无血清培养基及CHO细胞中高效表达促红素的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种用于CHO细胞表达促红素的无血清培养基以及CHO细胞中高效表达促红素的培养方法。所述无血清培养基中含有添加剂D-葡萄糖和正丁酸钠，还含有添加剂D-半乳糖、D-甘露糖、N-乙酰氨基葡萄糖中的一种或多种。所述培养方法包括对活化后的种子细胞先采用含血清培养基进行含血清培养，然后采用所述的无血清培养基进行无血清培养。采用本发明专利技术的培养基和培养方法，能够获得高效、稳定表达的重组人促红细胞生成素蛋白，并且提高了促红细胞生成素的糖基化程度，即提高了EPO唾液酸的比重。采用本发明专利技术提供的培养方法每升培养液可获得高达1.0×107IU的重组人促红细胞生成素，表达稳定、培养方法简洁、适合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物细胞培养领域，特别是涉及一种用于CHO细胞表达促红素的无血清培养基以及CHO细胞中高效表达促红素的培养方法。
技术介绍
促红细胞生成素(促红素，Erythropoietin, ΕΡ0)是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素，最早于1906年被发现。它主要来源于肾脏(少量来源于肝脏)，由皮质管周围的间质细胞合成。在基因重组技术诞生之前，EPO主要从贫血患者的尿和绵羊血中提取，得率非常低，且极不稳定，理化和生物性质难以测定，亦无法大规模应用。应用DNA重组技术将促红细胞生成素的基因构建到中国仓鼠卵巢细胞中(CH0细胞)，形成高效表达重组人促红细胞生成素基因的CHO细胞，经过细胞扩增培养，更换表达培养基，收集培养上清，后经分离纯化可制备得到目的糖蛋白-ΕΡ0。在获得表达EPO的CHO细胞株的情况下，培养基的使用对EPO的表达量和糖基化稳定性具有重要影响。常规细胞培养基的EPO表达量约为4000IU/ ml，并且不同培养基的EPO表达量不稳定，所获得的EPO的糖基化程度也存在较大差异，不能很好的满足EPO工业化生产的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对目前的培养基不能满足C本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种无血清培养基，包括基础培养基和添加剂，其特征在于：所述添加剂包括正丁酸钠，还包括Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖中的一种或多种。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴园园，盛光阳，张涤平，吴建祥，张自强，曲和之，黄俊龙，刘乐连，
申请(专利权)人：深圳赛保尔生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：94