利用经化学修饰的寡核苷酸处理伤口愈合的方法技术

本发明专利技术涉及具有改进的组织和细胞摄取特性的RNAi构建体，以及在皮肤和纤维化应用中使用这些化合物的方法。本发明专利技术的一些方面提供了用于预防性处理伤口以减少瘢痕形成的核酸分子。在本文中，证明了预防性给予的特定核酸分子RXI‑109(靶向结缔组织生长因子(CTGF))减少了伤口愈合期间的瘢痕形成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关领域本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2013年12月4日提交的题为“METHODS FOR EARLY TREATMENT OF WOUND HEALING UTILIZING CHEMICALLY MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES”的美国临时申请序列No.US 61/911,991，2013年12月4日提交的题为“METHODS FOR ACCELERATING WOUND HEALING UTILIZING CHEMICALLY MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES”的美国临时申请序列No.61/911,993，以及2014年9月11日提交的题为“METHODS FOR TREATMENT OF WOUND HEALING UTILIZING CHEMICALLY MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES”美国临时申请序列No.62/049,299的权益，其各自的全部内容通过引用整体并入本文。
本专利技术涉及减少伤口愈合期间的纤维化。本专利技术更具体地涉及具有改进的体内递送特性的核酸分子及其用于减少皮肤瘢痕形成的用途。
技术介绍
互补性寡核苷酸序列是有前景的治疗剂以及阐明基因功能的有用研究工具。然而，现有技术的寡核苷酸分子具有可能阻碍其临床开发的多个问题，并且在体内使用这样的组合物时，经常难以取得预期的对基因表达(包括蛋白质合成)的有效抑制。一个主要问题是将这些化合物递送至细胞和组织。常规19-29个碱基长的双链RNAi化合物形成约1.5乘10-15nm大小的高度带负电荷的刚性螺旋。这种棒状分子无法通过细胞膜，导致体外和体内二者情况下具有非常有限的效力。因此，所有常规RNAi化合物需要一些类型的递送载剂以促进其组织分布和细胞摄取。这被认为是RNAi技术的主要限制。之前已经尝试对寡核苷酸进行化学修饰以改善其细胞摄取特性。一种这样的修饰是将胆固醇分子连接到寡核苷酸。Letsinger等在1989年首次报道了这种方法。随后，ISIS Pharmaceuticals，Inc.(Carlsbad，CA)报道了将胆固醇分子连接到寡核苷酸的更加先进的技术(Manoharan，1992)。随着九十年代末siRNA的发现，在这些分子上尝试了类似方式的修饰以增强其递送特性。文献中出现了将胆固醇分子缀合到稍微修饰的(Soutschek，2004)和大量修饰的(Wolfrum，200)siRNA上。Yamada等，2008也报道了改进的接头化学物质的使用，其进一步改善了胆固醇介导的siRNA摄取。尽管有这些努力，但是在生物流体的存在下，这些类型化合物的摄取似乎受到抑制，导致体内基因沉默中非常有限的效力，限制了这些化合物在临床环境中的适用性。
技术实现思路
本专利技术的一些方面提供了用于预防性处理伤口以减少瘢痕形成的核酸分子。在本文中，证明了预防性给予的特定核酸分子RXI-109(靶向结缔组织生长因子(CTGF))减少了伤口愈合期间的瘢痕形成。本专利技术的每种限制都可以涵盖本专利技术的多个实施方案。因此，预期涉及任何一个元素或元素的组合的本专利技术的每种限制都包含在本专利技术的各个方面中。本专利技术的应用不限于在下文的说明书中给出的或在附图中示出的组件之布置和构造的细节。本专利技术可以是其他实施方案并且以多种方式实践或实施。本专利技术的一些方面包括减少伤口愈合期间的瘢痕形成的方法，其包括向人对象施用治疗有效量的用于减少瘢痕形成的核酸分子，其中所述核酸分子在受伤前72小时至受伤后24小时之间施用。在一些实施方案中，核酸是经化学修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，瘢痕形成是皮肤瘢痕形成。在另一些实施方案中，瘢痕形成是眼瘢痕形成。在一些实施方案中，所述核酸分子针对编码选自以下的蛋白质的基因：转化生长因子β(TGF β1，TGF β2)、骨桥蛋白、结缔组织生长因子(CTGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α，HIF1α)、胶原蛋白I和/或III、脯氨酰4-羟化酶(P4H)、前胶原C-蛋白酶(PCP)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、整联蛋白(Integrin)、间隙连接蛋白(Connexin)、组胺H1受体、组织型转谷氨酰胺酶、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、HoxB13、VEGF、IL-6、SMAD蛋白、核糖体蛋白S6激酶(RSP6)和环加氧酶-2(COX-2)。