提供适合DS细胞的培养的无血清培养基。本发明专利技术涉及用于培养真皮鞘(DS)细胞的、包含血小板衍生生长因子(PDGF)的无血清培养基，或使用了包含PDGF的无血清培养基的、用于培养DS细胞的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于培养真皮鞘(DS)细胞的、包含血小板衍生生长因子(PDGF)的无血清培养基，或使用了包含PDGF的无血清培养基的、用于培养DS细胞的方法。
技术介绍
在美丽的外观方面，毛发极为受到重视。因此，先天或后天因素造成的脱发或头发稀少对许多人来说是深刻的苦恼。特别是在被称为高龄化社会、压力社会的现代社会，头部毛发由于各种各样的后天原因而暴露于脱发危机的机会越来越多。与此相应地，为了给苦于脱发症、头发稀少的人们提供安全且有效地用于再生毛囊的美容或医疗的方法，进行了各种尝试。毛囊是成熟的生物体在几乎整个生涯中反复自身再生的例外器官。阐明其自身再生的机制，作为与通过组织、细胞移植进行的脱发治疗、含有毛囊、皮脂腺的自然上接近且功能也优异的皮肤片的构建等需求高的临床应用相联系的研究而被期待。近年，随着对干细胞研究的关注提高，毛囊上皮干细胞(上皮细胞)的研究迅速发展，另外对于作为毛囊特异性间充质系细胞的毛乳头细胞，其性质也渐渐被判明。已判明毛乳头细胞承担为了毛囊的自身再生而向毛囊上皮干细胞送出激活信号的所谓司令塔的作用，在毛囊再构成评价体系中与毛囊上皮干细胞都是不可缺少的细胞(Kishimoto等，Proc.Natl.Acad.Sc 1.USA(1999) ,Vol.96,pp.7336-7341 ；非专利文献 1)。毛乳头(DP: dermal papi 1 la)、以及包围毛囊的周围的真皮鞘(DS: dermalsheath)均与构成毛囊的大部分的上皮系细胞不同，由来源于间充质系的细胞群构成。关于DS细胞，近年来大量报告了暗示其对毛囊形成的重要性的知识。还报告了在毛乳头大鼠胡须的毛球部切断毛囊移植实验中由DS细胞再生DP细胞，在小鼠中通过移植切断了下半部分的毛囊的DS细胞能诱导毛囊再生。另外、Jahoda等(Development.1992Apr: 114(4):887-97；非专利文献2)还报告了通过将DS细胞移植到人能够诱导毛囊的再构建(Horne KA和JahodaCA.，Development.1992 Nov:116(3): 563-71 ；非专利文献3)。进而Tobin、Paus等的课题组报告了在小鼠毛发周期中DS细胞与DP细胞之间发生细胞移动，在生毛期开始增殖的DP细胞之前，DS细胞就已经开始增殖(Tobin DJ等，J.1nvest.Dermatol.,120:895-904，2003；非专利文献4)。这样，虽然DS细胞很可能对毛囊形成发挥重要作用，但关于其作用机理尚未充分判明。为了弄清楚对毛囊形成的作用机理，需要大量获得DS细胞，但由于能够从生物体组织采集的细胞的数量少，因此需要将这些细胞在生物体外培养并使其高效地增殖。一般地，为了培养DS细胞，使用添加了促进细胞增殖、与培养容器的粘附的血清的培养基，但在这样的条件下，可能抗原性发生变化、混入病原体，另外，还可能由于血清中的详细情况不明的微量成分而造成实验结果的偏差，因而不适合向再生医疗的临床应用、向制药.毒性试验等的应用。近年，随着对再生医疗的关注的提高，进行了各种间充质系干细胞的培养方法、培养基的开发(参照例如日本特开2006-311814号公报(专利文献1)、日本特开2006-325445号公报(专利文献2)、日本特开2005-151237号公报(专利文献3))，但是关于用于培养DS细胞的、含有血小板衍生生长因子(PDGF)的无血清培养基尚不为人们所知。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开2006-311814号公报专利文献2:日本特开2006-325445号公报专利文献3:日本特开2005-151237号公报专利文献4:日本特开平7-274950号公报非专利文献非专利文献1:Kishimoto等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1999)，Vol.96，pp.7336-7341非专利文献2:Jahoda CA等，Development.1992Apr; 114(4): 887-97.非专利文献3:HorneKA和Jahoda CA.development.1992Nov； 116(3):563-71.非专利文献4:TobinDJ等，J.1nvest.Dermatol.，120:895-904,2003非专利文献5:NoburoSato等，Nature Medicine Vol.10,N0.1, Jan.2004.
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的课题是提供适合DS细胞的培养的无血清培养基。用于解决课题的技术方案本专利技术者获得了通过用添加了TOGF、特别是TOGF-BB的无血清培养基进行培养，能够使DS细胞有意义地增殖这样的令人惊讶的知识。因此，本申请包含以下专利技术:—种无血清培养基，是用于培养真皮鞘(DS)细胞的无血清培养基，包含血小板衍生生长因子(PDGF)。根据所述的无血清培养基，所述PDGF是PDGF-BB。根据或所述的无血清培养基，所述真皮鞘(DS)细胞来源于真皮鞘杯(DSC)区域。—种用于培养真皮鞘(DS)细胞的方法，使用了包含血小板衍生生长因子(PDGF)的无血清培养基。根据所述的方法，所述PDGF是PDGF-BB。根据或所述的方法，所述真皮鞘(DS)细胞来源于真皮鞘杯(DSC)区域。专利技术的效果通过本专利技术的无血清培养基，能够高效地培养适合向再生医疗的临床应用、向制药.毒性试验等的应用的DS细胞。【附图说明】图 1 是使用 1) HFDM-1 (_)培养基、2) HFDM-1 (+)培养基、3)溶解了 TOGF-AA (10ng/ml)的HFDM-l(-)培养基、和4)溶解了 roGF-BB(10ng/ml)的HFDM-l(-)培养基作为无血清培养基进行了培养的人DS细胞的第2天和第10天的显微镜照片。图2是显示使用l)HFDM-l(-)培养基、2)HFDM-1( + )培养基、3)溶解了PDGF-AA(1 Ong/ml)的 HFDM-1 (-)培养基、和 4)溶解了 TOGF-BB (1 Ong/ml)的 HFDM-1 (-)培养基作为无血清培养基进行了培养的人DS细胞的细胞数变化(第2、5、10天)的曲线图。图3是使用l)StemProSFMCTS(sup+，Lifetechnologies)、2)溶解了PDGF-BB(lOng/ml)的StemProSFM CTS(sup+，Lifetechnologies)、3)Mosaic hMSC SF CultureMedium(sup+,BD)、4)溶解了PDGF_BB(10ng/ml)的Mosaic hMSC SF Culture Medium(sup+,BD)作为无血清培养基进行了培养的人DS细胞的第2天和第7天的显微镜照片。图4是显示使用l)StemProSFMCTS(sup+,Lifetechnologies)、2)溶解了PDGF-BB(10ng/ml)的StemProSFM CTS(sup+,Lifetechnologies))Mosaic hMSC SF CultureMedium(sup+,BD)、4)溶解了PDGF_BB(10ng/ml)的Mosaic hMSC SF Culture Medium(sup+,B本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种无血清培养基，是用于培养真皮鞘细胞即DS细胞的无血清培养基，包含血小板衍生生长因子即PDGF。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：山西治代，相马勤，吉田雄三，
申请(专利权)人：株式会社资生堂，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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