基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开一种基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用。通过基因重组得到的RMP16，与天然TNF-α相比，在血液中具有更高的稳定性和生理活性，可显著抑制前列腺癌Du145、淋巴瘤Raji、白血病K562、宫颈癌HeLa、乳腺癌MCF-7等肿瘤细胞的生长，对DU145的抑制效果尤为突出，且可抑制显著Du145细胞移植瘤的生长，其药效学作用与雌莫司汀相似，Du145细胞移植瘤裸鼠，结果显示，重组多肽RMP16的毒副作用明显小于雌莫司汀，无明显的毒副作用表现。该基因重组TNF-α衍生物RMP16可应用于制备具有如下功能的药物：治疗前列腺癌、淋巴瘤、慢性髓原白血病、宫颈癌、乳腺癌等肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用
本专利技术属于基因工程
，特别涉及一种基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用。
技术介绍
TNF-α是较早发现的、研究最为深入的肿瘤坏死因子家族成员之一，抗肿瘤作用强，参与多种生理病理过程的调节。人TNF-α为单拷贝基因，定位在第六号染色体上(6P12-13)，与MHC基因群紧密连锁；TNF-α的cDNA大小约2.76kb，由4个外显子和3个内含子组成。人TNF-α前体由233个氨基酸残基组成，包括由第1、2号外显子编码的76个氨基酸残基的信号肽；切除信号肽后形成非糖基化的成熟的人TNF-α，为157个氨基酸残基，相对分子量为17kDa.。其中第69位和101位为两个半胱氨酸，可形成分子内二硫键，对维持其空间结构有重要意义。TNF-α作为一种蛋白类因子，其生物学活性主要是通过和细胞膜上特异受体结合实现的。TNF-α有两种受体，一种是存在于大部分细胞表面的分子量为55-60kDa.的肿瘤坏死因子受体Ⅰ(tumornecrosisfactorreceptorⅠ，TNFRⅠ)，另一种是主要存在于造血细胞表面的分子量为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因重组TNF‑α衍生物RMP16，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种基因重组TNF-α衍生物RMP16，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的基因重组TNF-α衍生物RMP16，其特征在于：编码所述的基因重组TNF-α衍生物RMP16的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.权利要求1或2所述的基因重组TNF-α衍生物RMP16的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)设计并合成RMP16基因：采用3条引物两步法合成RMP16基因：引物F1：5'-GGTGGTCATATGTGGCAGCGCCCGAGCAGCTGGATTGAAGGTCGCCTG-3'；引物F2：5'-GCTCACCGCAATGCGGCTAATGGTATGGGTCAGCAGGCGACCTTC-3'；引物F3：5'-CCACCATGCTCTTCCGCACAGCAGATTCACTTTGGTCTGATAGCTCACCGCAAT-3'；其中，CATATG为NdeⅠ酶切位点，GCTCTTCCGCA为SapⅠ酶切位点；GGTGGT和CCACCAT为保护碱基；首先将引物F1和引物F2进行链延伸反应，然后以其产物为DNA模板，以F1和F3为引物，PCR反应制得RMP16基因；(2)构建重组载体pTXB1-RMP16：用Ndel酶和Sapl酶分别对质粒pTXB1和步骤(1)制得的RMP16基因进行双酶切，再将双酶切后的RMP16基因和双酶切后的质粒pTXB1连接，得到重组载体pTXB1-RMP16；(3)制备表达工程菌pTXB1-RMP16/ER2566：用重组载体pTXB1-RMP16转化表达宿主菌大肠杆菌E.coliStrainER2566，得到表达工程菌pTXB1-RMP16/ER2566；(4)表达和纯化：①诱导表达工程菌pTXB1-RMP16L/ER2566表达由目的多肽、蛋白内含肽和几丁质结合域组成的“三元”融合蛋白；②得到的“三元”融合蛋白用几丁质柱进行纯化，“三元”融合...

【专利技术属性】
技术研发人员：马义，洪岸，姜石松，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44