在某些实施方案中，核酸分子针对CTGF。在一些实施方案中，核酸分子是单链核酸分子。在另一些实施方案中，核酸分子是双链核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子通过RNAi作用机制工作。在一些实施方案中，核酸分子是RXI-109，其包含有义链序列：G.mC.A.mC.mC.mU.mU.mU.mC.mU.A*mG*mA.TEG-Chl(SEQ ID NO：1)和反义链序列：P.mU.fC.fU.A.G.mA.A.mA.G.G.fU.G.mC*A*A*A*mC*A*U(SEQ ID NO：2)。在一些实施方案中，核酸分子是针对CTGF的siRNA。在某些实施方案中，核酸分子是针对CTGF的反义寡核苷酸(ASO)。在一些实施方案中，治疗有效量为每厘米伤口0.5mg至20mg。在一些实施方案中，核酸分子在配制成用于向皮肤递送的组合物中。在某些实施方案中，核酸分子在配制成用于表面递送的组合物中。在一些实施方案中，核酸分子在配制成用于皮内注射的组合物中。在一些实施方案中，核酸分子在配制成用于向眼递送的组合物中。在一些实施方案中，核酸分子在配制成用于向眼表面递送的组合物中。在某些实施方案中，核酸分子在配制成用于玻璃体内注射或视网膜下注射的组合物中。在一些实施方案中，方法还包括至少第二核酸分子，其中所述第二核酸分子与所述核酸分子针对不同基因。在一些实施方案中，核酸分子由核苷酸构成，并且至少30％的核苷酸是化学修饰的。在一些实施方案中，核酸分子具有至少一个经修饰骨架连接(linkage)，并且至少2个骨架连接包含硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，核酸分子由核苷酸构成，并且至少一个核苷酸包含选自OMe、2’MOE(甲氧基)和2’氟代的2’化学修饰。在一些实施方案中，方法还包括在受伤后24小时以后施用至少第二剂量的所述核酸分子。在一些实施方案中，方法还包括在受伤后24小时以后再施用至少两个剂量的所述核酸分子。在一些实施方案中，伤口包括皮肤移植。在一些实施方案中，将所述核酸分子施用到移植物供者部位。在一些实施方案中，将所述核酸分子施用到移植物接受者部位。本专利技术的一些方法涉及减少伤口愈合期间的瘢痕形成的方法，其包括向人对象施用治疗有效量的用于减少瘢痕形成的核酸分子，其中所述核酸分子在受伤后7至30天之间施用。在一些实施方案中，方法还包括1至5个额外剂量。在一些实施方案中，每周施用额外剂量。在一些实施方案中，每两周施用额外剂量。在一些实施方案中，每月施用额外剂量。在一些实施方案中，以每周、每两周和/或每月的任意组合施用额外剂量。在一些实施方案中，治疗有效量为每厘米伤口0.1mg至20mg。在一些实施方案中，核酸分子针对编码选自以下的蛋白质的基因：转化生长因子β(TG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减少伤口愈合期间的瘢痕形成的方法，其包括向人对象施用治疗有效量的用于减少瘢痕形成的核酸分子，其中所述核酸分子在受伤前72小时至受伤后24小时之间施用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.04 US 61/911,991;2013.12.04 US 61/911,993;1.一种减少伤口愈合期间的瘢痕形成的方法，其包括向人对象施用治疗有效量的用于减少瘢痕形成的核酸分子，其中所述核酸分子在受伤前72小时至受伤后24小时之间施用。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸是经化学修饰的寡核苷酸。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述瘢痕形成是皮肤瘢痕形成。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述瘢痕形成是眼瘢痕形成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述核酸分子针对编码选自以下蛋白质的基因：转化生长因子β(TGF β1，TGF β2)、骨桥蛋白、结缔组织生长因子(CTGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、低氧诱导因子-1α(HIF1α)、胶原蛋白I和/或III、脯氨酰4-羟化酶(P4H)、前胶原C-蛋白酶(PCP)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、整联蛋白、间隙连接蛋白、组胺H1受体、组织型转谷氨酰胺酶、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、HoxB13、VEGF、IL-6、SMAD蛋白、核糖体蛋白S6激酶(RSP6)和环加氧酶-2(COX-2)。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述核酸分子针对CTGF。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是单链核酸分子。