一种用于转基因水稻PCR检测的重组标准质粒及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定性和定量PCR检测的重组标准质粒，由如下方法获得：将SEQ?ID?No.1所示的KF6侧翼序列、SEQ?ID?No.2所示的TT51侧翼序列、SEQ?IDNo.3所示的KMD1侧翼序列和SEQ?ID?No.4所示的PLD基因依次连接获得融合片段，再将所得融合片段克隆到载体pMD18-T中，获得所述重组标准质粒，记为pMD-KTK。该重组标准质粒可以替代转基因水稻KF6、TT51和KMD1的阳性标准品，用于对转基因水稻KF6、TT51、KMD1转化体特异性定性和定量PCR检测，具有特异性好、灵敏度高等优点，应用该重组标准质粒进行实际样品定量分析时，样品检测结果的偏差在国际上广泛认可的允许范围内，很好地解决了转基因水稻KF6、TT51、KMD1在检测过程中阳性标准品匮乏的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于三种转基因水稻KF6、TT51、KMDl的定性和定量检测的重组标准质粒，以及含有该重组标准质粒的试剂盒。
技术介绍
自首例转基因番茄“FLAVR SAVR”于1994年在美国批准商业化生产以来，随着转基因技术迅速发展，许多有价值的外源基因导入了植物中，越来越多的转基因作物被批准在不同国家和地区商业化种植。对水稻而言，目前有许多抗虫、抗病、耐除草剂及营养成分改良的转基因水稻研发成功，转基因水稻品系:KF6、TT51和KMDl为我国拥有自主知识产权的抗虫Bt水稻，其中转基因抗虫水稻华恢I号(TT51)在2009年，我国农业部颁发了其在湖北省生产应用的安全证书。为保障在农产品进出口贸易中的利益，各国相继建立转基因标识制度，对转基因检测技术的准确度和灵敏度提出了严格的要求，目前对转基因作物及其产品的检测主要有蛋白质水平检测和核酸水平检测，而由于核酸的提取、保存及稳定性等方面的优势，使得基于核酸检测的转基因检测技术得到快速发展，其中以聚合酶链式反应(PCR)技术发展得最快，转基因作物PCR检测方法又分为4个层次，分别为筛查检测、基因检测、构建特异性检测和转化体特异性检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于转基因水稻KF6、TT51、KMD1的定性和定量PCR检测的重组标准质粒，由如下方法获得：将SEQ?ID?No.1所示的KF6侧翼序列、SEQ?ID?No.2所示的TT51侧翼序列、SEQ?ID?No.3所示的KMD1侧翼序列和SEQ?ID?No.4所示的PLD基因依次连接获得融合片段，再将所得融合片段克隆到载体pMD18?T中，获得所述重组标准质粒，记为pMD?KTK。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐俊锋，陈笑芸，汪小福，缪青梅，朱妍晴，朱青，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：