有免疫应答的抑制对获得性免疫应答的抑制也有效。已知在获得性免疫体系中，在构建表达随机的抗原受体的淋巴细胞库后，绝大多数的自身反应性淋巴细胞被中枢性耐受机制排除，还残留在末梢的自身反应性淋巴细胞被外周性耐受机制抑制。利用获得性免疫体系进行的抗原识别以利用淋巴细胞的抗原受体识别特异性分子结构为特征，但在固有免疫体系中，是对病原体等所持有的分子模式进行识别，以Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)为代表，已知有很多的固有免疫激活受体。特别是，由核酸引起的固有免疫激活对于病毒等病原体的排除是很重要的，同时与各种免疫病症的发病或恶化也有关 ，因此备受关注。但是，固有免疫体系中的核酸的识别机制中还有很多不清楚的地方，作为承担由核酸所激活的免疫应答的分子群，鉴定了 Toll样受体(Toll-likereceptor, TLR) 3、TLR7、TLR9、RIG-1 样受体(RIG-1-like receptor), DAI, AIM2 等受体分子群，但其全貌仍不清楚(例如参照非专利文献I 3)。已知HMGB (high-mobility group box,高迁移率族)蛋白中存在 HMGBl、HMGB2 及HMGB3。这些HMGB蛋白多存在于核内，认为其与染色质结构或转录的控制有关。另外，已知其还存在于细胞质或细胞外。专利文献I中记载了阻碍分泌至细胞外的HMGBl蛋白与细胞表面的糖化终末产物受体(RAGE )结合的合成双链核酸或核酸类似物分子。专利文献2中记载了阻碍分泌至细胞外的HMGBl蛋白与RAGE的相互作用的HMGBl拮抗剂。非专利文献4中记载了无碱基硫代磷酸酯脱氧核糖均聚体对TLR9及TLR7具有很高的亲和性，它们作为TLR的拮抗剂发挥作用。非专利文献5中记载了具有5’ -TCCATGACGTTCCTGATGCT-3’(序列号37)的碱基序列的硫代磷酸寡核苷酸对小鼠的投予诱导了 IFN (干扰素)-Y应答，而具有5’ -TCCATGAGCTTCCTGATGCT-3’(序列号38)的碱基序列的硫代磷酸寡核苷酸不会引起这种应答。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特表2008-504335号公报专利文献2:日本特表2009-517404号公报非专利文献非专利文献1:Kawai T.et al, Nat.Rev.Tmmunol 7:131-137,2006.非专利文献2:Yoneyama et al, J.Biol.Chem 282:15315-15318，2007.非专利文献3:Burckstummer T.et al, Nat.Tmmunol.10:266-272, 2009.非专利文献4:Haas T.et al, Immunity, 28:315-323, 2008.非专利文献5 =Cowdery JS.et al, J.1mmunol.156:4570-4575,1996.
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的在于提供由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂及由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法。用于解决技术问题的手段本专利技术提供一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂，其由选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I种以上的化合物构成，且通过与HMGB蛋白结合来抑制由HMGB蛋白介导的免疫应答激活。本专利技术还提供一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制方法，其包含对生物体投予选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I种以上的化合物的工序。本专利技术还提供一种选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I种以上的化合物的用于作为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂的用途。本专利技术还提供一种选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I种以上的化合物在由HMGB蛋白介导的免疫应 答激活的抑制剂中的应用。专利技术人等明确了对于由核酸介导的免疫应答的激活，HMGB蛋白是必需的。即，专利技术人等明确了由核酸介导的免疫应答的激活由HMGB蛋白介导。专利技术人等还明确了上述化合物通过与HMGB蛋白牢固地结合，强有力地抑制了由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活。因此，上述化合物可以作为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂来利用。上述抑制剂不限于抑制由核酸介导的免疫应答的激活，还抑制由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活。上述化合物优选为不含非甲基化CG序列且长度为5 40个碱基的硫代磷酸寡核苷酸，更优选为下述的硫代磷酸寡核苷酸:(I)由序列号40所记载的碱基序列构成，或者(2)由下述碱基序列构成:其是在序列号40所记载的碱基序列中缺失、取代或添加有I个或多个喊基的喊基序列，且是具有针对HMGB蛋白的结合能力的喊基序列。