8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是双链核酸分子。9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子通过RNAi作用机制工作。10.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是RXI-109，其包含有义链序列：G.mC.A.mC.mC.mU.mU.mU.mC.mU.A*mG*mA.TEG-Chl(SEQ ID NO：1)和反义链序列：P.mU.fC.fU.A.G.mA.A.mA.G.G.fU.G.mC*A*A*A*mC*A*U(SEQ ID NO：2)。11.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是针对CTGF的siRNA。12.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是针对CTGF的反义寡核苷酸(ASO)。13.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量为每厘米伤口0.5mg至20mg。14.根据权利要求1至3或5至13中任一项所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于向皮肤递送的组合物中。15.根据权利要求1至3或5至13中任一项所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于表面递送的组合物中。16.根据权利要求1至3或5至13中任一项所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于皮内注射的组合物中。17.根据权利要求1至2或4至13中任一项所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于向眼递送的组合物中。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于表面递送的组合物中。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述核酸分子在配制成用于玻璃体内注射或视网膜下注射的组合物中。20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其还包括至少第二核酸分子，其中所述第二核酸分子与所述核酸分子针对不同基因。21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述核酸分子由核苷酸构成，并且至少30％的核苷酸是经化学修饰的。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述核酸分子具有至少一个经修饰骨架连接，并且至少2个骨架连接包含硫代磷酸酯连接。23.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述核酸分子由核苷酸构成，并且至少一个核苷酸包含选自OMe、2’MOE(甲氧基)和2’氟代的2’化学修饰。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其还包括在受伤后24小时以后施用至少第二剂量的所述核酸分子。25.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其还包括在受伤后24小时以后再施用至少两个剂量的所述核酸分子。26.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述伤口包括皮肤移植。27.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中将所述核酸分子施用到移植物供者部位。28.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中将所述核酸分子施用到移植物接受者部位。29.一种减少伤口愈合期间的瘢痕形成的方法，其包括向人对象施用治疗有效量的用于减少瘢痕形成的核酸分子，其中所述核酸分子在受伤后7天至30天之间施用。30.根据权利要求29所述的方法，其还包括1至5个额外剂量。31.根据权利要求30所述的方法，其中每周施用所述额外剂量。32.根据权利要求30所述的方法，其中每两周施用所述额外剂量。33.根据权利要求30所述的方法，其中每月施用所述额外剂量。34.根据权利要求30所述的方法，其中以每周、每两周和/或每月的任意组合施用所述额外剂量。35.根据权利要求1至12或14至34中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量为每厘米伤口0.1mg至20mg。36.根据权利要求29至35中任一项所述的方法，其中所述核酸分子针对编码选自以下蛋白质的基因：转化生长因子β(TGF β1，T...

【专利技术属性】
技术研发人员：格拉尔德·考文贝赫，帕梅拉·A·帕夫科，林恩·利伯蒂娜，卡伦·G·布洛克，詹姆斯·卡迪亚，
申请(专利权)人：阿克赛医药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US