一种改造重组酶Cre的方法及其在植物中的应用技术

一种改造重组酶Cre的方法及其在植物中的应用，它涉及将重组蛋白Cre拆分为无活性的N端（NCre）和C端（CCre）两部分，并且对拆分蛋白进行体外原核表达和活性检测，同时分别构建新的Cre/loxp系统，将其应用于植物当中，实现了当N端和C端在同一个植物细胞时恢复重组活性而发生删除，反之则不能。本发明专利技术还包括核定位信号NLS对该系统的影响以及所有的植物表达载体和体外原核表达载体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域中的植物基因工程领域，涉及对重组酶Cre进行拆分，构建新的Cre/loxp系统的方法及应用。
技术介绍
在农业生产实践中，植物转基因技术应用非常广泛，该技术在改良作物品质，提高作物产量，减少除草剂、杀虫剂等农药的使用量等方面做出了巨大贡献。转基因技术给我们带来巨大的经济利益和生态效益的同时，由于该技术不断发展突破并且开发利用的时间尚短，转基因植物在生态环境和食品安全等方面引起的质疑越来越多，贾士荣等认为目前人类还不能对该技术带来的潜在危险性做出正确评价，其主要原因是转基因植物当中的一些外源的选择标记基因的存在。Goldsbrough等采用转座子技术、Komari等采用共转化技术去除转基因植物中的选择标记基因，而应用最早、最广泛、最深入的是位点特异性系统中的Cre/loxp 系统。 Cre/loxp系统广泛应用于动物、植物和酵母等生物体中，尤其在小鼠当中的研究最为深入。Gilbertson等认为Cre/loxp系统是植物生物
中切除转基因植物染色体上外源基因的重要工具。Sauer等早在1987年将该系统应用于酿酒酵母，首次证明了来自原核细胞的Cre重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改造重组酶Cre的方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）将重组蛋白Cre在第59和60个氨基酸之间直接拆分为无活性的N端（NCre）和C端（CCre）两部分，在各个拆分片段之前融合核定位信号NLS；（2）将拆分蛋白NCre和CCre构建到原核表达载体pMAL?C2X上，诱导表达纯化之后，体外检测拆分蛋白的活性；（3）将含有一对同向识别位点loxp的融合基因loxP?nos?loxP构建于pCAMBIA1305.1上得到中间载体pCA?LoxP，以此载体为骨架将拆分蛋白NCre和CCre构建上去，得到含有Cre/loxp系统的植物表达载体；（4）将构建的植物表达载体通过发根农杆菌介导的遗传...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高渊，罗克明，文梦玲，汪丽君，李超锋，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：