这些硫代磷酸寡核苷酸可作为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂来利用。上述化合物还可以为硫代磷酸寡核苷酸的衍生物，该衍生物可以为无碱基硫代磷酸酯脱氧核糖均聚体(以下有时也称作“PS”)。PS是具有从硫代磷酸寡核苷酸除去了碱基部分的结构的化合物。如实施例所示，PS可作为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂来利用。本专利技术的抑制剂通过在细胞内阻碍激活免疫应答的核酸与HMGB蛋白的结合来强有力地抑制由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活。即，本专利技术的抑制剂基于专利技术人等此次首次明确的机制而抑制细胞内的由HMGB蛋白所介导的免疫应答的激活。作为由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活，可例示出抗原特异性的获得性免疫体系、多发性硬化症、由死细胞导致的过剩的免疫应答、器官移植排斥反应、自身免疫疾病、炎症性肠病、过敏、败血症、由炎症导致的肿瘤增殖、由含核酸的病原体所引起的炎症性疾病等。通过投予本专利技术的抑制剂，可以在人类或动物的生物体内预防或治疗(改善)这些症状。本专利技术还提供一种由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活的抑制用组合物，其含有上述抑制剂及药学上可容许的载体。本专利技术还提供一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法，其包含:混合步骤，其中，在待测物质的存在下及非存在下将HMGB蛋白和标记核酸进行混合； 定量步骤,其中,对与标记核酸结合的HMGB蛋白进行定量；以及判定步骤，其中，当在待测物质的存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量少于在待测物质的非存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量时，判定该待测物质为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂，当在待测物质的存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量多于在待测物质的非存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量时，判定该待测物质为由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的促进剂。本专利技术还提供一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法，其包含:放置(孵育)步骤，其中，在待测物质的存在下及非存在下将经固相化的HMGB蛋白进行放置；标记核酸接触步骤，其中，使标记核酸与本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.17 JP 2010-209587;2011.06.22 JP 2011-138821.一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂，其由选自硫代磷酸寡核苷酸及其衍生物中的I种以上的化合物构成。2.根据权利要求1所述的抑制剂，其中，所述化合物是不含非甲基化CG序列且长度为5 100个碱基的硫代磷酸寡核苷酸。3.根据权利要求2所述的抑制剂，其中，所述化合物由序列号40所记载的碱基序列构成，或者由下述碱基序列构成:其是在序列号40所记载的碱基序列中缺失、取代或添加有I个或多个碱基的碱基序列，且是具有针对HMGB蛋白的结合能力的碱基序列。4.根据权利要求1所述的抑制剂，其中，所述化合物是硫代磷酸寡核苷酸的衍生物，该衍生物为无碱基硫代磷酸酯脱氧核糖均聚体。5.根据权利要求1 4中任一项所述的抑制剂，其在细胞内阻碍激活免疫应答的核酸与HMGB蛋白的结合。6.根据权利要求1 5中任一项所述的抑制剂，其中，由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活选自:抗原特异性的获得性免疫体系、多发性硬化症、由死细胞导致的过剩的免疫应答、器官移植排斥反应、自身免疫疾病、炎症性肠病、过敏、败血症、由炎症导致的肿瘤增殖以及由含核酸的病原体所引起的炎症性疾病。7.一种由HMGB蛋白介导的免疫应答的激活的抑制用组合物，其含有权利要求1 6中任一项所述的抑制剂及药学上可容许的载体。8.一种由HMGB蛋白介导的免疫应答激活的抑制剂或促进剂的筛选方法，其包含: 混合步骤，其中，在待测物质的存在下及非存在下将HMGB蛋白与标记核酸进行混合； 定量步骤，其中， 对与标记核酸结合的HMGB蛋白进行定量；以及 判定步骤，其中，当在待测物质的存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量少于在待测物质的非存在下与标记核酸结合的HMGB蛋白的量时，判定...
【专利技术属性】
技术研发人员：谷口维绍，柳井秀元，
申请(专利权)人：独立行政法人科学技术振兴机构，
类型：
国别省市：
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